神经生长因子的分布情况与子宫内膜异位症疼痛的相关性研究

李彦博, 李　新, 谭爰丽, 吴德兵, 洪　莉

(武汉大学人民医院 妇产科, 湖北 武汉, 430060)



神经生长因子的分布情况与子宫内膜异位症疼痛的相关性研究

李彦博, 李新, 谭爰丽, 吴德兵, 洪莉

(武汉大学人民医院 妇产科, 湖北 武汉, 430060)

摘要:目的分析患有子宫腺肌病的患者异位和在位2种情况时内膜组织表达神经生长因子的水平的影响，分析子宫内异症患者与正常子宫内膜的患者之间的区别，以及这种区别与痛经的关系。方法收集本院从2014年1月—2014年12月期间收治的患有子宫肌病的患者22例为实验组。选取同期行绝育术者或子宫肌瘤但子宫内膜正常增殖的患者22例作为对照组。运用免疫组化法检测各个研究对象的神经生长因子表达水平。结果 对照组患者子宫内膜的神经生长因子水平低于子宫内异症患者，差异具有统计学意义(P<0.05); 子宫腺肌病患者中神经生长因子的表达高于在子宫内异症患者，差异具有统计学意义(P<0.05); EMT中度疼痛组和轻度疼痛组的OD值和PGP 9.5的密度明显低于重度疼痛组(P<0.01)。结论子宫内膜中神经生长因子的含量可能可以作为检测患者是否患有子宫内异症的理论依据，也可以作为分析子宫内异症患者的治疗情况提供有利依据。

关键词:子宫内膜异位症; 神经生长因子; 痛经

子宫内膜异位症(EMT)简称内异症，主要症状为不孕、持续性疼痛以及盆腔粘连等，发病率达到了10%～15%。该疾病使患者的生活质量明显下降，但病理上这种疾病呈现一种良性改变。目前认为，子宫内膜异位症造成的疼痛与很多因素有关，但具体的影响因素目前尚无相关报道。就目前的研究而言，影响子宫内膜异位症患者疼痛程度的一个重要因素可能是神经生长因子(NGF)的异常表达，其有可能是引发子宫内膜异位症的原因之一。P物质、神经微丝蛋白以及降钙素基因相关肽的表达与调控都与疼痛介质神经生长因子有关，且神经生长因子还可以增加感觉神经元的数量。此外，神经生长因子还是一种疼痛介质，参与了炎症性疼痛以及痛觉过敏的过程。本实验主要检测了神经生长因子分布情况与疼痛的关系，根据疼痛以及子宫内膜异位症与神经生长因子分泌的关系。同时，比较正常患者与子宫内膜异位症患者的神经生长因子含量，分析其与内异症以及其与疼痛的关系。

1资料与方法

选取2014年1月—12月本院非子宫内膜疾病22例患者作为对照组，包括绝育手术者或者子宫肌瘤者，行子宫肌瘤切除术并且刮宫或者子宫全切患者，经病理证实子宫内膜正常的患者。选取同时期本院行经腹腔镜或者经腹手术且刮宫，病理检验证实为子宫内膜异位症的患者22例作为实验组。所有参与患者年龄30～60岁，月经规律，临床资料齐全。所有患者必须未经过放疗、化疗以及服用过激素类药物，无代谢性、炎症型、免疫型以及内分泌型疾病，没有进行过宫内放置宫内绝育器材，术前6个月内无哺乳以及妊娠史。实验前已签署同意书。

在手术过程中获取的新鲜组织标本，再用10%甲醛固定，进行常规脱水，然后进行石蜡包埋，再用切片机进行连续切片，厚度均为4 pm, 小心放置，备用。各组使用免疫组化的方法测量各组研究对象中神经生长因子的含量，主要步骤按照试剂盒上的说明进行。

2结果

2.1　对照组与子宫内膜异位症组患者体内NGF、PGP 9.5的表达水平比较

对照组患者与子宫内膜异位症组患者体内NGF的表达水平比较结果显示，NGF在2种情况下的表达是有差异的，且NGF在子宫内膜异位症组患者体内的表达比在对照组患者体内表达水平高(P<0.05)。对照组患者的神经生长因子水平略低于腺肌病在位内膜组以及异位内膜组患者，差异具有统计学意义(P<0.05)。PGP 9.5在2种情况下的表达是有差异的，且PGP 9.5在子宫内膜异位症组患者体内的表达高于对照组(P<0.01)。对照组PGP 9.5水平略低于腺肌病异位内膜组以及在位内膜组，差异具有统计学意义(P<0.001)。见表1。

表1　对照组与子宫内膜异位症组患者体内NGF、

2.2　神经生长因子与子宫内膜异位症患者的疼痛关系

EMT轻度和中度疼痛组的NGF的OD值明显低于重症疼痛组。NGF本身在子宫内膜异位症患者的体内高度表达，且随着痛经评分的升高，NGF的表达量呈现更加明显的增加趋势。Pearson相关分析显示，MoD值与痛经评分之间存在着显著的正相关关系(P<0.001)。

3讨论

子宫内膜异位症目前在中国的发病率逐年上升，在普通妇科手术中占据30%以上[1]。子宫内膜异位症会引起很多不适症状，如下腹痛、痛经以及性交痛等，极大地影响了女性的生活，且也已经成为了不育症的病因之一[2]。内异症目前的发病机制尚未研究清楚，它形态多样，病情复杂，且常有复发，转移以及浸润的可能性，已经成为当今妇科的一个难治之症以及成为了研究的热点[3]。目前来看，对内异症发病机制的说法很多，其中的主导理论是内膜细胞随着经血逆流种植，而其中的关键问题在于对模型的建立以及科学的解释。一种常见的生理现象其实就是经血逆流，不过许多经血逆流的人并没有患上子宫内膜异位症[4]。现在对于子宫内膜异位症新概念主要是内异症是指内膜细胞异位发育、生长和出血时引发的症状。其实，内膜细胞的逆流也需要一定的条件，主要有以下4个方面[5]: ① 进入腹腔的内膜细胞需经输卵管; ② 细胞碎片在经血中必须是活的; ③ 内膜细胞被移植到盆腔组织后要有一定的贴服力，以便贴在腔壁上; ④ 内异症在盆腔的分布和脱落细胞的种植。因此，到达盆腔的内膜细胞要经过3道防线，在这一复杂的过程中，局部环境的多种酶、雌激素以及细胞因子都起到了非常重要的作用。非内异症患者与内异症患者的主要差异体现在在位内膜的生物以及分子特质的差异，这些差异都可以追溯到基因的差异上。这些理论可以很好的解释内异症的遗传性以及家族倾向的原因，可以作为内异症基因治疗的基础。

发病机制的新靶点是研究子宫在位内膜的新靶点[6]。对逆流到异地内膜的细胞的命运起到决定作用的是在位内膜的分子生物学、生物化学、遗传学等以及组织 病理学等特征，即在位内膜决定论。它相对比较全面的诠释、解释以及修正了以往的学说，提出了新的解决问题的思路。以往的学说，比如Sampson学说，无法解释某些重要部位的内异症的发生机制，如副中肾管或体腔上皮化生假说则可以的解释阴道直肠内异症、子宫腺肌症、胸腔等部位的内异症发生机制。

内异症的临床病变以及临床病理分类具有广泛性的特点，部位分布呈弥漫性，病理分类表现出多形性[7]。近年来的研究[8]表明，其可以分为4种类型: ① 深部浸润型(DIE); ② 腹膜型; ③ 卵巢型; ④ 特殊部位型。不同的组织其病理特征、治疗发难都具有很大的差别。所以，内异症是一种可以再细分的疾病。腹膜内异症 (PEM)的表现具有明显的阶段性，从红色、黑色到白色病变。这个步骤是内异症换杂合病理组织变换的生物活性变化结果以及病理组织学变化结果。深部浸润型(DIE)主要表现为苗勒管残余性化生，已有活性的间质以及内膜腺体的基础上，平滑肌纤维化或者增生后就成为子宫腺肌症样的结节，但其与腹膜内异症时累及子宫直肠窝是很不同的。对内异症的分期一直存在着争议，内异症分期评分法 (R-AFS)分期具有潜在的观察误差以及主观误差且对生育的估计存在一定的局限性。所以，完善分期，对内异症的治疗以及预后都是一个重要的问题[9]。目前，比较权威的内异症诊断的金标准是腹腔镜检查，但是对所有可疑的内异症患者都实行也不是一个十分可取的方法。所以今后的主要方向就是寻找敏感性和特异性均好的标志物[10]。加拿大对患者的子宫内膜、血清等多种特异性因子进行了综合测评，推出了一种新的实验方式，通过这种方式测得的子宫内膜异位症的患者其阳性率是95%，阴性率是75%。参照国外的情况，根据中国的情况，新的诊断模式可以是分析以下的5种检验指标[11]: ① 不育：继发性或者是原发性不育，特别是继发性; ② 有性交痛、痛经、慢性盆腔疼痛或下腹痛; ③ B超声扫描，结果中附件区不存在壁厚、内部点状增强回声、附件区无回声以及界限不清等情况; ④ 盆腔检查无直肠窝结节、触 痛、附件包块等; ⑤ 血清CA125水平在50到80 kIU/L[12]。

子宫内膜异位症时疼痛也是本病的主要症状之一，但病灶大小不一定与经期疼痛的程度呈正比[13]，卵巢异位囊肿、粘连严重的患者可能并不表现出疼痛[14], 但是散在于盆腔内的小的病灶确可以引起剧烈疼痛。少数患者经历长期的下腹痛，经期疼痛异常加剧。今年来的研究还未对继发性疼经的发病机制研究明确，但是可以造成血管挛缩、子宫平滑肌过强收缩、继发子宫缺血、缺氧的物质是前列腺素含量的异常增高[15]。近年来的研究发现，正常患者的子宫内膜和子宫内膜异位症的患者的子宫内膜不一样，其纤维分布尤其不同，EMT的发病很有可能就与这些纤维的不同有关。神经生长因子表达的异常增加被认为与子 宫内膜异位症患者痛经的发生有关，进一步的研究发现，非EMT患者与EMT患者的在位内膜相比，神经纤维稀疏，且高表达p75NTR以及TrkA。这些物质在子宫内膜异位症患者的病灶处的表达异常升高，足以说明痛觉过敏以及痛经都与其有一定的关系。神经生长因子是一种靶源性的神经营养因子，支持神经元的生长分化、存活以及功能的维持，在调整神经病理性疼痛的过程中起到了至关重要的作用。很多学者认为，子宫内膜异位症患者的痛经与神经生长因子的异常表达增加密切相关。本研究通过对腺肌病患者内膜组织以及正常患者内膜组织中神经生长因子的表达情况，以及它与痛经的关系，揭示了神经生长因子在子宫内膜异位症的患者中与其痛经的发生、发展以及结局有着密不可分的关系。结果显示，对照组患者的神经生长因子水平略低于腺肌病异位内膜组以及在位内膜组患者(P<0.05)。Pearson相关分析显示，MoD值与痛经评分之间存在着显著的正相关关系(P<0.001)。

参考文献

[1]刘丹, 张治宁, 哈春芳, 等.子宫内膜异位症相关性不孕患者腹腔镜术后生殖预后的影响因素分析[J]. 实用妇产科杂志, 2013, 29(1): 52.

[2]刘京芳, 陈景伟, 杜慧兰, 等. 补肾温阳化淤法治疗子宫内膜异位症30例[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(8): 332.

[3]SJ H, BW O. The dynamics of nuclear receptors and nuclear receptor coregulators in the pathogenesis of endometriosis[J]. Human Reproduction Update, 2014, 20(4): 467.

[4]于玲, 田永杰. 子宫内膜异位症发病相关因素的临床研究[J].山东大学学报: 医学版, 2013, 51(2): 79.

[5]Moustafa M M, Elnasharty M A A. Systematic review of the outcome associated with the different surgical treatment of bowel and rectovaginal endometriosis[J]. Gynecological Surgery, 2014, 11(1): 37.

[6]张春燕, 耿爱芝. 促性腺激素释放激素激动剂联合克龄蒙在子宫内膜异位症保守性手术后的应用[J]. 广东医学, 2013, 34(3): 454.

[7]陈小平, 陈靓芬, 黄丽萍, 等. 活血化瘀中药联合腹腔镜对轻型子宫内膜异位症不孕患者血清MCP-1, RANTES的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(4): 319.

[8]L S, Gel-H F, AH. N. Vitamin D in endometriosis: a causative or confounding factor[J]. Metabolism-clinical & Experimental, 2014, 63(1): 32.

[9] 罗李莉, 徐红. 保守性手术后联合GnRH-a治疗子宫内膜异位症相关不孕有效性的系统评价[J]. 现代妇产科进展, 2013, 22(3): 206.

[10]吴德斌, 洪莉, 洪莎莎, 等. 反向添加疗法治疗子宫内膜异位症疗效的Meta分析[J]. 实用妇产科杂志, 2013, 29(1): 25.

[11]张文缓, 李海霞.子宫内膜异位症患者血清及腹腔液CA125测定的临床价值[J].现代中西医结合杂志, 2013, 22(8): 874.

[12]Q P, X L, T T, et al. The expression profile of micro-RNA in endometrium and endometriosis and the influence of ovarian steroids on their expression[J]. Molecular Human Reproduction, 2014, 13(11): 797.

[13]吴修红, 刘旭航, 朴成玉, 等. 中药治疗子宫内膜异位症的实验研究方法及展望[J].中医药信息, 2013, 30(1): 124.

[14]范宝光, 任琛琛. GnRHa联合反加疗法用于腹腔镜术后子宫内膜异位症的临床观察[J].国际妇产科学杂志, 2013, 40(1): 75.

[15]GA D, N V, C B, et al. ESHRE guideline: management of women with endometriosis[J]. Human Reproduction, 2014, 3(3): 400.

Research on the correlation between distribution of nerve growth factors and endometriosis pain

LI Yanbo, LI Xin, TAN Yuanli, WU Debing, HONG Li

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,ThePeople′sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,Hubei, 430060)

ABSTRACT:ObjectiveTo analyze the influence of the level of nerve growth factor in uterine adenomyosis patients and normal patients, to research the difference between them and to explore its relation with dysmenorrhea. MethodsA total of 22 uterine adenomyosis patients from January 2014 to December 2014 were selected as the experimental group and 22 patients with normal intrauterine membrane were selected as control group. The content of their nerve growth factor of these patients were detected. ResultsNerve growth factor levels in endometriosis patients were higher than those with normal endometrium(P<0.05). And the expression of nerve growth factor was higher than those with normal endometrium (P<0.05). The OD value and PGP 9.5 density in EMT medium pain group and mild pain group were lower than that in the server pain group (P<0.01). ConclusionThe occurrence of endometriosis may be associated with nerve growth factor, which is powerful evidence for the treatment of endometriosis.

KEYWORDS:endometriosis; nerve growth factor; dysmenorrhea

基金项目:湖北省自然科学基金(ZRY1153)

收稿日期:2015-04-26

中图分类号:R 473.71

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)17-045-03

DOI:10.7619/jcmp.201517014