新疆4县马腺疫链球菌血清抗体检测与分析

王彩蝶，苏　艳＊，波拉提，李　海，欧阳文，王　东，王培明，朱义忠，党道伟（.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐8005；.新疆昭苏县畜牧兽医局，新疆伊犁85000；.新疆伊犁种马场，新疆伊犁85000）



新疆4县马腺疫链球菌血清抗体检测与分析

王彩蝶1，苏艳1＊，波拉提2，李海2，欧阳文3，王东3，王培明3，朱义忠3，党道伟3
（1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052；2.新疆昭苏县畜牧兽医局，新疆伊犁835000；3.新疆伊犁种马场，新疆伊犁835000）

摘 要：为了解新疆养马集中县域马腺疫链球菌的感染情况及流行特点，在新疆特克斯县、昭苏县、富蕴县和吉木乃县采集2 549份马血清样品，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测马血清中的马腺疫链球菌抗体。结果表明，被检样品的马腺疫链球菌抗体平均阳性率为23.93%，昭苏县及特克斯县的血样中马腺疫链球菌抗体阳性率较高，分别为30.30%和26.64%，吉木乃县抗体阳性率为4.34%。结果表明，新疆不同地区马腺疫链球菌血清抗体阳性率差异显著（P＜0.05），抗体阳性率随马匹年龄的增长不断提高，0～1岁马抗体阳性率最低（P ＜0.01），马腺疫链球菌抗体阳性率性别差异不显著（P＞0.05）。

关键词：马腺疫链球菌；酶联免疫吸附试验；血清学调查；分析

马腺疫（Strangles）是一种由马腺疫链球菌马亚种引起的马属动物的急性接触性传染病，以发热、上呼吸道黏膜炎症、下颌淋巴结肿胀化脓为特征［1］。该病呈世界性分布，Jorm L R等［2］调查了澳大利亚新泽威尔士州马腺疫链球菌感染率，该州平均每年马腺疫发病率为2.1%。目前发现康复动物在临床症状消失后仍会继续携带有马腺疫链球菌，在痊愈后4周～6周才检测不到病原菌［3-4］。不同地区马匹马腺疫链球菌的血清学调查对制定有针对性的防控措施具有重要的意义。

新疆地区是全国养马最多的地区，近年来随着马产业的迅速发展，马腺疫又开始频繁发生，在有些地区发病率可达80%～90%，当年马驹的发病率可高达100%［5］，该病不仅阻碍了马匹的生长发育，甚至导致死亡，给养马业造成较大的经济损失。目前有关新疆地区马腺疫流行情况的研究资料很少，为了解新疆地区马腺疫在马群中的流行和分布情况，本研究采用ELISA方法对新疆地区的4个县马场及个体养殖户的2 549份马血清进行了马腺疫链球菌的血清学调查，掌握新疆地区马腺疫链球菌感染情况，以期为马腺疫的防控提供参考。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株 马腺疫链球菌菌株由新疆农业大学动物医学学院微生物实验室分离鉴定并保存。

1.1.2主要试剂和仪器 脱脂奶粉为上海生工生物工程技术服务公司产品；兔抗马IgG酶标抗体为美国Sigma公司产品；酶标仪为美国Bio-Tek有限公司产品。

1.1.3血清样本 2013年采自新疆养马较集中的4个县不同年龄的马。其中特克斯县1 131份、昭苏县901份、富蕴县241份、吉木乃县马血清276份，共2 549份。将采集的血样斜置于4℃冰箱过夜，待析出血清后，将血清吸出装入另一灭菌离心管中，溶血者弃去。

1.2方法

1.2.1全菌抗原的制备 将马腺疫链球菌接种于含50mL/L犊牛血清的Todd-Hewitt（TH）液体培养基中37℃培养16h～18h后转接培养。4 000r/min离心15min沉淀重悬于PBS中，90℃热灭活30min。1.2.2 马腺疫抗体检测 参照相关文献ELISA检测方法加以改进［6-8］，加50mL/L戊二醛200μL/孔，37℃作用2h，用PBS洗4次。将稀释好的全菌（1× 108CFU/mL）悬液加入戊二醛处理后的酶标板中100 μL/孔37℃干燥18h～24h。包被结束后弃包被液，加入PBST洗涤4次，再加入50g/L脱脂奶粉200μL/孔进行封闭，37℃孵育2h。用PBST洗涤4次，加入稀释至同一抗体水平的待检血清100μL/孔，37℃孵育1h。PBST洗4次，加入1∶20 000倍稀释的酶标兔抗马IgG 100μL/孔，37℃孵育

1h。用PBST洗4次。加TMB显色液100μL/孔37℃显色10min～20min。之后加入1mol/L的硫酸100μL终止反应。测定OD 450nm值，检测的每批样品均设标准阴性阳性和空白对照。

1.2.3结果判定标准 临界值（Cut off value）=（阴性对照-空白对照）平均OD 450nm值×2.1倍。（血清样本-空白对照）OD450nm＞临界值为马腺疫链球菌抗体反应阳性。

2　结果

2.1不同地区马腺疫链球菌抗体检测结果

各地检出的马腺疫链球菌抗体阳性率从4.34% 到30.3%（表1），平均阳性率为23.93%。特克斯县与昭苏县马腺疫链球菌抗体阳性率最高，分别为30.30%和26.64%；富蕴县和吉木乃县阳性率较低，分别为6.22%和4.34%。特克斯县与昭苏县显著高于富蕴县吉木乃县和和静县（P＜0.01），特克斯县与昭苏县相比差异不显著（（P＞0.05），富蕴县与吉木乃县相比差异不显著（（P＞0.05）。说明被调查马匹马腺疫链球菌的血清阳性率具有明显的地区差异性。

表1　2013年新疆部分地区马血清样本马腺疫链球菌抗体检测结果Table 1 Detection results of horse serum antibodies against strangles from part areas of Xinjiang in 2013

2.2不同年龄马感染马腺疫链球菌情况

本研究对马血清样本进行了马腺疫链球菌抗体检测，按不同年龄分别进行分析（表2）。结果显示0 ～1岁马血清阳性率平均为7.85%，低于10%，随着年龄增长，血清阳性率不断提高。2岁～3岁马血清阳性率平均为20.74%，4岁～5岁马血清阳性率平均为27.84%，6岁～7岁马血清阳性率平均为27.82%，8岁～9岁马血清阳性率平均为29.95%，10岁以上马血清阳性率平均为34.20%。结果表明被调查地区马匹马腺疫链球菌感染率随年龄的增长而增加，0～1岁马感染率最低，与其他年龄段相比差异极显著（P＜0.01）。2岁～9岁马匹的血清阳性率之间差异不显著（P＞0.05）。

表2　2013年新疆部分地区不同年龄马血清样本的马腺疫链球菌抗体检测结果Table 2 Detection result of strangles antibodies from horses of different ages in part areas of Xinjiang in 2013

2.3不同性别马马腺疫链球菌血清抗体检测结果

对部分马血清按不同性别进行了马腺疫链球菌血清阳性率的统计与分析见表3。结果显示，雄性马的平均阳性率为24.4%，雌性马平均阳性率23.8%。马腺疫链球菌抗体阳性率没有明显的性别差异（P＞0.05）。

2.4对某地区内孕马及小于1岁的幼驹马腺疫链球菌血清抗体检测结果

为了解孕马及马驹马腺疫链球菌抗体阳性情况，对孕马及幼驹较集中地区马血清进行马腺疫链球菌血清学调查。114例检测样品中，58例孕马血清样品的血清阳性率为60.3%，56例幼驹血清样品的阳性率为19.6%（表4）。

表3　不同性别马马腺疫链球菌血清阳性率情况的统计Table 3 The statistic results of positive rates of horse serum antibodiesagainst strangles in different genders of horses in Xinjiang

表4　对孕马及马驹感染马腺疫链球菌情况的统计Table 4 The statistic results of strangle antibodies from seraof pregnent horses and foals in Xinjiang

3　讨论

本次调查采用ELISA方法对采集的新疆地区4个县的2 549份马血清样本进行了检测，共检出马

腺疫阳性样本610份，平均阳性率为23.93%。因被调查的马匹未接受过该病的疫苗免疫接种，检测的结果表明新疆不同地区均存在马腺疫链球菌的感染。特克斯县和昭苏县血清阳性率较高，分别为30.3%和26.64%。吉木乃县、富蕴县的感染率明显较低，分别为4.34%、6.22%。该数据也表明新疆地区马腺疫的流行存在明显的区域性差异，这可能是由于不同地区的马匹的饲养数量、饲养规模、饲养方式、环境条件、饲养管理水平的不同而导致的差异。本研究的结果提示，不同地区马腺疫的防控应在不同的地区采取相应的防控措施。

本次研究调查了不同年龄段马群中的抗体阳性率情况，检测结果显示，随着年龄的增加马腺疫链球菌抗体阳性率呈上升趋势，0～1岁马驹的抗体阳性比率最低，为7.85%，低于23.93%的平均阳性率，我们对孕马和幼驹的调查数据也支持这一结果。这与马腺疫在流行过程中1岁左右的幼驹最易发病是一致的［9-10］。因这些被调查的马匹未接受过该病的疫苗免疫接种，血清中的特异抗体主要为马腺疫链球菌感染马产生的抗体，该抗体可在马体内长期存在，因此马腺疫血清阳性率会随着年龄增长越高。此次调查的结果还提示我们，应当加强和重视对1岁左右马驹的综合管理和免疫接种等防控工作。从公马和母马血清学的调查结果来看，不同地区的检测结果显示，公马和母马的血清阳性率分别为26.31% 和27.21%，说明马腺疫链球菌的感染不具有明显的性别差异（P＞0.05）。

本次对新疆部分地区马腺疫链球菌血清学调查结果表明，新疆的几个养马区县普遍存在不同程度的马腺疫链球菌感染，并且具有区域性分布和年龄特征，血清阳性马匹主要集中在养马规模较大的昭苏和特克斯县。提示这些地区应在该病血清学监测的基础上，加强防控，针对该病在马群中的流行情况和特点，建立起完善的综合管理措施，平时应加强饲养管理与预防。

参考文献：

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Detection and Analysis of Serum Antibodies aganist Streptococcus equi subspecies equi in Four Counties of Xinjiang

WANG Cai-die1，SU Yan1，BO La-ti2，LI Hai2，OUYANG Wen3，WANG Dong3，WANG Pei-ming3，ZHU Yi-zhong3，DANG Dao-wei3
（1.College of Veterinary Medicine，Xinjiang Agricultural University，Urumqi，Xinjiang，830052，China；2.Animal Husbandry and Veterinnary Bureau of Zhaosu County，Yili，Xinjiang，835000，China；3.Yili Stud Farm，Yili，Xinjiang，835000，China）

Abstract：Analysis data of the epidemiological situation of strangles in the horse herds in part of Xinjiang provide reference basis for the prevention of strangles.In this study，2 549horse serum samples collected from different counties were tested for Streptococcus equi subspecies equi antibodies using ELISA.The results showed that 610 horse sera were positive，and the positive rate was 23.93%.The positive rates of strangles in Zhaosu（30.30%）and Tekesi（26.64%）were higher than that in others.The lowest positive rate was 4.34%in Jimunai county（P＜0.01）.The survey indicated that with the increase of age the infecton rate of strangle was growing up.The positive rate has significant difference in different areas of Xinjiang and the positive rate of 0-1year old was the lowest. There is no significant difference in gender（P＞0.05）.

Key words：Streptococcus equi subspecies equi；ELISA；serological investigation；analysis

通讯作者

作者简介：王彩蝶（1989-），女，新疆人，硕士研究生，主要从事兽医微生物及免疫学研究。＊

基金项目：国家科技支撑计划项目（2012BAD46B01）；自治区普通高校重点学科基础兽医学科项目

收稿日期：2014-08-14

中图分类号：S858.21；S855.11

文献标识码：B

文章编号：1007-5038（2015）05-0125-03