大肠癌患者胸苷酸合成酶表达水平及对预后的影响

李进科, 付建军, 张永国, 李智斌

(湖北省老河口市第二医院 胸外科, 河北 老河口, 441800)

大肠癌患者胸苷酸合成酶表达水平及对预后的影响

李进科, 付建军, 张永国, 李智斌

(湖北省老河口市第二医院 胸外科, 河北 老河口, 441800)

摘要:目的探讨大肠癌患者肿瘤组织中胸苷酸合成酶(TS)表达水平及对预后的影响。方法选择80例大肠癌患者的肿瘤组织标本和癌旁组织标本作为研究材料，应用免疫组化法对标本中的TS表达水平进行检测和比较；对患者的性别、年龄、浸润深度、分期、分化程度、5年生存率、总生存期(OS)、无病生存期(DFS)等指标及影响因素进行比较。结果肿瘤组织标本中的TS高表达比例显著高于癌旁组织标本(χ2=76.201, P<0.05); TS高表达患者和TS低表达患者在性别构成、年龄、肿瘤浸润深度、肿瘤分期、肿瘤原发部位、肿瘤分化程度等一般临床资料的差异均无统计学意义(P>0.05); TS高表达患者与TS低表达患者的5年生存率、OS、DFS的差异均无统计学意义(χ2=2.390、0.928、1.035, P>0.05); COX多因素回归结果显示，Dukes′分期与患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相关性(P<0.05), 而TS表达水平及其他临床指标与患者的OS和DFS均无相关性(P>0.05)。结论大肠癌组织呈现TS的高表达状态，但是大肠癌组织中的TS表达水平与患者的临床指标无显著相关性，也不会对患者的预后产生显著的影响。

关键词:大肠癌; 胸苷酸合成酶; 免疫组化法; 5-氟脲嘧啶; 预后

大肠癌是中国常见的恶性肿瘤之一，早期大肠癌患者如得到及时的诊治，其5年生存率可超过90%，但是中、晚期大肠癌患者的预后则多不佳。近年来，随着纤维乙状结肠镜、结肠镜检查及分子筛查技术在临床上广泛应用，大肠癌的早期诊断率得到了一定程度的提高[1]，但是接受常规的术后+化疗的治疗方案后，大肠癌患者的预后却具有较大的差异，这与肿瘤组织中的胸苷酸合成酶(TS)的表达水平差异有关，TS基因的多态性及所导致的TS表达水平差异是与大肠癌的发生发展、转移、复发及其中多种相关因子的互相作用密切相关的关键因素[2], 也造成了肿瘤细胞对5-氟脲嘧啶(5-Fu)类化疗药物的耐药性差异，但是这种差异是否可对患者的预后造成直接影响尚存在争议。本研究针对大肠癌患者肿瘤组织中TS的表达水平及对预后的影响进行了观察和分析，现将研究的具体情况报告如下。

1资料与方法

1.1　一般资料

选取2007年1月—2013年12月在本院接受根治术的原发性大肠癌患者80例，所有纳入患者均经病理学检查证实为大肠癌，其中结肠癌病例为74例，直肠癌病例为6例，男61例，女19例，患者年龄为35～78岁，平均年龄为(56.8±11.3)岁；患者的Dukes′临床分期为2例为A期，58例为B期，20例为C期。肿瘤病理分型为：5例为乳头状腺癌, 66例为管状腺癌，7例为黏液腺癌，1例印戒细胞癌，1例为未分化癌。肿瘤分化程度为: 11例为高分化，58例为中分化，10例为低分化，1例为未分化。所有纳入患者均于术后接受了5-Fu类化疗4～6周期。

1.2　观察指标和检测方法

对所有纳入患者的切除肿瘤组织和癌旁组织中的TS表达水平进行检测和比较，方法为选取切除肿瘤组织和癌旁组织的石蜡标本，进行组织切片、微波修复抗原后以TS 1∶100为一抗稀释度，以山羊血清代替一抗作为阴性对照，用已知TS表达阳性的大肠癌组织切片作阳性对照，应用免疫组化法(SP法)检测TS 的表达水平，试剂盒购自美国罗氏公司。染色后TS表达阳性细胞的胞浆呈棕黄色，取4个有代表性高倍视野中计数细胞中的阳性细胞比例作为计算依据，计数细胞数为100个，阳性细胞数比例<5%判定为(-)，阳性细胞比例为5%～25%判定为(+)，阳性细胞数比例为26%～50%判定为(2+)，阳性细胞比例为51%～75%判定为(3+)，阳性细胞比例>75%判定为(4+)，当阳性细胞比例≤50%时判定为TS低表达，当阳性细胞数比例>50%时判定为TS高表达；对肿瘤组织具有不同TS表达水平的患者的性别、年龄、浸润深度、分期、分化程度等一般临床资料进行观察和比较；对患者进行随访，对其5年生存率、总生存期(OS)、无病生存期(DFS)等指标及影响因素进行观察和比较。

2结果

2.1　患者肿瘤组织与癌旁组织的TS表达情况的比较

患者的肿瘤组织和癌旁组织标本中的TS高表达的比例分别为73.7%和5%, 2组差异有统计学意义(χ2=79.201,P<0.05)，见表1。

表1　患者肿瘤组织与癌旁组织的TS表达情况的比较[n(%)]

与癌旁组织比较，*P<0.05。

2.2　肿瘤组织TS表达水平与患者一般临床资料的关系

在纳入患者中，肿瘤组织TS高表达患者为59例，占73.7%; 肿瘤组织TS低表达患者为21例，占26.3%。两类患者在性别构成、年龄、肿瘤浸润深度、肿瘤分期、肿瘤原发部位、肿瘤分化程度等一般临床资料的差异均无统计学意义(P>0.05), 见表2。

表2　肿瘤组织TS表达水平与患者一般临床资料的关系[n(%)]

2.3　患者肿瘤组织TS表达水平与生存情况的关系

本组患者的随访时间为5～90个月，中位随访时间为53个月，无失访病例，患者的生存时间为5～82个月。肿瘤组织TS低表达患者的5年生存率为83.75%，中位OS为37个月，中位DFS为19个月，肿瘤组织TS高表达患者5年生存率73.75%，中位OS为35个月，中位DFS为18个月，两类患者的5年生存率、OS、DFS的差异均无统计学意义(χ2=2.390、0.928、1.035,P>0.05)。COX多因素回归结果显示, Dukes′分期与患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相关性(P<0.05), 而TS表达水平及其他临床指标与患者的OS和DFS均无相关性(P>0.05), 见表3。

表3　患者OS和DFS的COX回归分析

3讨论

大肠癌是临床上最为常见的消化道恶性肿瘤之一，如得不到早期诊断和治疗，患者的死亡率较高。近年来，中国大肠癌的发病率呈现显著递增的趋势。由于大肠癌患者的预后存在着较大的差异，近年来研究者开始从分子生物学和遗传学角度筛选可用于预测大肠癌患者预后的生物标志物，目前研究较多的标志物主要包括表皮生长因子受体信号通路中的KRAS、BRAF、NRAS、PIK3CA、PTEN等分子生物标志物及ras基因、C-erbB-2基因、MMR基因以、微卫星不稳定性(MSI)、染色体18q杂合性缺失(18qLOH)、CpG岛甲基化型(CIMP)等，这些基因的突变及功能异常均可影响大肠癌的发生、发展、药物疗效及预后[3-4]。而应用免疫组化方法对肿瘤组织细胞中的标志性蛋白进行检测具有结果精确、操作简便、成本低廉的特点，目前应用免疫组化方法证实的与大肠癌患者预后相关的生物标志物主要包括内皮生长因子、层黏连蛋白、Ang-2、Tie-2、血小板衍生生长因子A等，而且应用这些生物学标志物中的几种进行联合检测，可更加准确地反映大肠癌浸润转移并评估其预后[5-6]。此外，还有研究[7]应用免疫组化法测定大肠癌组织中的微血管密度作为判断大肠癌患者预后的重要参考指标。

TS是DNA合成的关键酶，能够在组织细胞的DNA合成和修复过程中发挥关键性作用，TS基因的多态性可对细胞组织中的TS蛋白表达水平产生影响，导致个体对癌症的易感性产生差异并对癌症患者的治疗疗效和总体预后产生影响[8]。近年来的研究已证实，TS的表达水平不仅与食管癌、胃癌、胰腺癌等消化系统肿瘤的发病具有相关性，而且还可对个体对新生儿白血病、非小细胞肺癌的易感性产生影响。同时也有研究[9]证实，术后接受紫杉醇联合5-Fu辅助化疗的胃癌患者的DFS与其肿瘤组织中的TS表达水平具有相关性，TS可作为预测胃癌患者预后的辅助指标。本研究结果显示，肿瘤组织标本中的TS高表达比例显著高于癌旁组织标本(χ2=76.201,P<0.05), 说明在大肠癌的肿瘤组织中, TS呈现高表达状态，其表达水平显著高于癌旁的正常组织; TS高表达患者和TS低表达患者在性别构成、年龄、肿瘤浸润深度、肿瘤分期、肿瘤原发部位、肿瘤分化程度等一般临床资料的差异均无统计学意义(P>0.05), 说明大肠癌组织中的TS表达水平与上述临床资料均无相关性; TS高表达患者与TS低表达患者的5年生存率、OS、DFS的差异均无统计学意义(χ2=2.390、0.928、1.035,P>0.05)。COX多因素回归结果显示, Dukes′分期与患者的OS(RH=2.813)和DFS(RH=4.516)具有相关性(P<0.05)，而TS表达水平及其他临床指标与患者的OS和DFS均无相关性(P>0.05), 说明大肠癌患者应用手术+5-Fu化疗后的预后仅与患者的Dukes′分期具有相关关系，而肿瘤组织中TS表达水平对于患者预后无显著的影响，这与最近国内研究得出的TS表达情况与患者的年龄、hMLH1、hMSH2蛋白表达情况有关，但与预后无明显相关性的结果一致[10]。近年来的研究还证实, TS高表达的肿瘤组织对5-Fu化疗更为敏感，其原因是抗代谢物分子对于肿瘤细胞的作用机制是在结构上和它们干扰的代谢物相似，而5-Fu是通过竞争性抑制TS活性而抑制胸腺嘧啶的合成，从而选择性地抑制肿瘤细胞DNA或RNA的合成，从而达到干扰细胞分裂、抑制肿瘤增殖的作用[11]。

参考文献

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Expression level of thymidylate synthase in patients with

colorectal cancer and its influence on prognosis

LI Jinke, FU Jianjun, ZHANG Yongguo, LI Zhibin

(DepartmentofThoracicSurgery,TheSecondHospitalofLaohekou,Laohekou,Hebei, 441800)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expression level of thymidylate synthase (TS) in colorectal cancer tissue and its influence on the patients′ prognosis. MethodsThe cancer tissue specimens and the para-cancerous tissues specimens of 80 patients with colorectal cancer were selected as the research materials. The immunohistochemical method was used to detect and compare the expression level of TS in the specimens. Clinical data of age, depth of invasion, tumor stage and tumor differentiation degree, 5 years survival rate, total survival (OS), disease free survival (DFS) of the patients and the influencing factors were observed and compared. ResultsThe ratio of tumor tissue specimens with TS high expression in cancer tissues was significantly higher than that in para-cancerous tissues (χ2=76.201, P<0.05). There were no significant differences of the general clinical data of sex, age, depth of invasion, tumor stage, primary tumor site, tumor differentiation degree between the patients with TS high expression and the patients with low TS expression (P>0.05). There were no significant differences of 5 years survival rate, patients with OS, DFS of the patients between the patients with TS high expression and the patients with low TS expression (χ2=2.390, 0.928, 1.035, P>0.05). The multivariate COX regression showed Dukes′ staging of the patents was correlated with the OS (RH=2.813) and DFS (RH=4.516) of the patient's (P<0.05). The expression level of TS and other clinical indexes of the patients had no correlation with OS and DFS (P>0.05). ConclusionThe colorectal cancer tissue shows a high expression level of TS, but the expression level of TS in colorectal cancer tissues is not significantly correlated with the clinical indexes of the patients, and it has no significant impact on the prognosis of the patients.

KEYWORDS:colorectal cancer; thymidylate synthase; immunohistochemistry; 5- fluorouracil; prognosis

收稿日期:2015-03-02

中图分类号:R 735.3

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)11-050-04

DOI:10.7619/jcmp.201511015