组氨酸三联体及肺癌抑制因子1基因表达与宫颈癌发生及人乳头瘤病毒感染的相关性

李　菲

(武汉大学人民医院, 湖北 武汉, 430060)

组氨酸三联体及肺癌抑制因子1基因表达与宫颈癌发生及人乳头瘤病毒感染的相关性

李菲

(武汉大学人民医院, 湖北 武汉, 430060)

摘要:目的探讨肺癌抑制因子1(TSLC1)及组氨酸三联体(FHIT)在正常宫颈组织、宫颈鳞状上皮内病变及宫颈癌组织中的表达及其与人乳头瘤病毒(HPV)的关系。方法采用细胞免疫组化法测定35例正常子宫组织、40例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、38例高度鳞状上皮内病变(HSIL)及35例子宫癌组织中TSLC1及FHIT的表达情况。采用HC2基因杂交捕获仪(HC-Ⅱ)检测各组HPV感染情况。结果HSIL、宫颈癌组织中FHIT、TSLC1阳性表达率显著低于正常宫颈组织及LSIL，而HPV阳性率则高于正常宫颈组织及LSIL(P<0.05)。FHIT表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。TSLC1表达与临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。在正常宫颈组织、LSIL、HSIL及宫颈癌组织中, FHIT、TSLC1表达与HPV感染呈负相关(P<0.05)。结论FHIT、TSLC1表达缺失发生在HSIL阶段, FHIT、TSLC1表达缺失与HPV感染参与宫颈鳞状上皮细胞内病变、宫颈癌发生、侵袭及转移具有密切的关系。

关键词:肺癌抑制因子1; 组氨酸三联体; 宫颈癌; 人乳头瘤病毒

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，严重威胁中国女性生命健康。目前普遍认为人乳头瘤病毒(HPV)感染是引起宫颈癌变的重要因素，但HPV感染并非是宫颈癌发生的唯一因素[1]。近年相关研究[2]指出，除了HPV感染外，原癌基因的激活及抑癌基因的失活在癌症发生及进展中也起到关键的作用，因此通过检测相关癌症基因表达情况将有助于临床尽早识别HPV感染者宫颈病变进展情况，可为宫颈癌早期诊断提供指导。肺癌抑制因子1(TSLC1)及组氨酸三联体(FHIT)是近年新发现的抑癌基因，其表达情况与宫颈癌病情进展及转归具有密切的关系[3]。本研究探讨FHIT与TSLC1基因表达与宫颈癌发生及HPV感染的关系，现报告如下。

1资料与方法

1.1　临床资料

选取2012年6月—2014年6月本院病理科石蜡包埋宫颈组织标本进行研究，其中低度鳞状上皮内病变(LSIL)40例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)38例及子宫颈癌35例。另选取35例正常子宫组织标本为对照组，所有标本均来自于慢性宫颈炎或子宫肌瘤组织。宫颈癌组年龄22～68岁，平均年龄(45.3±2.2)岁，<60岁20例，≥60岁15例；病理分级：中低分化癌 17例，高分化癌18例。根据国际妇产科联盟(FIGO)临床分期: Ⅰ期 10例，Ⅱ期 8例，Ⅲ期 10例，Ⅳ 7例。肿瘤大小: >5 cm者14例，≤5 cm者21例。淋巴转移 18例，无淋巴转移17例。所有病例术前均未接受放化疗治疗。

1.2　方法

1.2.1细胞免疫组化法(SABC)测定FHIT与TSLC1表达：将上述各样本组织剪碎后采用D-Hank′s试剂液(美国Gibco公司)进行冲洗，并加入1 mg/mL的DNASeI以及2.5 g/L胰蛋白酶(由美国Gibco公司提供)混合液，并在37 ℃中孵化60 min, 并在含有小牛血清的DMEM(由美国Gibco公司提供)培养基中终止消化。样液反复吹打后过滤弃上清液，并用D-Hank′s试剂洗涤2次，再次离心5 min, 弃掉上清液，留置沉淀物，采用SABC法测定FHIT、TSLC1，兔抗人FHIT多克隆抗体、兔抗人TSLC1多克隆抗体及SABC试剂盒均由美国Sgima公司提供，操作过程严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2.2HPV检测:采用HC2基因杂交捕获仪进行检测，HC2基因杂交捕获仪以及HPVDNA检测试剂盒均由美国Digene公司提供，阴道内窥镜由德国Leica公司提供。

1.3　结果判断

① FHIT、TSLC1阳性判断：在倍数为100的显微镜下观察细胞着色情况，根据着色程度由轻至重可分别记为0、1、2、3分。随机选取5个视野点，采用倍数为400的显微镜进行观察，每个视野进行细胞计数，以500个细胞作为一组计算单位，细胞阳性百分率：1分为小于10%, 2分为10%～50%, 3分为大于50%。两项评分乘积为综合得分，综合得分>3分为阳性，≤3分为阴性; ② HPV阳性判断：标本中检出HPV含量≥1.0 pg/mL为阳性, HPV含量<1.0则判断为阴性。

2结果

2.1　不同宫颈组织中FHIT与TSLC1阳性表达及HPV感染情况

HSIL、宫颈癌组织中FHIT、TSLC1阳性表达率显著低于正常宫颈组织及LSIL, 而HPV阳性率则高于正常宫颈组织及LSIL, 差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1　不同宫颈组织中FHIT与TSLC1阳性表达及HPV感染情况[n(%)]

与正常组织相比，*P<0.05; 与LSIL组相比，#P<0.05; 与HSIL组相比，△P<0.05。

2.2　FHIT与TSLC1与宫颈癌临床特征的关系

FHIT表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。TSLC1表达与临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05), 见表2。

表2　FHIT与TSLC1与宫颈癌临床特征的关系[n(%)]

2.3　不同病理组织中FHIT与TSLC1与HPV感染的关系研究

正常宫颈组织、LSIL、HSIL及宫颈癌组织中FHIT、TSLC1表达与HPV感染呈负相关(P<0.05), 见表3。

表3　不同病理组织中FHIT与TSLC1与HPV感染的关系研究[n(%)]

3讨论

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，其病死率位居女性恶性肿瘤病死率的第2位[4]。目前普遍认为高危型HPV感染与宫颈癌的发生具有密切的关系，在几乎所有的宫颈癌组织中均可检测到高危HPV DNA，但宫颈癌患者从感染HPV至最终发展成为宫颈癌需要数年甚至数十年的时间，且大多数HPV感染为一过性，患者可自行消退，仅有小部分患者最终进展为浸润性宫颈癌，可以推测宫颈癌的发生及进展是多阶段多因素共同作用引起的[5-6]。本研究中HSIL、宫颈癌组织中HPV阳性率则高于正常宫颈组织及LSIL，差异有统计学意义(P<0.05)，从而提示HPV感染与宫颈癌癌前病变具有密切的关系。随着宫颈组织病变程度的增加，患者HPV感染率显著增加，从而提示宫颈病变的发生与HPV感染具有密切的关系，结果与既往研究[8]一致。

近年随着分子生物学的进展，人们发现抑癌基因失活及原癌基因激活与肿瘤的发生、转移及浸润具有密切的关系。肺癌抑制因子1(TSLC1)最早是从非小细胞癌中发现的抑癌基因，其属于免疫球蛋白超家族细胞黏附分子(IgCAMs)，与神经细胞黏附分子NCAM1及NCAM2具有高度同源性，可参与细胞黏附及转移[9]。FHIT基因可由阿非迪霉素诱发机体脆性位点HPV16及FRA3B位点获得，它可参与细胞周期调控，诱导细胞凋亡，目前已发现多种肿瘤细胞株中存在FHIT表达异常、缺失或甲基化[10]。王伟等[11]研究发现不典型增生细胞中FHIT蛋白表达呈减弱或缺失，而在正常上皮细胞中则表达正常。Liu等[12]以腺病毒载体作为THIT基因导入宫颈癌细胞中，结果显示FHIT蛋白阴性细胞株中发生Caspases 8介导的细胞凋亡，从而表明FHIT可促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长。Huang等[13]通过动物体外实验表明TSLC1突变可引起肿瘤的发生及转移。Liang等[14]研究指出，TSLC1抑制恶性肿瘤的作用机制可能与其能有效促使半胱天冬酶凋亡，激活多聚酶底物裂解有关。本研究中HSIL、宫颈癌组织中FHIT、TSLC1阳性表达率显著低于正常宫颈组织及LSIL，从而表明FHIT、TSLC1表达缺陷是引起宫颈病变的重要因素，研究结果与既往文献一致。这提示临床工作者可通过检测宫颈组织中FHIT、TSLC1表达情况，从而判断患者宫颈癌发生风险，将有助于宫颈癌的早期筛查及预防。

参考文献

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Correlation between histidine triad, inhibitory factor in lung cancer 1 gene expressions and occurrences of cervical cancer and human papillomavirus infection

LI Fei

(ThePeople′sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,Hubei, 430060)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expressions of inhibitory factor in lung cancer 1 (TSLC1) and histidine triad (FHIT) in normal cervical tissue, cervical squamous intraepithelial lesions and cervical cancer and their correlation with human papillomavirus (HPV). MethodsThe expressions of TSLC1 and FHIT in 35 cases of normal uterine tissue cells, 40 cases of low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 38 cases of high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) and 35 cases of uterine carcinoma were detected by immunohistochemical method. The HPV infection in each group was detected by Hybrid Capture (HC-Ⅱ). ResultsThe positive expression rates of the FHIT and TSLC1 expression in HSIL, cervical carcinoma were significantly lower than those in normal cervical tissue and LSIL, and positive rate of HPV was significantly higher than normal cervical tissue and LSIL (P<0.05). FHIT expression was correlated with tumor grade, clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). TSLC1 expression was correlated with clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05). In normal cervical tissue, LSIL, HSIL and cervical cancer, expressions of FHIT and TSLC1 were negatively correlated with HPV infection (P<0.05). ConclusionLoss of FHIT and TSLC1 expressions occurs in the HSIL stage, and loss of FHIT and TSLC1 expressions were closely correlated with HPV infection involved in cervical squamous cells, the occurrence of cervical cancer, invasion and metastasis.

KEYWORDS:lung cancer inhibitory factor 1; histidine triad; cervical cancer; human papillomavirus

收稿日期:2014-08-23

中图分类号:R 737.33

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)07-097-04DOI: 10.7619/jcmp.201507028