二级生物安全实验室生物安全流程的建立及实施

赵晓玲，黄粱镔，王晶晶

（南桐矿业有限责任公司总医院检验科，重庆400802）

二级生物安全实验室生物安全流程的建立及实施

赵晓玲，黄粱镔，王晶晶

（南桐矿业有限责任公司总医院检验科，重庆400802）

对二级生物安全实验室拟从事的实验活动进行相应的生物安全风险评估，根据评估结果设计及建立合理的实验室生物安全流程，并建立有效的管理及监督机制。实验室应分区明确，污染区、半污染区、清洁区，实验室人流、物流、标本流、污物流应严格分开。建立合理的生物安全流程，并保证其有效实施，对防止生物安全意外事件的发生具有重要意义。

安全； 实验室； 医院管理； 二级生物安全实验室

传染性非典型肺炎事件暴露出了我国实验室生物安全管理存在疏漏之处，也引起了国家对实验室生物安全的高度重视[1-2]。但目前国内许多实验室只重视生物安全制度及应急预案的建立，却忽略了生物安全流程的建立。医院等级复评审在生物安全部分也非常强调实验室生物安全流程的合理性。实验室生物安全流程是所有实验活动均应遵守的程序，建立一个合理的生物安全流程对减少或避免职业暴露等生物安全意外事件的发生具有重要意义。本院实验室在生物安全日常管理及等级医院复评审中建立合理的生物安全流程中积累了一些经验，在此与同行探讨、分享。

1 明确实验室拟从事的实验活动

根据病原微生物的危害等级进行分级。二级生物安全实验室接触的病原微生物是二类或三类生物危害的病原微生物，从事的是该两类病原微生物的标本转运、标本处理（离心、浓集等）、标本检测及检后标本及仪器废液处理等活动，不从事结核杆菌、艾滋病病毒的培养及药敏试验。

2 对所从事的实验活动进行风险评估

二级生物安全实验室从事的是二类或三类病原微生物检测，实验室所接触的标本可能潜在含有二类或三类病原微生物，具有一定的传染性，因此，有必要在实验室建立及实验活动开展前对拟从事的实验活动进行风险评估[3]，根据评估结果进行实验室设计、制度及流程建立和采取必要的安全防护[4]。二级生物安全实验室主要存在如下风险：（1）人员事先未被告知实验室的生物危害，未进行相应防护而误闯实验室，导致感染的风险；（2）标本或菌液转运过程中存在由于不慎滑落、泼洒，导

致标本泄露或职业暴露的风险[5]；（3）在涂片镜检时存在标本溅入眼内、呼吸道吸入或溅在手背、身上的风险；（4）移液器加样时存在血清溅入眼内的风险；（5）混旋菌液和离心、加样时产生气溶胶的风险；（6）接种环灭菌存在感染性物质飞溅及散布的风险；（7）酶标板洗板后拍板存在残留液溅入眼内导致感染的风险；（8）感染性废弃物转运中存在污染环境的风险；（9）仪器废液存在未消毒直接倒入下水道污染环境的风险；（10）生物安全柜高效过滤器不定期检测老化后引起的实验室污染的风险[6]等。

3 实验室生物安全流程的建立

3.1 实验室分区 实验室是一个工作、休息、学习的地方，而接触的标本可能具有传染性，因此，实验室应严格分为3个区域：污染区、半污染区和清洁区[7]。从事实验活动的区域均应划分为污染区，而工作人员休息、学习、存放生活用品的地方均应划分为清洁区，但如果从污染区直接进入清洁区可能会带入一些污染物，故还应在二者之间设立一个缓冲区域作为半污染区，作为穿脱工作服、洗手、实验室准入登记的地方。整个实验室外均为清洁区。在实验室污染区内因微生物实验室及分子生物实验室的专业特性，在实验活动区域外还应设立缓冲区，微生物实验室主要从事的是细菌检测，设立缓冲区是为避免或减少细菌对实验室其他区域的污染。分子生物实验室设立缓冲区是为避免或减少在基因提取、扩增过程中实验室其他区域对其的污染。

3.2 实验室生物安全流程的制定

3.2.1 人流、物流、标本流、污物流、空气流应分开 人流是人员包括外来访问人员进出实验室的通道；物流是实验室检测试剂、耗材、办公用品、设备等清洁物资进出实验室的通道，物资试剂库房应考虑设在清洁区，通过半污染区与实验室污染区相连；标本流是检测标本进入实验室的通道；同理，污物流是检后标本及实验过程中被污染的废弃物运出实验室的通道，污物流尽量选择离污物电梯最近的通道。对于空气流，目前仅对开展临床基因扩增检验的实验室有强制要求，其余未进行强制性要求，有条件的实验室可考虑进行规划。

3.2.2 易导致职业暴露及污染环境的操作流程 根据实验室风险评估，标本离心时标本管应加盖，并关闭离心机盖；样品管拔盖、细菌接种、涂片、混悬菌液等均应在生物安全柜内进行。

3.2.3 标本接收和存放的流程 接收人员必须进行相应的二级生物安全防护后在标本接收间进行工作。标本接收间应为污染区，接收后应直立放置在架子上，按照实验室平面图指定的标本通道传入实验室内。检后标本应在冰箱内加锁保存规定时间后高压灭菌交给医疗垃圾接收人员。对高致病性标本或菌毒种应实行双人双锁存放在专用冰箱内，并做好保存记录。

3.2.4 物流的流程 实验室购买或领取的试剂、耗材及办公用品须按照实验室平面图指定的物流通道进入实验室库房或实验区域（污染区）。

3.2.5 人员进出实验室的流程 实验室大门应采用门禁系统，工作人员凭密码或指纹识别进入实验室。所有实验室工作人员日常进出实验室只能从实验室平面图指定的人流通道进出实验室，进出实验室应在半污染区穿脱工作服，并按“七步法”洗手离开。

3.2.6 实验室消毒的流程 实验室台面、地板、门把手、椅子消毒由清洁工每天清晨配置500 mg/L有效氯消毒液进行消毒。3个区域（即污染区、半污染区、清洁区）的地拖及毛巾应以不同颜色标注分开，不能交叉使用。因有机氯消毒液的腐蚀性，仪器设备表面、生物安全柜内壁及柜内物品消毒应该用75%乙醇擦拭。临床基因扩增实验室实验结束后在以上基础消毒流程上还应该用移动紫外灯按规定调整高度和时间对实验室台面或实验仪器进行消毒。移液器每次使用完后用75%乙醇擦拭消毒。体液、尿液及仪器废液按废液有效氯质量浓度为1 000 mg/L的要求加入含氯消毒片，消毒后倒入下水道。血气分析仪仪器废液因废液瓶为一次性用品，无法加入消毒片，应在废液达到2/3容积时更换，进行高压蒸汽灭菌消毒。

3.2.7 实验室感染性废弃物的处理流程[8]实验室所有感染性废弃物（包括细菌培养皿、实验过程产生的医疗废弃物、保存期满后的血液及体液标本）由各专业组交给实验室清洁工，做好交接记录，统一经消毒、高压灭菌后通过实验室平面图指定的污物通道交给专门接收人员，做好消毒及接受记录。

4 保证生物安全流程有效实施的措施

4.1 建立实验室准入制度及培训考核制度 实验室新进人员（包括新工作人员、实习生、进修生、清洁人员等）进入实验室前均应进行生物安全知识及流程的培训与考核。外来访问者应经实验室主任批准并告知相应的生物危害后进行相应的防护才能进入实验室。动物、免疫抑制剂使用者、儿童不能进入实验室。

4.2 建立生物安全自查制度 设置专职生物安全监督员对实验室人流、物流、标本流、污物流、操作流程、消毒流程是否按照实验室规定程序执行进行固定频率（每月）自查，定期召开生物安全管理会议通报生物安全自查情况，实施奖惩，对不符合要求的项目制定整改措施，并在下月安全自查中评价整改效果，达到持续改进的目的。总之，根据实验室风险评估结果，建立一个合理、全面的实验室生物安全流程，制定有效的管理体系及制度，通过培训后准入及日常的安全检查，定期召开生物安全管理会议进行奖惩，跟踪评价不符合要求项目的整改效果，能督促实验室日常活动按照既定的生物安全流程实施，达到持续改进的目的。

参考文献

[1]徐长春.生物安全实验室的管理与安全[J].中国医学装备，2008，5（6）：49-50.

[2]高玉潮.卫生检疫实验室生物安全管理[M].北京：军事医学科学出版社，2013.

[3]刘红英．病原实验室生物安全建设及风险评估概述[J]．职业与健康，2010，26（14）：1650-1652．

[4]刁奇志，董林玲，王婷玲，等.二级生物安全实验室建设及生物安全管理[J].中华医院感染学杂志，2012，22（19）：4305-4307.

[5]林南清，宋国伟.检验人员的职业暴露及生物安全防护[J].检验医学与临床，2011，8（6）：767.

[6]周红玲，王永全，于建平，等.北京市西城区医疗机构实验室生物安全现状调查[J].中国预防医学杂志，2007，8（2）：132-136.

[7]杨桂嘀.检验科医院感染的问题与对策[J].中华医院感染学杂志，2009，19（17）：2309-2310.

[8]刘晓平，邵小华，蔡朝阳，等．临床实验室生物安全管理[J]．中华全科医学，2011，9（12）：1966-1967.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.11.062

：B

：1009-5519（2015）11-1749-03

2015-01-18）

赵晓玲（1979-），女，重庆万盛人，主管检验师，主要从事常规化学及生物安全管理工作；E-mail：690856472@qq.com。