一测多评法测定牡丹皮中多种指标成分的含量

一测多评法测定牡丹皮中多种指标成分的含量

张晨，邱实，贡济宇*

(长春中医药大学药学院，长春 130117)

摘要：目的建立一测多评法同步测定丹参中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA的含量，为控制丹参药材的质量提供依据。方法用超高效液相色谱法对丹参药材进行分析，计算其中1个脂溶性成分“丹参酮IIA”，通过建立该成分与其他成分的校正因子，同时计算3个脂溶性与3个水溶性成分的含量。结果建立的对丹参药材的含量测定方法快速有效，且使用一测多评方法仅需要1个成分的标准品，即可进行定量分析。结论本研究建立了牡丹皮药材的UHPLC含量测定方法，从含量测定方面控制牡丹皮药材的质量。本研究建立的牡丹皮含量测定方法简单、快速、稳定且成本低廉。

关键词：一测多评法；超高效液相色谱；牡丹皮；含量测定

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.015

中图分类号：R284.2文献标志码：A

文章编号：2095-6258(2015)06-1137-02

基金项目：吉林省科技厅

作者简介：张晨(1987-)，女，硕士，主要从事中药学研究。

收稿日期:(本栏责任编辑：张海洋2015-10-21)

*通信作者：贡济宇，女，教授，硕士研究生导师，电话-(0431)81672207，电子信箱-67461608@qq.com

Multiple index Components ofCortexMoutanRadicisby SSDMC Method

ZHANG Chen,QIU Shi, GONG Jiyu*

(School of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveUsing SSDMC methods to simultaneous determination of five major components inCortexMoutanRadicis, providing method to control the quality of medicinal materials ofCortexMoutanRadicis. MethodsThe use of UHPLC technique to establish the method for multiple contents determination ofCortexMoutanRadicis, obtained UHPLC chromatogram and the related data. Using SSDMC Methods to quantitative analysis of five index components ofCortexMoutanRadicis.ResultEstablished the method for determination ofCortexMoutanRadiciscould be simultaneous quantitative analysis five index components in 13 minutes. The SSDMC method only needs one standard reference to quantitative analysis. Methodological study demonstrated that SSDMC method was met with the traditional Chinese medicine quality standards. ConclusionThis study established the UHPLC content determination method to control the quality ofCortexMoutanRadicis, which is simple, rapid, stable and low cost.

Keywords：SSDMC；UHPLC；CortexMoutanRadicis；content determination

牡丹皮为毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮。具有清热凉血，活血化瘀的作用[1-2]。近年来，对于牡丹皮的质量控制方法多为测定不同产地、不同批次、不同厂家的丹皮酚含量[3]及对于牡丹皮药材HPLC指纹图谱构建[4-5]，牡丹皮药材HPLC特征图谱研究[6]等，可以看出对于牡丹皮药材进行全面、深入的质量控制研究较少。本研究运用超高效液相色谱(UHPLC)，结合一测多评方法，建立牡丹皮药材多组分同时测定的含量测定方法，为牡丹皮药材的质量控制标准提供更简便有效的方法。

1材料

超高效液相色谱系统：Agilent 1290 美国安捷伦科技公司；BRANSON B3500S-DTH 超声波清洗仪，购自荷兰必能信有限公司；牡丹皮药材：产地为安徽；丹皮酚对照品 (批号：110708-200506)，购自中国药品生物制品检定所；芍药苷对照品、苯甲酰芍药苷对照品、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷对照品、苯甲酸对照品均购自上海友思生物技术公司；水：Mili-Q 超纯水仪制备。

2方法

2.1色谱条件Agilent Zorbax SB-C18(2. 1 mm×100 mm，1.8 μm)。流动相为乙腈-水(含0.1%磷酸),流速0.8 mL/min,柱温25 ℃ ,检测波长230 nm。2.2检测波长的选择牡丹皮中5种目标成分芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷的全波长紫外吸收，其中芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷的最大吸收均为230 nm，且一测指标成分丹皮酚在230 nm下有着第二强的紫外吸收，故选择230 nm作为本研究的吸收波长。2.3对照品溶液的制备2.3.1对照品贮备液A取芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.821 8 mg芍药苷，0.126 8 mg苯甲酸，1.072 8 mg 1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷，1.896 mg丹皮酚，0.282 6 mg苯甲酰芍药苷的溶液，即得。于4 ℃保存备用。2.3.2对照品溶液B精密量取对照品贮备液0.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含芍药苷0.041 09 mg，苯甲酸0.006 34 mg，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷0.053 64 mg，丹皮酚0.094 8 mg ,苯甲酰芍药苷0.014 13 mg的溶液，即得。2.4供试品溶液的制备取本品粉末(过四十目筛)约0.15 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇30 mL，称定，准确至标准差0.01 g，密塞，超声处理30 min(565 W，80 kHz)，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，过滤，50 mL容量瓶定容，摇匀，取1.5 mL离心，取上清，即得。2.5稳定性实验供试品溶液在室温条件下放置 0、4、8、12、24 h后，芍药苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷的峰面积RSD分别为0.761%、0.703%、0.874%、1.117%和0.498%。表明处理后的样品在1 d内稳定。2.6重复性实验重复性采用3个不同浓度(高、中、低)，每个浓度各分别制备3 分供试品溶液测定。芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷的平均含量分别为1.265%、0.160%、1.287%、2.247%、0.353%，RSD分别为1.154%、0.437%、1.201%、0.593%、0.716%。2.7校正因子重现性考察采用独立3次配制的7 个系列混合对照品溶液的峰面积和相应浓度计算一测多评法中的校正因子，以3次校正因子测定结果的平均值作为一测多评法的校正因子。以芍药苷为内参物，校正因子为1，计算出,苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷的相对校正因子依次为0.25、0.53、0.49、0.64。各校正因子的RSD为0.34%、0.16%、0.00%、0.34%。

3结论

分别称取30批牡丹皮药材粉末，按供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液各8 μL注入超高效液相色谱仪进行测定。采用外标法和一测多评法测定芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍药苷的含量，对2种含量测定方法进行对比,结果显示2种方法测得含量的RSD范围为0.20%~1.86%，表明一测多评方法稳定，可靠。根据30批牡丹皮药材含量情况，建议含量限度为：按干燥品计芍药苷不少于0.5%，苯甲酸不少于0.06%，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖苷不少于0.6%，丹皮酚不少于1.3%，苯甲酰芍药苷不少于0.2%。

参考文献：

[1]王智民，高慧敏，付雪涛,等.“一测多评”法中药质量评价模式与方法学研究[J].中国中药杂志,2006,2(23):1925.

[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京:中国医药科技出版社,2010.

[3]张咏梅,刘晓燕,张月婵,等. HPLC法测定不同厂家牡丹皮中丹皮酚的含量[J]. 黑龙江医药,2010,23(2):151.

[4]姜潇,张君仁. 牡丹皮HPLC指纹图谱的研究[J]. 齐鲁药事,2005,24(4):209.

[5]周刚,吕庆红. 牡丹皮不同部位有效成分含量测定及指纹图谱化学成分研究[J]. 中国中药杂志,2008,33(18):2070.

[6]邓祖磊,黄丽丹,程世云,等. 牡丹皮HPLC特征图谱研究[J]. 安徽医药,2011,15(7):825.