复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型的影响

林波，向丽，刘宇，石金凤，张桂，曾勇，孟宪丽，陈小睿

复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型的影响

林波，向丽，刘宇，石金凤，张桂，曾勇，孟宪丽，陈小睿

目的：研究复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭（ARF）模型的影响。方法：用50%的甘油按照10 mL．kg-1分别在大鼠两侧后肢肌肉注射造成急性肾衰模型，将大鼠分为模型对照组、复方保肾颗粒三个剂量组（3.6，1.8，0.9 g．kg-1）、醋酸地塞米松组，另设空白对照组。连续灌胃4天后测定大鼠尿蛋白、血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、血清总蛋白量、K+、Na+含量及肾脏指数。结果：复方保肾颗粒能明显降低甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型的尿蛋白、Scr及BUN的含量，明显降低肾脏指数。结论：复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型具有一定的保护作用。

复方保肾颗粒；急性肾功能衰竭；尿蛋白；肌酐；尿素氮

急性肾功能衰竭( acute renal failure, ARF) 是指由各种原因引起的肾功能在短期内（几小时至几天）急剧下降， 导致体内代谢产物潴留, 水、电解质、酸碱平衡紊乱的临床综合征[1]。复方保肾颗粒是由黄芪、络石藤、鱼腥草等中药组成的临床科研经验方，主要用于治疗慢性肾炎之风湿热扰肾，肾络瘀痹证[2]。方中黄芪为君药，现代研究表明黄芪对机体免疫系统、肾脏系统具有药理作用，能增强机体体液免疫与细胞免疫功能，保护肾小球血管内皮细胞结构完整性，还具有较好的利尿作用[3]。本实验选用了经典急性肾衰动物模型—甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型，观察复方保肾颗粒对该模型的治疗作用，为临床应用提供理论依据。

1 实验材料

1.1 药物

复方保肾颗粒（浸膏粉），由成都中医药大学中药炮制与制剂教研室提供，批号：20120511；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号：20130123。

1.2 动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重140～160 g，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（川）2008-24。

1.3 试剂

甘油（丙三醇），成都市科伦化工试剂厂，批号20120310；氯化钠注射液，四川科伦药业股份有限公司生产，批号M12091019；尿蛋白定量测试盒、肌酐测试盒、尿素氮测试盒、血清总蛋白测试盒、血清K+、Na+测试盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 仪器

Varioskan全波长多功能酶标仪，美国ThermoFisher Scientific；分析电子天平，FA1104型，上海良平仪器仪表有限公司；电子天平，T500型，常熟市双杰测试仪器厂；尿蛋白定性试纸，桂林优利特医疗电子有限公司。

2 方法

2.1 动物造模

SD大鼠，雄性，体重140～160 g。预先置于代谢笼中3日适应环境，观察自由饮水条件尿量是否稳定。实验前禁水24 h，以50%甘油按10 mL．kg-1分别在大鼠两侧后肢肌肉注射，完后大鼠自由进食和饮水，一般在2 h后出现血红蛋白尿，48 h形成稳定模型（以尿蛋白试纸检测阳性为模型成功）[4～6]。

2.2 分组与给药

将造模成功的大鼠按体重分层，随机均衡分为5组，每组10只，分别为：模型对照组(0.3%CMCNa溶液)，复方保肾颗粒3个剂量组（3.6、1.8、0.9 g．kg-1），醋酸地塞米松组(0.1 mg．kg-1)。另设空白对照组（0.3%CMC-Na溶液），共6组，每组10只大鼠，按上述剂量连续给药4天。

2.3 动物处死

末次给药后将大鼠放入代谢笼禁食不禁水，收集大鼠尿液，进行尿蛋白含量测定。次晨，全部大鼠麻醉后腹主动脉取血，分离血清测BUN、Scr、血清总蛋白量及血清中K+、Na+含量，分离大鼠肾脏，称重，计算肾脏指数。

2.4 统计方法

3 实验结果

3.1 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影响

与空白对照组相比，模型对照组动物尿蛋白、血清Scr、BUN含量显著升高，与模型对照组相比，复方保肾颗粒中、低剂量组，醋酸地塞米松组动物尿蛋白、血清Scr、BUN含量明显降低（p＜0.01或p＜0.05），复方保肾颗粒高剂量组也有降低趋势，但无显著性差异。结果见表1。

表1 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型给药结束后尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影响（±s,n=10）

表1 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型给药结束后尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影响（±s,n=10）

注：与模型对照组比较，* p＜0.05, ** p＜0.01

组别 剂量（g．kg-1）尿蛋白（mg．L-1）Scr (μmol．L-1) BUN (mmol．L-1)空白对照组 —— 575.2±91.5** 99.4±6.3** 7.0±1.9**模型对照组 —— 1299.8±172.2 150.8±12.6 17.6±1.9醋酸地塞米松组 0.1 mg．kg-11144.6±143.5*133.4±9.6**12.9±4.4**复方保肾颗粒高剂量组 3.6 1184.4±154.0 143.0±8.4 15.5±3.4复方保肾颗粒中剂量组 1.8 1136.5±152.1*138.7±13.7* 13.4±5.9*复方保肾颗粒低剂量组 0.9 1137.7±164.7*139.7±8.3* 13.6±2.8*

3.2 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型血清总蛋白、血清K+、Na+的影响

与空白对照组相比，模型对照组动物血清总蛋白显著降低，血清Na+显著升高，模型对照组相比，复方保肾颗粒各剂量组含量动物血清总蛋白、血清Na+含量均无明显变化（p＞0.05），但均有改善趋势。各组动物血清K+均无明显差异（p＞0.05）。结果见表2。

表2 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型血清总蛋白、血清K+、Na+的影响（±s,n=10）

表2 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型血清总蛋白、血清K+、Na+的影响（±s,n=10）

注：与模型对照组比较，*p＜0．05， **p＜0．01

组别 剂量（g．kg-1）血清总蛋白(μg．mL-1) K+ (mmol．L-1) Na+(mmol．L-1)空白对照组 —— 77.4±21.5** 5.55±0.88 109.3±17.8**模型对照组 —— 52.9±13.5 5.32±0.82 131.7±7.8醋酸地塞米松组 0.1 mg．kg-169.9±12.0* 5.47±0.77 117.6±11.0*复方保肾颗粒高剂量组 3.6 59.5±21.5 5.13±0.64 121.2±15.4复方保肾颗粒中剂量组 1.8 62.3±13.6 5.79±0.71 123.0±11.1复方保肾颗粒低剂量组 0.9 53.6±17.8 5.84±0.92 121.7±13.4

3.3 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型肾脏系数的影响

与空白对照组相比，模型对照组动物肾脏系数极其明显的提高，与模型对照组相比，复方保肾颗粒高、中、低剂量组，醋酸地塞米松组动物肾脏系数均有不同程度的明显降低（p＜0.01或p＜0.05），结果见表3。

表3 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型肾脏系数的影响（±s,n=10）

表3 复方保肾颗粒对甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型肾脏系数的影响（±s,n=10）

注：与模型对照组比较，* p＜0．05， ** p＜0．01

组别 剂量（g．kg-1）肾脏系数（g/g体重×100%）空白对照组 —— 0.920±0.069**模型对照组 —— 2.162±0.441醋酸地塞米松组 0.1 mg．kg-11.653±0.435**复方保肾颗粒高剂量组 3.6 1.791±0.412*复方保肾颗粒中剂量组 1.8 1.658±0.344**复方保肾颗粒低剂量组 0.9 1.622±0.332**

4 讨论

复方保肾颗粒由黄芪、络石藤、鱼腥草等配伍为用，其中君药黄芪补脾升阳、利尿消肿，全方组合具有祛风清热利湿，活血通络的作用。本实验所采用的甘油法致大鼠急性肾功能衰竭模型属横纹肌溶解所致，外伤性和非外伤性横纹肌溶解所致的急性肾功能衰竭约占临床所有急性肾衰病例的15%～20%，且横纹肌溶解性急性肾衰透析治疗效果欠佳，死亡率高。大量临床研究证实他汀类药物引起横纹肌溶解性急性肾衰的发生率约为0.1%[7]。大鼠注射50%甘油后，肾血流减少，肾小管内皮细胞肿胀，增大了肾血管阻力，血管节段性坏死，外膜纤维化，血管自身调节功能丧失，导致肾小球滤过率下降。另外，肾小球及肾小管周围纤维蛋白沉积，血管内血瘀积，血栓形成, 血流不畅, 导致肾小球滤过率下降，肾小管坏死[8]。

在本实验中，造模后的大鼠模型在肾功能和肾脏方面表现出明显改变，主要体现在尿蛋白浓度升高，血清肌酐、尿素氮含量升高，导致血清总蛋白含量下降，肾脏指数明显增大，表明造模成功。结果显示，复方保肾颗粒能降低模型大鼠的尿蛋白、血肌酐、血尿素氮的含量，并在一定程度上减轻了肾脏的病理损害。关于复方保肾颗粒治疗该动物模型的作用机制，还有待于我们进一步深入研究。

[1] 叶任高,陆再英,谢毅,等.内科学[M].北京:人民卫生出版社, 2004: 536.

[2] 林波,刘宇,向丽,等.复方保肾颗粒对家兔C-BSA异种血清免疫复合型肾炎模型的影响[J].中药药理与临床,2014,30(3):121.

[3] 熊明彪.黄芪的药理作用及临床研究进展[J].亚太传统医药,2013,9(10):70.

[4] 朱虹,杨进.急性肾功能衰竭动物模型的研究现状和评价[J].实验动物科学与管理, 2005, 22(2): 44.

[5] 黎祥胜,韩社香,张蓉,等.中华肾宁片对甘油诱导急性肾衰大鼠肾功能的影响[J].中成药, 2000,22 (4):289.

[6] 国明,侯传香,郝玲玲,等.肾安康胶囊对急性肾功能衰竭模型大鼠的保护作用[J].中国新药杂志, 2012, 21(18):2202.

[7] 凌伯勋,刘克清,陈双秀,等.卡托普利对甘油诱导的急性肾衰的保护作用及其机制探讨[J].中南药学, 2008, 6(3):270.

[8] 邓虹珠,金伟军,廖锡麟,等.急性肾功能衰竭病理模型的设计和方法[J].中国中药杂志, 1998, 23(1):48.

（责任编辑：陈思敏）

The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin

LIN Bo, XIANG Li, LIU Yu, SHI Jinfeng, ZHANG Gui, ZENG Yong, MENG Xian-li, CHEN Xiao-rui//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin were investigated.Method:Acute renal failure rats were induced by injection of 50% (v/v, i.m) glycerin into the leg muscle (10 mL．kg-1). And then rats were divided into model group, Fufangbaoshen granule group (3.6、1.8、0.9 g．kg-1), dexamethasone group. Normal control group was also used in the experiment. After intragastric administration for 4 days, the indexes including urine protein, SCR, BUN and serum total protein, the content of K+and Na+, and kidney coeffcient of rats were tested.Result:Fufangbaoshen granule could not only signifcantly decrease the contents of urine proteins，Scr and BUN, but also decrease rats' kidney index.Conclusion:Fufangbaoshen granule shows protective effect on acute renal failure rat induced by glycerin.

Fufangbaoshen granule; acute renal failure; urine protein; Scr; BUN

R 285.5

A

1674-926X(2015)04-006-03

四川省科技厅省青年科技创新研究团队专项计划项目（2014TD0007）

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

林波，在读硕士研究生，主要从事中药药效与毒理研究Tel:15828511724 Email:linbo0319@qq.com

陈小睿，副教授，硕导，主要从事中药药效与毒理研究 Tel:13882071427 Email:icelolly@yahoo.cn

2014-09-10