Ki-67和p53在乳腺癌中的表达与临床病理分期的关系

杨 猛，戴殿禄，崔国忠，陈 亮，丁明剑

(河北省沧州市中心医院，河北 沧州 061001)

临床研究

Ki-67和p53在乳腺癌中的表达与临床病理分期的关系

杨 猛，戴殿禄，崔国忠，陈 亮，丁明剑

(河北省沧州市中心医院，河北 沧州 061001)

目的探讨蛋白Ki-67和p53表达与乳腺癌临床病理分期的关系及其对判定预后的价值。方法回顾性分析417例乳腺癌患者病理资料，并对Ki-67和p53的表达情况与临床分期的相关性进行分析。结果本研究共纳入417例乳腺癌患者，蛋白Ki-67阳性385例(92.3%)，蛋白p53阳性155例(37.2%)，三阴型56例(13.4%)，非三阴型361例(86.6%)。蛋白Ki-67和p53的表达与乳腺癌病理组织分型有关(P均<0.05)，而与发病时间、淋巴结转移、乳头浸润、TNM分期、病理组织分级、发病年龄、是否绝经、发病部位和直径等因素无关。在三阴性和非三阴性乳腺癌病理组织中，蛋白Ki-67表达差异无统计学意义(P>0.05),p53表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ki-67和p53在乳腺癌中高表达，对判断预后有一定的价值。

乳腺肿瘤；病理；蛋白；非组蛋白核蛋白；抑癌基因

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，我国乳腺癌患者多为绝经前的女性，发病年龄相对早。乳腺癌组织中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progestrone receptor，PR)和表皮生长因子受体( Human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表达对预后的判断及治疗方案的选择具有重要的指导意义[1]。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是指ER、PR、HER2均表达缺失的乳腺癌，预后最差[2]。因此寻找TNBC的预后因素和生物学指标，对判断疾病进展和指导治疗等尤为重要。Ki-67定位于肿瘤细胞核，是肿瘤细胞增殖的可靠指标[3]。p53定位于细胞核，是肿瘤细胞异常增生的重要标志,对乳腺癌的治疗具有重要的指导意义[4]。本研究针对我院2013年1月—2014年1月收治的417例乳腺癌患者的病理资料进行回顾性分析，了解Ki-67与p53表达与各预后影响因素的关系，旨在探讨Ki-67和p53对患者预后的影响。

1 临床资料

1.1一般资料 收集上述时期我院收治的经手术后证实417例乳腺癌患者的临床资料，均经术后病理证实为原发乳腺癌；患者临床病理资料完整，可进行TNM分期、组织分级及免疫组化检查；患者术前均无放化疗史，无内分泌治疗史。免疫组织化学检测结果TNBC 56例，非TNBC 361例。

1.2组织学评价

1.2.1生化指标 ER及PR阳性定义为≥1%肿瘤细胞核内表达激素受体标记阳性；HER-2阳性定义为免疫组化检测()，即>10%的肿瘤细胞呈现强的完整的细胞膜着色，()着色时需行荧光原位杂交(FISH)确定[5]。Ki-67定位于细胞核、呈棕黄色颗粒弥漫分布，阳性>5%。以上试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司(TA500265)。p53定位于细胞核，呈棕黄色颗粒，阳性>10%,试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司(PR-256)。所有试剂均按照说明书配比浓度进行稀释。染色步骤: 切片标本采用二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水。应用0.5%过氧化氢溶液对内源性过氧化物酶进行封闭(15min)，切片放入柠檬酸缓冲液(pH 6.0)中，微波加热法进行抗原修复(150s)。PBS溶液充分漂洗3次，每次3min；再用3%的普通马血清室温进行孵化20min，以阻断非特性抗体。倾去上清液，分别滴加一抗(p53，Ki-67)置于4℃冰箱中过夜12h。取出标本室温复温5min。倾去上清液，滴加二抗(兔抗鼠IgG)，在37℃的温度中孵育30min。PBS溶液充分漂洗3次，每次3min,避光滴加DAB显色液(购自Bioss公司中国)，复染、反蓝、封片。本病理判定由2名病理科医生分别进行评估。

1.2.2病理学指标 肿瘤TNM分期参照第7版AJCC TNM分期标准进行[6]。病理组织学分级采用改良Scarff-Bloom-Richardson分级系统(Nottingham方案)，评估参数包括肿瘤腺管结构、细胞核多形性和核分裂数3个指标[7]。

1.3统计学方法应用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。临床资料采用百分比描述统计，组间比较行2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1患者临床资料 本研究共纳入417例乳腺癌患者，发病患者就诊时间0～360d,平均30d;年龄25～83岁，中位年龄50岁；肿瘤直径0.3～6.5cm，平均2.02cm；淋巴结转移数0～25个，平均3.9个。肿瘤直径<2cm 289例，2～5cm 121例，>5cm 7例。病理类型：浸润性导管癌合并小叶癌36例(8.6%)，浸润性导管癌302例(72.4%)，小叶癌26例(6.2%)，导管内癌29例(7.0%)，髓样癌9例(2.2%)，其他15例(3.4%)。乳头浸润22例(5.3%)，未浸润395例(94.7%)。右侧乳腺癌179例，左侧乳腺癌238例。TNBC 56例(13.4%)，非TNBC 361例(86.6%)。病理分级：浸润型导管癌中Ⅰ～Ⅱ级288例(92.9%)，Ⅲ级22例(7.1%)；TNM 分期：0期24例(5.8%)，Ⅰ期151例(36.2%)，Ⅱ期213例(51.1%)，Ⅲ期29例(7.0%)。Ki-67阳性385例(92.3%)，p53阳性155例(37.2%)。

2.2预后因素分析 417例乳腺癌患者的病理组织中，Ki-67和p53的表达与患者年龄、发病时间、肿瘤直径、是否绝经、发病部位、淋巴结转移、乳头浸润、TNM分期和病理组织分级等因素无关；与病理组织分型有关，其差异有显著统计学意义(P<0.05)。见表1。Ki-67的表达在TNBC和非TNBC组的分布差异无统计学意义(P>0.05)，而p53的表达在2组中的分布具有明显不同(P<0.05)，见表2。相关性分析显示,Ki-67表达与p53表达呈明显正相关(r=22.22,P<0.05)。

表1 Ki-67和p53在乳腺癌不同预后影响因素中表达情况 例

表2 Ki-67和p53在TNBC和非TNBC中的表达比较 例

3 讨 论

乳腺癌是临床常见的恶性肿瘤, 其生物学特征具有高度异质性，病理表现不同，其分子生物学特性以及治疗方案上存在很大的差别。国内研究报道影响乳腺癌患者预后的因素包括直径、淋巴结转移、乳头浸润、病理分型、TNM分期、病理组织分级[8]。TNBC占所有乳腺癌的10%～17%[9-10]，HER-2高表达则提示细胞核的增殖能力强，故其侵袭和转移能力强；近年来的研究证明三个受体均为阴性是乳腺癌预后不良的有力预测指标[11]。

Ki-67抗原是一种增殖细胞相关的核抗原[12]，表达于细胞核，分子量为345～395kD，是细胞增殖状态中的标记抗原，反映细胞增殖情况。Ki-67被广泛地应用于判定各种肿瘤的增殖活性及作为影响肿瘤预后的因素之一。国外报道Ki67的表达对乳腺癌预后判断有重要意义[13]。国内研究认为Ki-67的表达与乳腺癌年龄、肿瘤直径、淋巴结转移等无明显相关，与乳腺癌浸润性导管癌分级呈明显正相关，阳性表达率为66.0%～79.3%[14-16]。本研究结果显示Ki-67的表达与患者年龄、发病时间、肿瘤直径、是否绝经、发病部位、淋巴结转移、乳头浸润、TNM分期和病理组织分级等因素无明显相关性，并且在TNBC和非TNBC组的分布差异无统计学意义；Ki-67表达只与病理组织分型有关，乳腺髓样癌中Ki-67表达明显高于其他类型肿瘤，提示Ki-67在髓样癌中具有较高的增殖活性，且预后不良。

p53基因位于人类17p13.1区带，编码393个氨基酸，分野生型和突变型。Kim等[17]认为p53基因突变与乳腺癌的发生密切相关。本研究结果显示p53在乳腺癌中的阳性率为37.2%，且与 Ki67表达呈正相关,与淋巴结转移无明显相关，提示p53表达可能通过增加肿瘤增殖速率影响预后，p53基因突变率高的乳腺癌细胞恶性度高，侵袭性强。 Ki-67的表达与患者年龄、发病时间、肿瘤直径、是否绝经、发病部位、淋巴结转移、乳头浸润、TNM分期和病理组织分级等因素无关，表明p53是独立于其他影响乳腺癌预后因素的免疫组化指标。p53的表达在TNBC和非TNBC组的分布差异具有统计学意义，p53阳性组中TNBC患者比例明显高于阴性组中TNBC患者，提示p53阳性合并TNBC的患者预后可能劣于其他组患者。

总之，p53和Ki-67的表达主要是伴随着肿瘤的恶性程度而变化,二者是相互独立又相互补充的预后判定因素。联合检测Ki-67、p53及ER、PR和HER-2指标有助于判断乳腺癌的预后。

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The relationship between the expression of Ki-67and p53in breast cancer and its clinical pathological stage

YANG Meng, DAI Dianlu, CUI Guozhong, CHEN Liang, DING Mingjian

(Cangzhou Central Hospital, Cangzhou 061001, Hebei, China)

Objective It is to approach the relationships of the expression of protein Ki-67and P53in breast cancer with its clinic pathological stage, and predict the value for prognosis.Methods The clinical data of 417cases of breast cancer were analyzed retrospectively.The relationship of Ki-67and p53expression with clinical indexes was analyzed by correlation analysis.Results 417patients with breast cancer were included.In this study, 385cases (92.3%) with Ki-67positive, 155cases (37.2%) with p53positive; 56cases (13.4%) were triple-negative breast cancer, 361cases (86.6%) were nor-triple negative breast cancer.The expression of Ki-67and p53protein was associated with the histopathological classification in breast cancer (allP<0.05), but with no difference in the factors including the time of disease symptom, lymph node metastasis, nipple of invasion, TNM stage, histopathologic classification, age, menopausal status, site of cancer and diameter.However, in the groups of triple-negative breast cancer and nor-triple negative, there were obviously difference in expression of p53(P<0.05), but nor in Ki-67(P>0.05).Conclusion High expression of Ki-67and p53in breast cancer has certain value in prognosis.

breast neoplasms; pathology; protein; Ki-67; anti-oncogene

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.18.010

R737.9

B

1008-8849(2015)18-1966-03

2014-06-20