复方四黄液联合负压封闭引流技术治疗感染创面的实验研究

郑臣校，梁武胜，刘思景，李绪松，苏培基

(广东省中山市中医院，广东 中山 528400)

论 著

复方四黄液联合负压封闭引流技术治疗感染创面的实验研究

郑臣校，梁武胜，刘思景，李绪松，苏培基

(广东省中山市中医院，广东 中山 528400)

目的研究复方四黄液联合负压封闭引流技术(VSD)治疗感染创面的疗效及作用机制。方法将90只家兔随机分成3组,均采用改良全层皮肤切除感染法造模。造模成功后，A组给予复方四黄液联合VSD治疗，B组给予复方四黄液治疗，C组给予VSD治疗。在治疗后第5，10，15天测定外周血白细胞计数(WBC)及C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；观察创面外观并行组织学观察，计算肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数。结果治疗后第5天开始，A组WBC、CRP、IL-6、TNF-α水平均低于B组和C组(P均<0.05)，并持续降低。治疗后第5天，A组PCT明显低于B组和C组(P均<0.05)，治疗后第10天与B组比较差异无统计学意义，但均低于C组(P均<0.05)。创面外观评分各个时间段A组均优于B组和C组(P均<0.05)；肉芽组织中成纤维细胞数、新生毛细血管数A组>B组>C组，且各组内在第10天时测得值最高。结论复方四黄液联合VSD治疗感染创面疗效更优，其机制可能在于二者联用能抑制病菌生长，减轻炎症反应，降低IL-6、TNF-α水平，刺激肉芽组织中成纤维细胞和新生毛细血管生长。

感染创面；C反应蛋白；降钙素原；白细胞介素-6；肿瘤坏死因子-α

复方四黄液为中山市中医院制剂，能活血化瘀、祛腐生肌，已广泛应用于骨科感染创面，并取得良好疗效[1-2]。负压封闭引流技术(VSD)的封闭负压环境既能防止细菌侵入，又能抑制细菌生长，加强创面血液循环，保证将创面修复所必需的氧和营养物质运输到创面;还可清除伤口渗出液和坏死组织，减轻组织间压力，缩小组织细胞间隙，在低氧和相对缺氧状态及机械应力下能促进细胞增殖、组织修复[3]。本研究观察了中药复方四黄液联合VSD治疗白兔创伤感染的效果及对白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、外周血白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)含量的影响，旨在探讨二者联合应用促进创面愈合的机制。

1 实验资料

1.1实验动物及分组 纯种大耳白家兔90只，由中山市中医院动物实验中心提供，体质量1.8～2.5kg，雌雄各半，健康状况良好，动物合格证号：20130012。采用随机数字表法将白兔随机分为A组、B组、C组，每组30只。

1.2药物及材料 复方四黄液由黄连、黄柏、大黄、连翘等组成，100mL/瓶，中山市中医院制剂科制备，批准文号为粤药制字(Z2008-0005)。VSD材料由武汉维斯第医用科技有限公司生产。

1.3造模方法采用改良全层皮肤切除感染方法[4]制成动物创伤感染创面模型。术前给予150mg/kg水合氯醛耳静脉静注麻醉，在白兔背部选择一块5cm×5cm的完整皮肤，剪去周围兔毛，消毒，无菌操作剪去皮肤、皮下筋膜，破坏肌肉表面约2mm。无菌敷料压迫止血，创面填充浸渍了1mL金黄色葡萄球菌(细菌浓度为5×1012L-1)的纱布，无菌敷料包扎，覆盖。给予白兔充足食物和水。48h后打开敷料见创面有黄白色分泌物，周围组织红肿，分泌物培养出金黄色葡萄球菌证明感染创面动物模型造模成功。

1.4治疗方法 在无菌环境中，A组用无菌生理盐水冲洗伤口后覆盖VSD，每天200mL复方四黄液+3000mL注射用生理盐水持续灌注引流，5d更换1次VSD材料；B组用无菌生理盐水冲洗伤口后覆盖VSD，5d更换1次VSD材料；C组用无菌生理盐水冲洗伤口后给予复方四黄液湿敷，每天换药1次。所有操作由中山市中医院显微创伤科同一组医师完成。

1.5观察指标 ①治疗前及治疗后第5，10，15天检测WBC、CRP、PCT、IL-6、TNF-α水平。检验项目由中山市中医院检验科完成。②治疗后第5，10，15天观察创面外观。肉芽生长良好，完全覆盖创面，颜色鲜红计5分；肉芽生长良好，覆盖创面75%以上，颜色鲜红计4分；肉芽生长良好，覆盖创面50%以上，颜色鲜红计3分；可见肉芽生长，覆盖创面25%～50%计2分；可见肉芽生长，覆盖创面少于25%计1分；未见肉芽生长计0分。③治疗后第5，10，15天行组织学观察。每个标本取创面中心及创面四周随机5个高倍视野(×400)，计算肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数。

1.6统计学方法所有数据用SPSS 13.0软件进行统计处理，计量资料组间比较采用方差分析和t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各组治疗前及治疗后第5，10，15天WBC计数及CRP、PCT水平比较 治疗前各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗后第5，10，15天各指标水平均较治疗前明显降低(P均<0.05)。治疗后第5天，A组WBC、CRP、PCT水平均低于B组和C组(P均<0.05)。治疗后第10天，A组WBC计数低于B组和C组(P均<0.05)；A组和B组CRP、PCT水平比较差异无统计学意义，但均低于C组(P均<0.05)。治疗后第15天， WBC计数A组

表1 各组治疗前及治疗后第5，10，15天WBC计数及CRP、PCT水平比较

组别n治疗后第10天WBC/109L-1CRP/(mg/L)PCT/(ng/mL)治疗后第15天WBC/109L-1CRP/(mg/L)PCT/(ng/mL)A组306．25±1．65①5．85±1．05①③0．15±0．19①③5．25±1．47①4．85±1．04①③0．12±0．11①③B组308．82±3．55①②6．53±2．62①③0．56±0．62①③6．82±2．02①②③5．26±1．21①③0．21±0．15①③C组309．42±3．49①②30．25±9．89③2．23±1．81①②8．22±2．19①②16．25±9．65①1．23±0．31①

注：①与治疗前比较，P<0.05;②与A组比较，P<0.05；③与C组比较，P<0.05。

2.2各组治疗前及治疗后第5，10，15天IL-6、TNF-α水平比较 治疗前各组IL-6、TNF-α水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗后第5，10，15天， IL-6和TNF-α水平均较治疗前明显降低(P均<0.05)，且IL-6、TNF-α水平A组

表2 各组治疗前及治疗后第5，10，15天IL-6、TNF-α水平比较

注：①与治疗前比较，P<0.05;②与A组比较，P<0.05；③与B组比较，P<0.05。

2.3治疗后第5，10，15天创面外观评分比较 治疗后各组内创面外观评分第15天>第10天>第5天，各组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)；治疗后第5，10，15天各组间创面外观评分A组均高于B组和C组(P均<0.05)，B组和C组比较差异无统计学意义。见表3。

表3 治疗后第5，10，15天创面外观评分分)

注：①与治疗后第5天比较，P<0.05；②与治疗后第10天比较，P<0.05；③与A组比较，P<0.05。

2.4治疗后第5，10，15天肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数比较 治疗后第5，10，15天肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数A组>B组>C组，差异均有统计学意义(P均<0.05)，且各组内在第10天时值最高。见表4。

3 讨 论

复方四黄液属清热生肌类药物，方中大黄清热泻火，解毒止血，活血化瘀，清利湿热；黄连、黄柏清热燥湿，泻火解毒；连翘清热解毒，消肿散结，疏散风热；诸药合用共奏清热解毒、去腐生肌、消肿止痛之功。现代药理学研究表明，大黄的主要成分大黄素具有抑菌、抗炎、抑制血小板聚集和改善微循环等作用；黄柏、连翘有广谱抗菌作用，对多种病菌有很强的抑制作用[1-2]。

表4 治疗后第5，10，15天肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数比较

注：①与治疗前后第10天比较，P<0.05;②与A组比较，P<0.05；③与B组比较，P<0.05。

VSD是裘华德[5]教授于1994年引进并和他的同事们进行了发展改良，从创面愈合的基本生物学过程(如炎症、修复细胞增殖、肉芽形成、细胞外基质沉积)和创面微环境(如渗出液、血运、细胞因子)变化和影响等方面，对这一技术的治疗效应进行了较系统的观察，发现负压封闭引流可抑制慢性创面中基质金属蛋白酶(MMP)mRNA及蛋白表达，两者形成复合物抑制胶原和明胶的降解，从而促进创面愈合。该技术能显著提高创面血流量，促进坏死组织和细菌清除；能加速创面肉芽组织生长和修复细胞增殖；能增加毛细血管流量，促进毛细血管新生；还能降低创面中基质免疫蛋白酶活性，增加纤维结合蛋白含量。在本研究过程中，C组部分标本感染未能控制，考虑创面负压封闭引流操作过程中未彻底清创有关。

炎症是机体创伤后最基本的防御性反应,在炎症发生、发展的过程中,各种坏死细胞中以IL-6和TNF-α为首的炎症递质对炎症的结局起着决定性作用。 TNF-α是由单核一巨噬细胞产生的一种单核因子,其生物学效应主要为促炎症反应和诱导细胞凋亡。IL-6则可由单核一巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等多种细胞合成和释放,协同TNF-α放大炎症反应,活化淋巴细胞及促进急性期反应蛋白和免疫球蛋白的合成。IL-6和TNF-α是最重要的炎症递质,也是目前公认的MODS预后评价指标[6-7]。现代研究表明，创面愈合是多种细胞因子与生长因子共同参与、相互协调的复杂过程，TNF-α起着至关重要的作用，其表达的降低可以减轻炎症反应，增加表皮生长因子的生成，从而促进创面修复[8]。WBC和CRP作为传统和新生代监测指标的代表能够及时、有效地反映炎症反应和感染的程度,已广泛应用在临床创伤感染的无创监测中[9]。PCT在人体内的半衰期为20～24h，稳定性好，在正常人血清中含量极低，是细菌感染的一种非常敏感特异的血清学标志水平[10]。

本研究结果显示，治疗后第5天开始，A组WBC、CRP、IL-6、TNF-α水平均低于B组和C组，并持续降低。治疗后第5天A组PCT水平明显低于B组和C组，治疗后第10天与B组比较差异无统计学意义，但均低于C组。创面外观评分各个时间段A组均优于B组和C组；肉芽组织中成纤维细胞数、新生毛细血管数A组>B组>C组，且各组内在第10天时测得值最高。

综上所述，复方四黄液联合VSD治疗感染创面疗效更优，其机制可能在于二者联用能抑制病菌生长，减轻炎症反应，降低IL-6、TNF-α水平，刺激肉芽组织中成纤维细胞和新生毛细血管生长，可作为一种优秀的临床治疗选择。

[1] 郑臣校,苏培基,黄星垣.复方四黄液治疗外伤性感染创面69例疗效观察[J].甘肃中医学院学报,2011,28(4)：37-40

[2] 郑臣校，黄星垣，曾远． 复方四黄液促进外伤性感染创面愈合临床观察[J]． 浙江中西医结合杂志，2009，19(6)：364-365

[3] 石云峰,吴本权.炎性细胞因子在细菌感染中的作用[J]． 国际内科学杂志,2009，36(2)：112-115

[4] 孙丽,魏诗,王贺.动物伤口感染模型建立及其应用的研究方法[J].中国科技博览，2013(12)：213

[5] 裘华德,宋九宏.负压封闭引流技术[M].北京：人民卫生出版社,2008:7

[6] 王晓伟,孙天胜,秦聪聪.多发伤患者炎性因子变化及其临床意义[J]． 中国骨与关节损伤杂志,2009,24(5):406-408

[7] 李东柏.MODS诊治进展[J].河北医药,2008，30(12)：1981-1983

[8] Lao G,Yao L,Yang C,et al.Contolled release of epidermal growth factor from hydrogels accelerates wound healing in diabetie rats[J].J Am Podistr Med Assoc，2012,102(2):89-98

[9] 王文静,郭丙申.C反应蛋白与白细胞联合检测的临床应用[J]． 医学理论与实践,2009,22(6):701-702

[10] 刘雪燕，徐勇，周知远，等.血清除钙素原预测危重患者院内感染的临床价值[J].现代中西医结合杂志，2010，19(12)：1443-1445

Experimental study on Fufang Sihuangye combined with vacuum sealing drainage technique in the treatment of wound infection

ZHENG Chenxiao, LIANG Wusheng, LIU Sijing, LI Xusong, SU Peiji

(Zhongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhongshan 528400, Guangdong, China)

Objective It is to observe the curative effect and the mechanism of Fufang Sihuangye combined with vacuum sealing drainage technique(VSD)in the treatment of wound infection.Methods 90cases of rabbits were randomly divided into 3groups and treated with modified full-thickness skin excision for wound infection model.After the success of model making,the animals were treated with Fufang Sihuangye combined with VSD in group A, with Fufang Sihuangye in group B, and with VSD in group C.The levels of WBC, CRP, PCT, IL-6, TNF-α were detected in the 5th, 10th and 15th day after treatment, then observed outward appearance of the wound, and calculated the number of the granulation tissue fibroblasts and new capillary.Results From the 5th day after treatment, the WBC, CRP, IL-6and TNF-α of group A were lower than those in group B and group C (allP<0.05), and continued to reduce.At the 5th day after treatment, the PCT of group A was significantly lower than that in group B and group C, the differences with B group disappear at the 10th day after treatment, and they were lower than those in group C (allP<0.05).The outward appearance of the wound score of group A was more than in group B and group C (allP<0.05); the number of granulation tissue fibroblasts and new capillary in group A>in group B>in group C, and the value of all groups was the highest at the 10th day after treatment.Conclusion The curative effect of Fufang Sihuangye combined with VSD in the treatment of wound infection is better.The mechanism may be that can inhibit bacteria growth, reduce inflammation reaction, reduceIL-6, TNF-α, stimulate the granulation tissue fibroblasts and capillaries growth.

wound infection; C-reactive protein; procalcitonin; Interleukin 6; tumor necrosis factor-α

郑臣校，男，主任医师，研究方向为四肢多发创伤骨折后骨不愈合、骨感染、大段骨缺损的综合治疗。

2014年度广东省中医药局立项课题 (20142151)；2014年度中山市科技计划项目 (2014A1FC113)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.18.001

R-332

A

1008-8849(2015)18-1939-04

2015-01-07