HPLC测定利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素含量

刘译

（怀化市食品药品检验所，湖南怀化418000）

HPLC测定利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素含量

刘译

（怀化市食品药品检验所，湖南怀化418000）

目的：建立利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素含量测定方法。方法：色谱柱：DIKMA-C18柱（4.6mm×250mm；5μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸（45∶55），流速为1.0m L/m in，检测波长为360 nm，柱温为30℃。结果：利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素的线性范围分别为0.988～98.8μg/m L（r=0.999 8），0.979～97.9μg/m L（r=0.999 7），平均回收率为98.21%，98.18%，RSD值为0.71%，0.56%。结论：该方法简便，结果准确，可作为利胆消石颗粒的质量控制方法。

利胆消石颗粒；槲皮素；山奈素；含量测定；高效液相色谱法

利胆消石颗粒由金钱草、木通、芒硝、松子、乌药、莪术、海金沙、枳壳、丹参9味中药组成，具有消热利湿，利胆排石的功效。用于泌尿系结石，胆道结石，胆囊炎，胆道感染等。金钱草为本方中君药，金钱草中的有效成分为槲皮素和山奈素，现行质量标准没有对其进行含量测定，为了有效控制本品的质量，本研究参照《中国药典》[1]及相关文献[2-9]对金钱草中槲皮素和山萘素同时进行含量测定,结果满意，现报道如下。

1 仪器与试液

1.1 仪器

日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵，SPD-M 20A型二极管阵列检测器，SIL-20A自动进样器，LCsolution色谱工作站），METTLER TOLEDO十万分之一电子分析天平（瑞士）。

1.2 试药

利胆消石颗粒（怀化市第一人民医院，规格：20 g/包，批号：20131006，20131109，20131218），槲皮素对照品（原中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406，纯度：100%），山萘素对照品（原中国药品生物制品检定所，批号：110861-200304，纯度100%），甲醇（色谱纯，TEDIA），磷酸（色谱纯，TEDA），甲醇（分析纯），水为去离子重蒸馏水（科室自制）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱为DIKMA-C18柱（4.6 mm×250 mm；5μm)，流动相为甲醇-0.4%磷酸（45∶55），水流速为1.0 m L/m in，检测波长为360 nm，柱温为30℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷干燥24 h至恒重的槲皮素对照品（9.88 mg）和山奈素对照品（9.79 mg）置100 m L棕色量瓶中，用80%甲醇溶液40 m L使溶解，并定容至刻度，摇匀，配制成混合对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液 取装量差异项的内容物，精密称取样品5.0 g，置100 m L锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 m L，称定重量，加热回流60 m in，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 m L，加入盐酸5 m L，置水浴中加热水解1小时，取出，迅速冷却，转移至50 m L量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照液 取除金钱草以外的其他8味药材按处方制备成不含金钱草样品，再按供试品溶液方法制备。

2.3 标准曲线制备

取混合对照品储备液0.1，0.5，1.0，2.0，4.0， 6.0，8.0，10.0 m L置10 m L棕色量瓶中，以流动相定容至刻度。按照2.1项下进样10μL，记录色谱图，见图1A。由峰面积（Y）（n=3）对响应的浓度（X）直线回归，槲皮素回归方程为：

Y=37 826 284.241 3X＋18 988.318 6，

r＝0.999 8，表明槲皮素在0.988～98.8μg/m L的浓度范围内线性相关；山奈素回归方程为：

Y=37 925 392.597 5X－26 716.769 4，

r＝0.999 7，表明山奈素在0.979～97.9μg/m L的浓度范围内线性相关。

2.4 系统适用性试验

分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪，记录色谱图，从图1中可以看出，槲皮素峰和山奈素峰与其相邻峰完全分离，阴性对照色谱图在对应的槲皮素峰和山奈素峰位置处无干扰峰，即表明其他组分对测定无干扰。槲皮素峰和山奈素峰与其他组分峰的分离度都大于1.5。

2.5 精密度考察

取同一样品溶液连续进样6次，进样量10μL，测定峰面积，计算RSD值为0.68%，0.72%。结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度。

2.6 重复性试验

取同一批号（批号：20121006）的样品6份，按2.2.2方法制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪。测定峰面积，根据线性回归方程计算含量，相对标准偏差RSD分别为0.82%，0.77%。

2.7 稳定性试验

取同一样品溶液，在0，2，4，6，8，10，12 h分别进样10μL，依法测定，结果6次测定的槲皮素和山奈素峰面积RSD分别为1.01%，1.08%，表明样品溶液在12 h内相对稳定。

图1 槲皮素和山奈素色谱

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：20121006，平均装量：20.252 6 g/包）10.0 g 9份置锥形瓶中，每份分别加入对照品混合溶液（重新配制）0.8 m L，0.8 m L，0.8 m L，1.0 m L，1.0 m L，1.0 m L，1.2m L，1.2m L，1.2m L（槲皮素浓度为0.247mg/m L，山奈素浓度为0.222 mg/m L）水浴加热将其蒸干。按2.2.2方法制备。按2.1项下分别进样10μL，记录色谱图，测定槲皮素和山奈素的峰面积，经换算后，计算槲皮素和山奈素的回收率，结果见表1。

表1 回收试验结果（n＝9）

2.9 样品含量测定

将3批不同批号的利胆消石颗粒按2.2.2方法制备，进样10μL，测定峰面积,按外标法计算含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 以80%甲醇为溶剂，通过高效液相色谱DAD检测器扫描，发现槲皮素和山奈素这两种对照品溶液均在360 nm波长处有最大吸收，因此确定360 nm为检测波长。

表2 样品含量测定结果（n＝3）

3.2 试验中以文献[1]提供的色谱条件甲醇-0.4%磷酸（50∶50）为基础，改变流动相的比例甲醇-0.4%磷酸（45∶55），通过试验摸索，利胆消石颗粒中各组分能够较好分离，该条件适合利胆消石颗粒的含量测定。

3.3 本试验采用HPLC同时测定利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素的含量，具有方法简便，重复性好，准确且专属性较强的优点，具一定的实际意义。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：204.

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[3]温梅云，钟球，钟鸣.HPLC法测定通淋颗粒中槲皮素山奈素的含量[J].国际医药卫生导报，2007，13（4）：86-88.

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[5]赵艳丽，黄亦琦，胡珊梅，等.HPLC测定全蚕粉中槲皮素和山奈素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（18）：95-97.

[6] 丁立新，李春英，孙启芬.高效液相法测定小叶金钱草中槲皮素和山奈素的含量[J].黑龙江医药科学，2009，32（5）：17-18.

[7]阎婷，金宪涵，王盈.HPLC测定金钱草中槲皮素和山奈素的含量[J].中华中医药学刊，2009，20（6）：624-625.

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Content Determ ination of Quercetin and Kaempferol in Lidan XiaoshiGranules by HPLC

Liu Yi（Huaihua Municipal Food and Drug Inspection Institute，Hunan Huaihua 418000，China）

Objective:To establish a HPLC method for the content determ ination of quercetin and kaempferol in lidan xiaoshi granules.M ethods:DIKMA-C18（4.6 mm×250 mm；5μm）column was used w ith the mobile phase of methanol-0.4%phosphoric acid solution（45∶55）,the flow ratewas 1.0m L/min,the detection wavelength was at 360 nm and the column temperature was at 30℃.Results:A good linear relationship of quercetin and kaempferol was w ithin the range of 0.988～98.8μg/m L（r=0.999 8）and 0.979～97.9μg/m L（r=0.999 7）respectively,and the average recovery of quercetin and kaempferolwas 98.21%and 98.18%（RSD was 0.71%and 0.56%）.Conclusion:Themethod is simple and accurate,which can be used for the quality control of lidan xiaoshigranules.

Lidan XiaoshiGranules；Quercetin；Kaempferol；Content Determ ination；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.01.006

2014-06-27）

刘译，男，副主任药师。研究方向：食品药品检验。E-mail：442959621@qq.com