四项免疫组化标志物在诊断甲状腺乳头状癌中的临床探讨

陈桂军 董 征

（1 锦州市卫生学校，辽宁 锦州 121000；2 锦州市中心医院，辽宁 锦州 121000）

甲状腺乳头状癌是临床常见的恶性肿瘤，其在甲状腺癌发生率中占60%～70%[1]。甲状腺乳头状癌的临床诊断主要是依靠形态学特征，如具有毛玻璃样核、核内有包涵体等，但是一些甲状腺的良性病变，如结节性甲状腺肿、滤泡性甲状腺腺瘤、桥本甲状腺炎等均可能伴有不同程度的乳头状增生或者毛玻璃样核等病变，给甲状腺乳头状癌诊断带来较大的难度[2]。本研究通过对锦州市中心医院甲状腺乳头状癌患者临床资料进行分析，拟探讨四项免疫组化标志物在诊断甲状腺乳头状癌中的应用效果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选取锦州市中心医院2010年2月至2014年3月收治的甲状腺乳头状癌患者50例作为观察组进行分析，男性7例，女性43例，年龄42～61岁，年龄（50.3±9.5）岁，50例患者均有不同程度的颈部肿大临床表现，病灶位置：左侧23例，右侧22例，峡部3例，双侧2例。选取同期收治的良性甲状腺结节患者200例作为对照组，男性20例，女性180例，年龄43～62岁，年龄（51.7±8.1）岁，两组观察对象一般资料无统计学差异，P＞0.05。

1.2 方法：两组研究对象采集的标本通过甲醛固定，通过乙醇脱水和石蜡包埋，进行连续切片，切片厚度为4 μm，进行HE染色，通过2名有丰富经验的病理医师进行双盲独立性评价。免疫组化染色通过S-P法进行，参照定制的试剂盒说明书进行严格的操作。分别选择Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu抗体均是鼠抗人的单克隆抗体。通过奥林巴斯光学显微镜进行结果判定。TTF-1染色要在细胞核进行定位，HER-2/neu在细胞质或者细胞膜进行定位。PBS替代一抗作为阴性对照。每张病理学切片随机选择10个高倍视野，对阳性细胞进行计数，通过半定量分析的方法对阳性细胞率进行计算。阳性判定标准：Ki67阳性为细胞核内有棕黄色颗粒出现，阳性细胞依据比例情况进行分组，（-）：阳性细胞比例＜1%；（+）：阳性细胞比例1%～3%；（++）：阳性细胞比例3.1%～5.0%；（+++）：阳性细胞比例＞5.0%。对TTF-1、HBME-1和HER-2/neu进行免疫组化评分。免疫组化评分中阳性细胞比例评分：0分：阳性细胞比例＜10%，1分：阳性细胞比例为10%～25%；2分：阳性细胞比例（25%～50%），3分：阳性细胞比例50%～75%，4分：阳性细胞比例＞75%。

1.3 观察指标

1.3.1 观察两组研究对象Ki67、甲状腺转录因子1（TTF-1）、人骨髓内皮细胞标志物（HBME-1）和HER-2/neu阳性率情况。

1.3.2 观察Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu诊断甲状腺乳头状癌的敏感性、特异性、阳性预测和阴性预测的情况：敏感性又称真阳性率，即实际甲状腺乳头状癌而按该筛检实验的标准被正确判断为甲状腺乳头状癌的百分比，它反映筛检实验发现甲状腺乳头状癌的能力。特异性又称真阴性率，即实际无甲状腺乳头状癌按该诊断标准被正确地判断为无病的百分比。它反映筛检实验确定非甲状腺乳头状癌的能力。阳性预测值指筛检实验阳性者不患目标甲状腺乳头状癌的可能性。阴性预测值指筛检实验阴性者患甲状腺乳头状癌的可能性。敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）；特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）；阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）；阴性预测值=真阴性/（真阴性+假阴性）。

1.4 统计学分析：采用统计学软件SPSS 19.0建立数据库，针对计数资料通过百分比表示，采用卡方检验分析，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组研究对象Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu阳性率情况：见表1。观察组Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu阳性率明显高于对照组，P＜0.05，差异均有统计学意义。

表1 两组研究对象Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu阳性率情况

2.2 Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu诊断甲状腺乳头状癌的敏感性、特异性、阳性预测和阴性预测的情况：见表2。HER-2/neu诊断甲状腺乳头状癌的敏感性最高92%，TTF-1特异性最高96%。

表2 Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu诊断甲状腺乳头状癌的敏感性、特异性、阳性预测和阴性预测的情况

3 讨 论

甲状腺乳头状癌作为甲状腺最为常见的恶性肿瘤，其主要特征是具有乳头状结构和特征性的细胞核，其临床病例特征往往不是十分明显[3]。结节性甲状腺肿是临床常见的增生性疾病，其往往伴有乳头状增生，并且当乳头状增生复杂、细胞层次较多、细胞核具有一定的异型性，进而和乳头状癌十分相似，影响了临床诊断的准确率[4]。Ki67是一种和细胞周期相关的蛋白质，其异常表达可以覆盖除了G0期以外的细胞各个增殖周期，在G1晚期、S期、G2期和M期持续性的存在，并且随着细胞周期的不断发展，抗原的表达明显增高，一直到G2期和M期达到表达的高峰，对于细胞增殖的活性可以明显的反映[5]。另外Ki67在低分化腺癌组织中的表达往往高于中、高分化腺癌，其可以客观的反映肿瘤的性质和恶性程度，也可以应用细胞增殖的活性、周期和生长方式等探讨，是肿瘤诊断和预后判定的重要生物标志物[6]。TTF-1是调控基因表达的转录因子之一，其主要在甲状腺滤泡、甲状旁腺等组织器官表达，并且参与甲状腺的分化发育和功能的维持。TTF-1和甲状腺癌是互为因果的关系，甲状腺癌对TTF-1表达和活性造成影响，同时TTF-1突变和活性降低又会促使甲状腺细胞分化、成熟受到损伤，诱发恶性病变[7]。甲状腺癌组织中存在着TTF-1表达量的异常，同时也存在着基因的突变[8]。TTF-1大多数定位在细胞核内，也有少量定位在细胞质，当出现细胞质型TTF-1时提示甲状腺细胞可能出现了恶化，可能由于TTF-1蛋白在细胞质内的过量表达，且累及TTF-1蛋白进入细胞核信号肽序列。HER-2/neu位于人体染色体的17q-12-21.3，是人体重要的细胞癌基因，HER-2/neu编码的产物和表皮生长因子受体具有一半是同源的，参与细胞的分裂和生长，是酪氨酸激酶受体的一种。HER-2/neu正常状态下处于非激活的状态，其通过影响细胞转导通路来参与到细胞的增殖、分化和凋亡过程中，进而促使细胞恶变。Her-2/neu蛋白由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分组成，由于目前尚未发现能与Her-2/neu蛋白直接结合的配体，其主要通过与家族中其他成员包括EGFR（HERl/erbBI），HER3/erbB3[9]。HBME-1是间皮细胞表面微绒毛的抗原，其是酸性氨基酸多聚糖蛋白，主要成分是透明质酸。为单克隆抗体，是间皮细胞微绒毛表面特异性标志物，在肿瘤血管的形成、肿瘤的生长以及肿瘤的转移中发挥重要作用。有资料显示，HBME-1在甲状腺乳头状癌中呈现较高的表达，然而结节性甲状腺肿、乳头状的良性病变则表现为阴性[10]。本研究通过分析锦州市中心医院2010年2月至2014年3月收治的甲状腺乳头状癌患者50例临床资料，作为观察组，选取同期良性甲状腺结节患者200例作为对照组。结果表明，观察组Ki67、TTF-1、HBME-1和HER-2/neu阳性率明显高于对照组， HER-2/neu诊断甲状腺乳头状癌的敏感性最高92%，TTF-1特异性最高96%。提示HER-2/neu联合TTF-1可能明显的提高诊断甲状腺乳头状癌准确率，值得临床推广应用。

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