青龙衣活性部位的化学成分研究

周媛媛， 蒋艳秋， 孟 颖， 刘兆熙， 杨炳友

(黑龙江中医药大学药学院，黑龙江 哈尔滨150040)

青龙衣为胡桃科植物胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 或胡桃Juglans regia 未成熟外果皮，主产河北、山东、东北等地［1］。青龙衣始载于《开宝本草》，该药辛、苦、涩、平，古代应用主要利用其清热解毒、止痛止痢之功效［2］。现代药理学研究表明，青龙衣具有明显的镇痛和抗肿瘤作用［3］。本实验对青龙衣三氯甲烷和乙酸乙酯抗肿瘤活性部位进行了化学成分研究，分离得到15 个化合物。

1 仪器与材料

MS-2010 型质谱仪和Finnigan LCQ LC-MS 联用仪;Bruker-400 型超导核磁共振光谱仪;岛津公司FTIR-8400S 型红外光谱仪;AB-8 型大孔吸附树脂(南开大学化工厂);柱色谱硅胶(200 ～300 目，青岛海洋化工厂);其他试剂均为分析纯。

青龙衣药材2012 年8 月采集自吉林省长白山区，经黑龙江中医药大学中药鉴定教研室王振月教授鉴定为胡桃楸Jugland mandshurica Maxim 的青果皮。

2 提取与分离

将干燥的青龙衣药材10.0 kg 粉碎，95%乙醇回流提取3 次，减压浓缩得乙醇浸膏(853 g)。提取物用适量水混悬后，分别用乙酸乙酯和三氯甲烷进行两相回流，得乙酸乙酯层浸膏(84 g)和三氯甲烷层浸膏(96 g)，乙酸乙酯浸膏通过AB-8 型大孔吸附树脂柱色谱，以H2O、50%乙醇和95%乙醇依次洗脱，其中95%乙醇洗脱组分(32 g)反复用硅胶柱层析后得到化合物1 (32 mg)，化合物2 (28 mg);50%乙醇洗脱组分(42 g)反复用硅胶柱层析后得到化合物3 (30 mg)，化合物4 (29 mg)，化合物5 (33 mg)，化合物6 (28 mg)，化合物7 (31 mg)，化合物8 (30.5 mg)，化合物9(26 mg)。三氯甲烷浸膏反复硅胶柱层析后得到化合物10 (31 mg)，化合物11 (30 mg)，化合物12(26 mg)，化合物13 (32 mg)，化合物14 (30 mg)，化合物15 (32 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:无色针状晶体(MeOH)，mp 283 ～287 ℃，Liebermann-Burchard 反应阳性。ESI-MS(m/z):455 ［M-H］-，表明其相对分子质量为456。IR (KBr)谱显示有羟基(3 415 cm-1)和羰基(1 694 cm-1)吸收。TLC 与熊果酸对照品展开，两者Rf值一致，同对照品混合后熔点不下降，故化合物1 为熊果酸(ursolic acid)。

化合物2:无色针状粉末 (MeOH)，Liebermann-Burchard 反应阳性，Molish 反应阴性。ESIMS (m/z):487 ［M-H］-，表明其相对分子质量为488。IR (KBr)谱显示有羟基(3 458 cm-1)和羰基(1 703 cm-1)吸收。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:0.68，0.80，1.01，1.18 (3H ×4，s， Me-25， Me-24， Me-23， Me-27 )，0.92，0.87 (3H ×2，d，J =6.4 Hz，Me -29，Me-30)，3.24 (d，J =10.8 Hz，H-23a)，3.32 (1H，dd，J=9.6，1.6 Hz，H-3)，3.48 (d，J =10.8 Hz，H-23b)，3.69 (m，H-2)，5.23 (1H，t，J =3.2 Hz，H-12)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:48.2 (C-1)，69.6 (C-2)，78.2 (C-3)，43.5(C-4)，48.1 (C-5)，19.0 (C-6)，33.7 (C-7)，40.6 (C-8)，48.2 (C-9)，39.1 (C-10)，24.3(C-11)，126.8 (C-12)，139.9 (C-13)，43.3(C-14)，28.7 (C-15)，25.4 (C-16)，47.5 (C-17)，54.2 (C-18)，39.9 (C-19)，40.3 (C-20)，33.6 (C-21)，38.2 (C-22)，66.3 (C-23)，14.2(C-24)，17.8 (C-25)，17.6 (C-26)，23.8 (C-27)，181.7 (C-28)，17.6 (C-29)，21.7 (C-30)。NMR 数据与文献［4］报道基本一致，故化合物2 为2α，3β，23-三 羟 基-12-烯-28-熊 果 酸(2α，3β，23-trihydroxy urs-12-en-28-oic acid)。

化合物3:无色针状结晶(MeOH)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，溴甲酚绿反应阳性。EI-MS(m/z):170［M］+，表明其相对分子质量为170。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:6.98(2H，s，H-2，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:121.8 (C-1)，110.4 (C-2，6)，146.5(C-3，5)，139.4 (C-4)，170.3 (-COOH)。NMR谱数据与文献报道［5］基本一致，故化合物3 为没食子酸(gallic acid)。

化合物4:无色针状结晶(MeOH)，溴甲酚绿反应阴性，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性。EI-MS(m/z):152［M］+，表明其相对分子质量为152。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4) δ:9.73(1H，s，-CHO)，3.92 (3H，s，-OCH3)，7.43(1H，d，J =7.0 Hz，H-5)，7.39 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.94 (1H，dd，J =7.0 Hz，2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4)δ:111.2 (C-2 )，116.4 (C-5 )，127.8 (C-6 )，130.5 (C-1 )，149.9 (C-3 )，154.6 (C-4 )，193.0 (-CHO)，56.6 (-OCH3)。NMR 数据与文献［6］报道基本一致，故化合物4 为香草醛(vanillin)。

化合物5:无色针状结晶，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，溴甲酚绿反应阳性。ESI-MS (m/z):167 ［M-H］-，表明其相对分子质量为168。1H-NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ:7.44 (1H，d，J =8.0，2.0 Hz，H-6)，7.43 (1H，d，J =2.0 Hz，H-2)，6.92 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-5)，3.87(3H，s，-OCH3)。13C-NMR (100 MHz，Methanold4)δ:122.9 (C-1)，112.7 (C-2)，146.6 (C-3)，148.7 (C-4)，113.8 (C-5)，124.6 (C-6)，56.9 (-OCH3)。NMR 谱数据与文献［7］报道基本一致，故化合物5 为香草酸(vanillic acid)。

化合物6:白色片状结晶(CHCl3)，mp 76 ～78 ℃。盐酸-镁粉反应阴性，Molish 反应阴性。1HNMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:12.35 (-COOH)，7.34 ～7.22 (5H，m)，3.55 (2H，s，-CH2)。根据1H-NMR 谱数据可推断化合物6 可能为苯乙酸，TLC 展开后与苯乙酸对照品Rf对照一致，故化合物6 为苯乙酸(phenylethyl acid)。

化合物7:无色针晶(乙醚)，mp 116 ～117℃。EI-MS (m/z):182 ［M+］，表明其相对分子质量为182。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.76(3H，s，H-9)，3.63 (2H，s，H-7)，6.62 (1H，d，J = 2.5 Hz，H-6)，6.73 (1H，dd，J = 8.5，2.5 Hz，H-4)，6.84 (1H，d，J=8.5，H-3)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:121.9 (C-1)，148.8(C-2)，118.5 (C-3)，115.5 (C-4)，149.3 (C-5)，117.7 (C-6)，37.8 (C-7)，173.8 (C-8)，52.8 (C-9)。NMR 数据与文献［8］报道基本一致，故化合物7 为2，5-二羟基苯乙酸甲酯(2，5-dihydroxy methyl phenylacetate)。

化合物8:白色粉末。1H-NMR (400 MHz，Methanol-d4)δ:9.75 (1H，s，H-7)，7.76 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.85 (2H，d，J =8.5 Hz，H-3，5)。13C-NMR (100 MHz，Methanol-d4，)δ:130.3 (C-1)，133.5 (C-2，6)，117.0 (C-3，5)，165.4 (C-4)，192.8 (C-7)。NMR 数据与文献［9］报道基本一致，故化合物8 为对羟基苯甲醛(p-hydroxy benzalde -hyde)。

化合物9:无色针晶，mp 130 ～132 ℃。EI-MS(m/z):148 ［M+］，表明其相对分子质量为148。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:7.57 (2H，m，H-3＇，H-5＇)，7.43 (3H，m，H-2＇，H-4＇，H-6＇)，6.48 (1H，d，J = 16.0 Hz，H-2)，7.83(1H，d，J=16.2 Hz，H-3)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:172.8 (C-1)，117.6 (C-2)，147.4(C-3)，134.3 (C-1＇)，128.6 (C-2，6＇)，129.3(C-3＇，5＇)，130.2 (C-4＇)。NMR 数 据 与 文 献［10］报道基本一致，TLC 与对照品肉桂酸展开，两者Rf值一致，同对照品混合后熔点不下降，故化合物9 为肉桂酸(cinnamic acid)。

化合物10:白色无定形粉末(CHCl3)，分子式为C11H12O3，ESI-MS (m/z):191 ［M-H］-，表明其相对分子质量为192。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:8.55 (1H，s，5-OH)，7.58 (1H，dd，J = 8.0，1.0 Hz，H-7)，7.33 (1H，t，J = 8.0 Hz，H-8)，7.07 (1H，dd，J =8.0，1.0 Hz，H-6)，4.98 (1H，m，H-4)，3.57 (3H，s，4-OCH3)，2.87 (1H，m，H-2β)，2.63 (1H，m，H-2α)，2.24 (1H，m，H-3β)，2.11 (1H，m，3α)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:196.2 (C-1)，35.6 (C-2)，27.3 (C-3)，80.2 (C-4)，156.3 (C-5)，122.32 (C-6)，129.6 (C-7)，119.3 (C-8)，132.5 (C-9)，126.7 (C-10)，55.3 (C-11)。NMR 数据与文献［11］报道基本一致，故化合物10 为4-甲氧基-5-羟基-1-四氢萘酮(5-hydroxy-4-methoxy-α-tetralone)。

化合物11:红色针状结晶。EI-MS (m/z):218［M］+，表明其相对分子质量为218。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:6.08 (1H，s，H-3)，7.25(1H，d，J =8.7 Hz，H-6)，7.57 (1H，t，J =8.2，7.7 Hz，H-7)，7.66 (1H，d，J =7.5 Hz，H-8)，4.14 (2H，q，J = 7.0 Hz，H-11)，1.53(3H，t，J = 7.0 Hz)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.5 (C-1)，160.6 (C-2)，109.8(C-3)，190.7 (C-4)，161.3 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，131.3 (C-9)，114.3 (C-10)，65.7 (C-11)，13.9 (C-12)。NMR 数据与文献［12］报道基本一致，故化合物11为5-羟基-2-乙氧基-1，4-萘醌(2-ethoxy-5-hydroxyna phthalene -1，4 -dione)。

化合物12:黄色晶体。ESI-MS (m/z):348［M］-，表明其相对分子质量为348。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:11.54 (1H，s，7-OH)，11.51(1H，s，1-OH)，7.70 ～7.55 (2H，m，H-9，10)，7.52 (1H，dd，J = 8.5，7.6 Hz，H-3)，7.24 (1H，dd，J = 7.6，2.0 Hz，H-8)，7.16(1H，dd，J = 7.5，1.0 Hz，H-4)，6.93 (1H，dd，J = 8.5，1.2 Hz，H-2)，4.83 (1H，s，5-OH)，4.24 (1H，dd，J =4.0，1.2 Hz，H-12)，3.02 ～3.07 (2H，m，H-14)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:198.2 (C-13)，188.9 (C-6)，180.5 (C-11)，163.6 (C-1)，162.1 (C-7)，154.5 (C-5a)，148.8 (C-11a)，146.4 (C-4a)，137.4 (C-9)，136.8 (C-3)，132.7 (C-11a)，125.3 (C-8)，120.5 (C-10)，119.5 (C-2)，115.2 (C-6a)，110.6 (C-13a)，82.2 (C-5)，54.2 (C-14)，52.8 (C-12)。NMR 数据与文献［13］报道基本一致，故化合物12 为黄杞醌(Engelharquinone)。

化合物13:黄色针状晶体，mp 160 ～161 ℃。ESI-MS (m/z):205 ［M +H］+，表明其相对分子质量为204。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.91(3H，s，OCH3-2)，6.13 (1H，s，H-3)，12.20(1H，s，OH-5)，7.68 (1H，dd，J = 7.5，0.9 Hz，H-8)，7.56 (1H，dd，J =8.2，7.5 Hz，H-7)，7.27 (1H，dd，J =8.2，0.9 Hz，H-6)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δ:179.2 (C-1)，190.9(C-4)，161.2 (C-2)，161.2 (C-5)，125.1 (C-6)，135.5 (C-7)，119.6 (C-8)，109.4 (C-3)，114.1 (C-10)，131.2 (C-9)，56.7 (OCH3)。NMR 数据与文献［13］报道基本一致，故化合物为2-甲氧基胡桃醌(2-methoxyjuglone)。

化合物14:白色针晶，mp 139 ～141 ℃，Liebermann-Burchard 反应阳性。EI-MS (m/z):414［M］+，表明其相对分子质量为414。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:0.69 (3H，s，H-18)，0.82 (3H，t，J =7.0 Hz，H-29)，0.84 (3H，d，J = 6.8 Hz，H-26)，0.86 (3H，d，J = 7.2 Hz，H-21)，0.93 (3H，d，J =6.8 Hz，H-27)，1.02(3H，s，H-19)，3.55 (1H，m，H-3)，5.37(1H，d，J =5.2 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ:37.3 (C-1)，26.2 (C-2)，71.9 (C-3)，42.5 (C-4)，140.9 (C-5)，121.8 (C-6)，33.7 (C-7)，31.7 (C-8)，50.2 (C-9)，36.6(C-10)，21.3 (C-11)，39.9 (C-12)，42.2 (C-13)，56.6 (C-14)，24.2 (C-15)，28.4 (C-16)，56.2 (C-17)，19.6 (C-18)，11.8 (C-19)，36.3(C-20)，18.7 (C-21)，31.8 (C-22)，28.4 (C-23)，45.7 (C-24)，29.4 (C-25)，12.2 (C-26)，19.9 (C-27)，23.1 (C-28)，19.2 (C-29)。NMR数据与文献［14］报道基本一致，且在薄层板上与β-谷甾醇的对照品对照Rf值相同，样品与对照品混合熔点测定不下降，故化合物为β-谷甾醇(βsitosterol)。

化合物15:白色粉末，Liebermann-Burchard反应阳性，Molish 反应阳性。ESI-MS (m/z):575［M-H］-，表明其相对分子质量为576。IR (KBr)谱显示有羟基(3 450 cm-1)。TLC 与对照品胡萝卜苷展开，两者Rf值一致，同对照品混合后熔点不下降，故化合物15 为胡萝卜苷(daucosterol)。

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