高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量

2015-01-16 08:07卢晓华
广西中医药大学学报 2015年1期
关键词:万通批号供试

卢晓华

(广西万通制药有限公司,广西 南宁 530003)

万通炎康片由苦玄参、肿节风经提取加工制成,肿节风为处方中的主药,异嗪皮啶为肿节风药材中抗菌消炎、抗肿瘤的有效成分,是该制剂的含量测定指标[1]。在生产过程中,通过监测万通炎康片清膏的异嗪皮啶含量,在中间环节可有效地控制产品质量,评估药材在生产过程中的转移率。本文应用高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量,方法简单、结果准确、灵敏度高,现报道如下。

1 实验材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪:日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,LC-10Atvp泵,SPD-10Avp可变波长检测器;威玛龙色谱工作站;WondaSil GL Sciences C18柱(5.0 μm,4.6 mm×250 mm)。1.2 试药 乙腈:色谱纯;水:超纯水;磷酸:色谱纯;异嗪皮啶对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110837-201206,供含量测定用);万通炎康清膏(由广西万通制药有限公司提供,批号:131101、131104、131106、131110、131112、131128、131130、131201、131203、131205)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Wondasil GL Sciences C18柱(5.0 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(25∶75);流速:1.0 ml/min;检测波长:344 nm;理论板数按异嗪皮啶计算不低于3 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取异嗪皮啶对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取万通炎康片清膏约1 g,精密称定,置锥形瓶中,加水20 ml,超声处理20 min,放冷,转移至分液漏斗中,加三氯甲烷轻轻振摇提取5次,每次10 ml,合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例制备缺肿节风药材的万通炎康片清膏,精密称取清膏适量,按供试品溶液的制备方法进行提取制成阴性样品溶液。

取对照品、供试品和阴性样品溶液,分别进样10 μl,异嗪皮啶保留时间大约为9 min,在此色谱条件下,供试品可达到完全分离,阴性样品在9 min出峰处无干扰峰。HPLC图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 取异嗪皮啶对照品适量,精密称定为8.125 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取 1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml溶液,分别置于 50 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10 μl,按上述色谱条件注入色谱仪,测定峰面积值,以峰面积值为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,并求得标准曲线回归方程为:Y=35 498 X-15 176,r=0.9998,异嗪皮啶在0.065~0.325 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl,重复进样5次,峰面积的RSD为0.39%(n=5)。

2.3.3 稳定性试验 取同一供试品(批号:131101),依法制备供试品溶液,每隔 2 h(0,2,4,6,8,10 h)进样 1 次,进行了10 h考察,峰面积的RSD为1.28%(n=6),结果表明供试品溶液在10 h内测定保持稳定。

2.3.4 重现性试验 分别取同一批样品(批号:131101)5份,每份重约1 g,精密称定,按“样品测定”方法进行提取、测定,计算,结果其平均含量为 250.87 μg/g,RSD 为 0.77%(n=5)。

2.3.5 加样回收率试验 取已测知含量的样品(批号:131101,含量为0.2512 mg/g)1 g,精密称定。精密加入异嗪皮啶对照品溶液1 ml(浓度0.2400 mg/ml),按“样品测定”方法进行提取,测定,计算,结果异嗪皮啶平均回收率98.56%,RSD为1.02%(n=6)。见表 1。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2.3.6 样品测定 取10批样品,按含量测定方法依法测定异嗪皮啶含量,结果见表2。

表2 样品含量测定结果 (n=2)

3 讨 论

3.1 在供试品的制备过程中,使用三氯甲烷振摇提取时,为防止产生乳化现象,应避免剧烈振摇。

3.2 根据10批实验测定结果,清膏中异嗪皮啶含量最高为291.26 μg/g,最低为 252.76 μg/g。考虑到不同药材的来源含量不一,结合相对应药材批次转移率的考察,将清膏中异嗪皮啶的含量定为不低于220 μg/g,以此作为中间产品的质量控制标准,对实际生产具有良好的指导意义。

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:465.

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