高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量

卢晓华

（广西万通制药有限公司，广西 南宁 530003）

万通炎康片由苦玄参、肿节风经提取加工制成，肿节风为处方中的主药，异嗪皮啶为肿节风药材中抗菌消炎、抗肿瘤的有效成分，是该制剂的含量测定指标［1］。在生产过程中，通过监测万通炎康片清膏的异嗪皮啶含量，在中间环节可有效地控制产品质量，评估药材在生产过程中的转移率。本文应用高效液相色谱法测定万通炎康片清膏中异嗪皮啶的含量，方法简单、结果准确、灵敏度高，现报道如下。

1 实验材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪：日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，LC-10Atvp泵，SPD-10Avp可变波长检测器；威玛龙色谱工作站；WondaSil GL Sciences C18柱（5.0 μm，4.6 mm×250 mm）。1.2 试药 乙腈：色谱纯；水：超纯水；磷酸：色谱纯；异嗪皮啶对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110837-201206，供含量测定用）；万通炎康清膏（由广西万通制药有限公司提供，批号：131101、131104、131106、131110、131112、131128、131130、131201、131203、131205）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Wondasil GL Sciences C18柱（5.0 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（25∶75）；流速：1.0 ml/min；检测波长：344 nm；理论板数按异嗪皮啶计算不低于3 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取万通炎康片清膏约1 g，精密称定，置锥形瓶中，加水20 ml，超声处理20 min，放冷，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷轻轻振摇提取5次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例制备缺肿节风药材的万通炎康片清膏，精密称取清膏适量，按供试品溶液的制备方法进行提取制成阴性样品溶液。

取对照品、供试品和阴性样品溶液，分别进样10 μl，异嗪皮啶保留时间大约为9 min，在此色谱条件下，供试品可达到完全分离，阴性样品在9 min出峰处无干扰峰。HPLC图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 取异嗪皮啶对照品适量，精密称定为8.125 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml溶液，分别置于 50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积值，以峰面积值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并求得标准曲线回归方程为：Y=35 498 X-15 176，r=0.9998，异嗪皮啶在0.065～0.325 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，峰面积的RSD为0.39%（n=5）。

2.3.3 稳定性试验 取同一供试品（批号：131101），依法制备供试品溶液，每隔 2 h（0，2，4，6，8，10 h）进样 1 次，进行了10 h考察，峰面积的RSD为1.28%（n=6），结果表明供试品溶液在10 h内测定保持稳定。

2.3.4 重现性试验 分别取同一批样品（批号：131101）5份，每份重约1 g，精密称定，按“样品测定”方法进行提取、测定，计算，结果其平均含量为 250.87 μg/g，RSD 为 0.77%（n=5）。

2.3.5 加样回收率试验 取已测知含量的样品（批号：131101，含量为0.2512 mg/g）1 g，精密称定。精密加入异嗪皮啶对照品溶液1 ml（浓度0.2400 mg/ml），按“样品测定”方法进行提取，测定，计算，结果异嗪皮啶平均回收率98.56%，RSD为1.02%（n=6）。见表 1。

表1 加样回收率试验结果 （n=6）

2.3.6 样品测定 取10批样品，按含量测定方法依法测定异嗪皮啶含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果 （n=2）

3 讨 论

3.1 在供试品的制备过程中，使用三氯甲烷振摇提取时，为防止产生乳化现象，应避免剧烈振摇。

3.2 根据10批实验测定结果，清膏中异嗪皮啶含量最高为291.26 μg/g，最低为 252.76 μg/g。考虑到不同药材的来源含量不一，结合相对应药材批次转移率的考察，将清膏中异嗪皮啶的含量定为不低于220 μg/g，以此作为中间产品的质量控制标准，对实际生产具有良好的指导意义。

［1］中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典［S］．一部.北京：中国医药科技出版社，2010：465.