HPLC 同时测定不同产地远志饮片中6 种寡糖酯类成分

姜 秋， 李慧芬， 梁 晓， 张学兰

(山东中医药大学，山东 济南250355)

远志为临床常用的安神益智中药，具有安神益智、交通心肾、祛痰、消肿的功效［1］。研究表明，寡糖酯类成分为远志安神益智的主要活性成分，具有抗抑郁、抗老年痴呆、神经保护及抗氧化活性［2-7］。《中国药典》2010 年版规定，远志药材及其饮片中3，6＇-二芥子酰基蔗糖均不得少于0.50%［1］。但远志中含有多种寡糖酯类成分，迄今为止，已从远志中分离出的寡糖酯类化合物有近30 种［8-9］。孙长清等用HPLC 法测定了不同产地远志药材中抗老年痴呆活性成分西伯利亚远志糖A5和西伯利亚远志糖A6［10］，但HPLC 同时测定远志饮片中3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球 腺 糖 A、 tenuifolisideA、 tenuifolisideB、tenuifoliside C 尚未见报道。本实验建立了HPLC 同时测定远志饮片中上述6 种寡糖酯类成分的方法，并测定了6 个不同产地远志饮片中6 种寡糖酯类成分的含有量，为科学控制和评价远志饮片的质量提供实验依据。

1 仪器与试药

L-2000 型高效液相色谱仪(日本日立公司);FA1604N 型电子天平(上海精密科学仪器有限公司，1/10 万);KQ-250E 型医用超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司)。远志饮片购自山东百味堂中药饮片有限公司、济南宏济堂中药饮片公司及济南建联中药店，产地分别为陕西、河南、山西(太原和沂州地区)、山东、河北。经山东中医药大学中药鉴定教研室周凤琴教授鉴定为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd干燥根的段状饮片。3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖 A5、球腺糖 A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 对照品(本课题组自制，纯度均大于98%);高效液相用乙腈(色谱纯)，娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［11］Kromasil C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)溶液，梯度洗脱(0 ～10 min，8%A →12%A;10 ～25 min，12% A →25% A;25 ～40 min，25% A→75% A);柱温30 ℃;检测波长330 nm，体积流量1.0 mL/min。在上述色谱条件下，6 种寡糖酯类成分与其他组分分离度良好，色谱图见图1。

2.2 供试品溶液的制备［10］取6 个不同产地远志饮片粉末(过60 目筛)各约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，密塞，称定质量，超声提取40 min，取出，放冷，再称定质量，用50% 甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，以0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。

图1 混合对照品(A)与远志饮片(B)HPLC 图Fig.1 Chromatograms of six kinds of oligosaccharide esters mixed reference substances (A)，raw herbal pieces (B)

2.3 混合对照品溶液的制备 精密称取3，6＇-二芥子酰基蔗糖2.73 mg、西伯利亚远志糖A5 2.22 mg、球腺糖A 3.05 mg、tenuifoliside A 2.75 mg、tenuifoliside B 3.08 mg、tenuifoliside C 3.55 mg，分别置于5、5、25、5、10、25 mL 量瓶中，分别加50%甲醇制成每1 mL 含3，6＇-二芥子酰基蔗糖0.546 mg、西伯利亚远志糖A 0.444 mg、球腺糖A 0.122 mg、tenuifoliside A 0.550 mg、tenuifoliside B 0.308 mg、tenuifoliside C 0.142 mg 的对照品贮备液。分别精密量取3，6＇-二芥子酰基蔗糖对照品贮备液2 mL 及其余5 种对照品贮备液各1 mL，置同一10 mL 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.4 线性关系考察 精取“2.3”项下混合对照品溶液1、2、5、10、40 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项色谱条件进行测定，记录色谱峰峰面积，以色谱峰面积(Y)为纵坐标，以进样量X(μg)为横坐标，进行线性回归，结果各成分线性关系良好，见表1。

表1 6 种寡糖酯类成分的线性关系考察结果Tab.1 Linear relationship of the six kinds of oligosaccharide esters

2.5 精密度试验 精取供试品溶液10 μL，重复进样6 次，测定3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 的峰面积。结果RSD 分别为1.0%、1.3%、1.4%、1.1%、1.4%、1.4%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精取同一供试品溶液10 μL，分别在0、2、4、8、12、24 h 进样，测定3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 峰面积，结果 RSD 分别为 1.1%、1.2%、1.4%、1.2%、1.5%、1.4%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

2.7 重复性试验 取同一产地远志饮片粉末(过60 目筛)6 份，各约0.2 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球 腺 糖 A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 的含有量，结果6 次测定的RSD 分别为1.3%、1.3%、1.7%、1.4%、1.9%、1.7%，表明该方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验 取已测知含有量的远志饮片(陕西)粉末(过60 目筛)6 份，各约0.1 g，精密称定，分别精密加入3，6＇-二芥子酰基蔗糖(0.824 mg/mL)、西伯利亚远志糖A5 (0.227 mg/mL)、球腺糖A (0.062 mg/mL)、tenuifoliside A (0.261 mg/mL)、tenuifoliside B (0.125 mg/mL)、tenuifoliside C (0.082 mg/mL)对照品溶液各1 mL，再以50%甲醇补足至20 mL，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样分析，结果见表2。

2.9 样品测定 精取混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪分析测定，按干燥品计算样品中各指标成分含有量，结果见表3。

表2 加样回收率试验结果(n=6)Tab.2 Results of recovery tests (n=6)

表3 6 种成分测定结果(%，n=2)Tab.3 Determination results of the six kinds of oligosaccharide esters (%，n=2)

3 小结与讨论

3.1 本研究对不同产地远志饮片中球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 进行了测定，并建立了HPLC 梯度洗脱同时测定不同产地远志饮片中3，6＇-二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖A5、球腺糖A、tenuifoliside A、tenuifoliside B、tenuifoliside C 的定量分析方法。结果表明，该方法操作简便、灵敏可靠、重复性好，为远志的进一步开发以及饮片的质量控制和评价提供了新的测定方法。

3.2 研究表明，不同产地远志饮片中6 种寡糖酯类成分含有量相差较大，其中河南产地远志饮片中3，6＇-二芥子酰基蔗糖含有量最低为0.44%，低于《中国药典》规定的不得少于0.5%的限量要求，其余产地3，6＇-二芥子酰基蔗糖含有量均符合药典规定。远志饮片中除3，6＇-二芥子酰基蔗糖含有量较高外，西伯利亚远志糖A5、tenuifoliside A、tenuifoliside B 在各产地远志饮片中含有量也较高。鉴于寡糖酯类成分为远志抗老年痴呆和抗抑郁的活性成分，能够反映远志安神益智的药效，建议以多种寡糖酯类成分共同控制和评价远志药材及其饮片的质量。

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