三黄颗粒中黄芩素代替黄芩苷的药理比较

刘 沛， 马 乐， 王 琼， 常金花， 刘翠哲 ， 苗光新

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德067000)

黄芩为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根，多以根入药，有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效［1］。黄芩苷是黄芩的主要有效成分，也是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分，具有抗炎、解热、泻火、止血、安胎等药理作用［2］。有关文献研究表明，黄芩苷口服后不直接被吸收，而是在肠道内经菌群作用下转化为黄芩素被吸收［3］。胃肠吸收动力学研究表明，口服黄芩苷吸收较差，生物利用度较低，从21.2%到30%左右不等，口服黄芩素的达峰浓度和生物利用度均高于口服黄芩苷［4-7］，提示黄芩素比黄芩苷更适合制成口服吸收制剂。因此用黄芩素提取物代替黄芩苷提取物开发含黄芩中药制剂，具有广大的前景。

三黄片是常用中药，来源于《金匮要略》的“泻心汤”，功能主治:清热解毒，泻火通便。处方为:大黄、质量分数为70%以上黄芩苷浸膏和盐酸小檗碱。现代药理研究证明三黄片具有解热、镇痛、抗炎和泻下等作用［8-9］，泻下作用为大黄中蒽醌类成分的作用，黄芩浸膏对此处方中的解热、镇痛、抗炎作用有贡献。本实验选择三黄片为原型药物，用黄芩素提取物代替黄芩苷浸膏投料，制备素代三黄颗粒，以原方制备三黄颗粒，考察黄芩素代替黄芩苷后制备的素代三黄颗粒与原方制备的三黄颗粒的药效比较，以期为黄芩素代替黄芩苷投料制备中药制剂提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物 Wistar 大鼠，体质量180 ～220 g，合 格 证 号: SCXK (冀) 2008-1-003， 批 号1005141，河北省实验动物中心;昆明小鼠，体质量20 ～22 g，合格证号:SCXK 京2009-2007，北京华阜康生物科技股份有限公司。

1.2 材料 大黄，黄芩(承德药材集团，赵春颖老师鉴定合格);0.9%氯化钠注射液(石家庄四药有限公司，批号070901);阿司匹林(承德市普宁制药厂，批号20070225);干酵母(湖北安琪酵母有限公司，批号200801013);黄芩素对照品中国食品药品检定研究院，批号0715-9708);黄芩苷对照品 (中国食品药品检定研究院，批号110715-200514);盐酸小檗碱，黄芩苷提取物(邯郸摩罗丹药业股份有限公司，批号20071106;20071110);醋酸、乙醇、二甲苯等试剂均为分析纯，由北京化学试剂厂供应。

2 方法和结果

2.1 样品制备

2.1.1 黄芩素的提取［10-11］将黄芩药材粉碎过1号筛，称取100 g，加1 000 mL 水，将容器密闭，60 ℃保温10 h (酶解)，将酶解好的上述药材加入95%乙醇2 800 mL，配成相当于70%的乙醇溶液，超声(功率300 W，时间20 min)，纱布过滤，向药渣中加入适量70%乙醇，再进行超声提取(条件如上)，如此反复4 次，合并滤液，减压回收乙醇，所得浸膏放入恒温箱中干燥。将干燥后得到的黄芩素提取物，加适量蒸馏水，搅拌，静置过夜，过滤，干燥，得黄芩素提取物 (含黄芩素63.5%)。

2.1.2 三黄颗粒的制备 大黄100g，盐酸小檗碱1.701 g，黄芩苷提取物(含黄芩苷79.1%)6.321 g，取大黄50 g，粉碎成细粉，过六号筛;剩余大黄粉碎成粗粉过一号筛，加30%乙醇回流提取3次，每次提取1 h，滤过，合并滤液，回收乙醇并减压浓缩至稠膏状，加入大黄细粉、盐酸小檗碱细粉、黄芩素提取物细粉，混匀，制成颗粒过12 目筛，干燥，过24 目筛，即得。

2.1.3 素代三黄颗粒的制备 大黄100 g，盐酸小檗碱1.701 g，黄芩素提取物(含黄芩素63.5%)4.767 g，制备方法同“2.1.2”项。三黄颗粒是按照《中国药典》2010 版中三黄片的方法自制而得，其中黄芩苷的含有量为6.74%，素代三黄颗粒是把三黄颗粒中的黄芩苷按比例等物质的量替换为黄芩素制得，其中黄芩素含有量为4.06%。

2.3 素代三黄颗粒和三黄颗粒对大鼠解热作用比较 取体质量180 ～220 g 的wistar 大鼠，雌雄各半，用电子体温计测其体温，每日1 次，连续3 d，选取体温变化在0.3 ℃以内且温度在36.6 ～38.3 ℃［10］之间的大鼠备用。取体温合格大鼠，禁食12 h (不禁水)，在背部皮下注射20%干酵母混悬液(1 mL/100 g)，注射后4 h 开始测量体温，每小时1 次，注射后6 h 体温升高达1 ℃的大鼠40只。随机分为素代三黄颗粒1.00 g/kg (相当于黄芩素0.039 g/kg)，三黄颗粒1.00 g/kg (相当于黄芩苷0.067 g/kg)，空白对照组(给予生理盐水)，阿斯匹林阳性药组(0.15 g/kg)，每组10 只。灌胃给药。分别于药后1、2、3、4、5、6、7、8、9 h 的每只大鼠的直肠温度，计算温度变化的差值。采用方差分析各组间差异，结果见图1。

图1 三黄颗粒和素代三黄颗粒对干酵母致大鼠发热体温的影响(±s)Fig.1 Effects of Sanhuang Granules and replacing of baicalin with baicalein in Sanhuang Granules on dried yeast-induced fever in rats (±s)

由图1 可知，与空白对照组比较，素代三黄颗粒组对干酵母引起的大鼠发热的抑制作用在给药后7、8、9 h 差异有统计学意义;与三黄颗粒组比较，素代三黄颗粒组对干酵母引起的大鼠发热的抑制作用在给药后8、9 h 差异有统计学意义。

2.4 素代三黄颗粒和三黄颗粒对小鼠镇痛作用比较 取40 只小鼠，雌雄各半，体质量20 ～22 g，分组同“2.2”项。每天灌胃给药1 次，连续7 d。末次给药后30 min，腹腔注射0.6% 醋酸生理盐水溶液0.2 mL/10 g，观察15 min 内各鼠出现扭体反应次数，计算镇痛率，镇痛率=［(空白对照组平均扭体次数-实验组平均扭体次数)/空白对照组平均扭体次数］×100%。采用方差分析各组间差异，结果见表1。

表1 素代三黄颗粒和三黄颗粒对醋酸所致小鼠疼痛作用的影响(±s)Tab.1 Effects of Sanhuang Granules and replacing of baicalin with baicalein in Sanhuang Granules on acetic acid-induced writhing response in mice (±s)

表1 素代三黄颗粒和三黄颗粒对醋酸所致小鼠疼痛作用的影响(±s)Tab.1 Effects of Sanhuang Granules and replacing of baicalin with baicalein in Sanhuang Granules on acetic acid-induced writhing response in mice (±s)

组别 剂量/(g·kg -1)例数 扭体次数/(次·15 min -1) 镇痛率/%10 25.51 ±5.90阳性对照组 0.15 10 4.12 ±4.52▲★ 83.85三黄颗粒组 1.00 10 15.15 ±6.61▲ 40.61素代三黄颗粒组 1.00 10 9.52 ±2.42▲★空白对照组62.68

结果表明，与空白对照组比较，素代三黄颗粒组对对醋酸所致小鼠疼痛反应有明显的抑制作用，抑制率为62.68%，效果优于三黄颗粒组。

2.5 对急性炎症-蛋清致大鼠足跖肿胀反应的影响wistar 大鼠40 只，体质量180 ～220 g，雌雄各半，分组同“2.2”项，各组大鼠按20 mL/kg 容积，每天灌胃给药1 次(对照组给等量蒸馏水)，连续给药4 次。实验时于每只大鼠右后足趾注射10%新鲜蛋清0.1 mL (注射前用游标卡尺测定其厚度为给药前值)，注入蛋清后分别在1、2、3、4、5、6 h测定每只大鼠右后足趾厚度，以各时间厚度与给药前值的差值为肿胀度，并与对照组对照。采用方差分析各组间差异，结果见图2。

图2 三黄颗粒与素代三黄颗粒对蛋清致大鼠足跖急性炎症反应的影响(±s)Fig.2 Effects of Sanhuang Granules and replacing of baicalin with baicalein in Sanhuang Granules on albumin-induced foot swelling in rats (±s)

结果显示与空白对照组相比，三黄颗粒和素代三黄颗粒对新鲜蛋清引起的大鼠足趾肿胀的抑制作用在1 ～6 h 内均具有统计学意义(P ＜0.05)。与三黄颗粒相比，素代三黄颗粒和阳性对照组对新鲜蛋清引起的大鼠足趾肿胀的抑制作用差异在2、3、4 h 具有统计学意义(P ＜0.05)。

3 讨论

黄芩为常用中药，很多中成药中含有黄芩。黄芩苷为其主要有效成分，但现代研究证明黄芩素是黄芩苷在体内发挥药理作用的最终物质，且黄芩素的胃肠吸收效果，生物利用度及药效均优于黄芩苷，故对黄芩素及其衍生物及其单体应用的研究越来越多。而根据中药多为复方用药的特点，研究以黄芩素代替黄芩苷投料，并根据黄芩素的吸收特点进行复方制剂则更有意义。

传统的黄芩饮片炮制过程为沸水煮透或蒸透，目的是将药材中自身含有的水解黄芩苷的酶破坏掉，保证有效成分的稳定性。但前期实验研究发现从药店购得的黄芩饮片大多没有进行高温杀酶处理或杀酶处理不完全［12］，同时也发现部分药厂因使用炮制不合格的黄芩饮片而造成了很大的经济损失。本实验中恰恰利用了黄芩中的这种酶，将黄芩苷转化为黄芩素，条件温和环保，提取率高，适宜黄芩素的提取。通过对三黄颗粒和素代三黄颗粒的解热、镇痛及不同类型的抗炎模型的作用效果的比较，发现素代三黄颗粒药效优于三黄颗粒，这样既提供了一种温和而环保的提取黄芩素的方法，也为以黄芩素代替黄芩苷投料制剂提供了实验依据。

本实验采用的解热、镇痛、抗炎模型都是较常用且较简便的模型，方法成熟，可反应素代三黄颗粒的药理作用。炎症是十分常见而又重要的基本病理过程，是机体对局部损伤所发生的一种以防御为主的组织反应，其基本病理变化包括变质、渗出和增生。炎症早期以变质和渗出为主，中期以白细胞游走、浸润、趋化为主，晚期以增生为主［13］。非特异性炎症反应模型即模拟炎症不同病理时期造成毛细血管通透性模型、耳肿胀或足肿胀模型以及肉芽肿模型。文献报道［14］黄芩对不同类型的炎症有治疗作用，但不同成分对同种炎症模型或同种成分对不同的炎症动物模型敏感度不同，因此我们将做进一步研究，比较黄芩素和黄芩苷对不同类型炎症的治疗作用。

［1］ 董玲婉，吕圭源. 浅谈中药黄芩的药理作用［J］. 浙江中医药大学学报，2007，31(6):787-788.

［2］ 张建春，张 华，施 瑛，等. 黄芩苷的研究近况［J］.时珍国医国药，2005，16(3):247-249.

［3］ 刘太明，蒋学华，张梅娟，等. 黄芩苷和黄芩素的大鼠在体肠吸收特性［J］. 中国药学杂志，2006，41 (23):1784-1787.

［4］ Xing J，Chen X Y，Sun Y M，et al. Interaction of baicalin and baicalein with antibiotics in the gastrointestinal tract［J］. J Pharm Pharmacol，2005，57(6):7432-7450.

［5］ Liu T M，Jiang X H. Investigation of the absorption mechanisms of baicalin and baicalein in rats［J］. J Pharm Sci，2006，95(6):1326-1333.

［6］ 许伯慧，严菲. 黄芩苷及其苷元黄芩素体内过程的研究进展［J］. 南通大学学报，2010 ，30(3):220-223.

［7］ 洪 怡，何 伟，李 丹. 黄芩苷脂质体的制备及体外抗肿瘤作用［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18(3):29-31.

［8］ 李 颜，郭 澄. 三黄泻心汤的现代药理研究进展［J］.中国药房，2010，21(11):1048-1050.

［9］ 佟继铭，刘玉玲，陈光辉. 三黄片抗炎药理作用实验研究［J］. 中国药物评价，2012，29(1):18-21.

［10］ Zhang Yufei，Wu Hong，Li Lin，et al. Enzymatic conversion of Baicalin into Baicalein by β-glucuronidase encapsulated in biomimetic core-shell structured hybrid capsules［J］. J Mol Catal B Enzyme，2009，57(1-4):130-135.

［11］ 刘云华，黄志芳，陈 燕，等. 酶解法提取黄芩中黄芩素的工艺研究［J］. 天然产物与开发，2007，19:688-691.

［12］ 苗光新，李忠思，吴宁宁，等. 市售黄芩饮片的炮制质量［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18(22):91-94.

［13］ 宋旦哥，孟庆刚. 不同来源黄芩醇提物与水提物抗炎作用比较研究［J］. 中华中医药学刊，2010，28 (9):1852-1854.

［14］ 李红军. 黄芩提取物抗炎活性试验研究［J］. 特产研究，2013(2):16-18.