固相萃取-高效液相色谱荧光法测定食用油中苯并（a）芘

冯 辉 谢君红 马丽萍

（余姚市食品检验检测中心，余姚 315400）

固相萃取-高效液相色谱荧光法测定食用油中苯并（a）芘

冯 辉 谢君红 马丽萍

（余姚市食品检验检测中心，余姚 315400）

建立固相萃取-高效液相色谱法测定食用油中苯并（a）芘的检测方法。样品经苯并（a）芘专用SPE小柱净化、浓缩，沃特世反相C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱进行分离，流动相为乙腈∶水（95∶5，体积比），流量1.0 mL／min，激发波长384 nm，发射波长406 nm。结果表明，苯并（a）芘在浓度范围0.2～50μg／kg内线性良好，相关系数为0.999 9，最低检出限为0.1μg／kg，精密度RSD＜3%，回收率88.6%～101%。本方法快速便捷、准确率高、重现性好、可同时处理大量样品，为食用油中苯并（a）芘的测定提供参考。

固相萃取 高效液相色谱 荧光检测 苯并（a）芘 食用油

苯并（a）芘（Benzo（a）pyrene）是一种多环芳香族碳氢化合物，难溶于水，易溶于环己烷、苯、甲苯、丙酮等有机溶剂，高活性致癌、致畸、致突变物质，对人类基因有害。采用浸出法制油时，如果溶剂质量不符合要求，轻汽油（作为溶剂）中含有较高的多环芳烃类，可造成对油脂的污染。油脂在使用过程中因油温过高，而且反复使用，致使油脂在高温下发生热聚，形成多环芳烃类物质。苯并（a）芘随油炸食品被摄入人体后，能迅速被肠道吸入血液并分布于全身，易导致皮肤癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等，是世界公认的三大强致癌物质之一。我国在卫生标准中规定苯并（a）芘在食用油中的残留为10μg／kg以下。目前，食品中苯并（a）芘的测定方法有荧光法［1］、目测比色法［1］、液相色谱法［2-3］等，研究采用成品固相萃取柱进行样品前处理、净化、浓缩，高效液相荧光检测器测定食用油中的苯并（a）芘，操作步骤简单快捷，拟建立快速准确的检测食用油中的苯并（a）芘的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

2695型液相色谱仪带2475型荧光检测器：美国沃特世公司；SC-8L-150型固相萃取仪：广州智真生物科技公司；OA-SYS型氮吹仪：美国Organomation公司；GENIUS 3漩涡混合器：德国艾卡公司；SK5200H超声波清洗机：上海科导公司；DI型超纯水仪：德国赛多利斯公司；BAP专用 SPE小柱（500 mg／6 mL）：上海安谱公司；BAP苯并（a）芘标准品（99.6%）：德国DR.公司；色谱纯二氯甲烷、正己烷、乙腈：迪马科技公司；试验用水为超纯水（18.3 MΩ×cm）。

1.2 试验方法

1.2.1 提取：称取试样0.5 g（精确至0.001 g），加入3 mL正己烷漩涡混合10 s，待净化。

1.2.2 净化洗脱浓缩：Bap专用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化。将待净化液上样到小柱上，然后用2 mL正己烷润洗样品瓶，上样到柱上，保持1.0 mL／min流速过柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液弃去。用5 mL二氯甲烷洗脱小柱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，1 mL乙腈定容，超声1 min，漩涡混合10 s，过0.22μm PTTE针式滤器过滤，上机检测。

1.3 标准工作溶液的配置

称取标准品0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg／mL标准储备液，4℃冰箱保存。

标准工作溶液配制：准确移取相应标准储备液，用乙腈稀释成 0.10、0.20、0.50、1.0、5.0、10.0、20.0 μg／kg的系列标准工作溶液，临用前配制。

1.4 色谱条件

沃特世反相C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30℃，流动相为乙腈∶水（95∶5，体积比），流量1.0 mL／min，激发波长384 nm，发射波长406 nm，进样量10μL。

2 结果分析

2.1 固相萃取小柱的选择

试验比较了安谱BAP专用SPE小柱，和GB／T 22509—2008推荐的人工填装中性氧化铝柱。采用商业固相萃取柱，与填装的氧化铝柱相比，不需要进行复杂的活度调节和活性测试，节省大量时间，稳定性好，整个检测操作时间不超过1 h，溶剂使用量少，回收率较高。标准品、空白样品添加标准品图谱见图1。

2.2 线性范围和检出限

对系列标准工作溶液按照色谱条件进样分析，以峰面积定量，得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程，在线性范围0.10～50μg／kg线性方程1.22×104X-6.21×103，线性相关系数为0.999 9。按3倍信噪比计算，方法的检出限（LOD）约为0.02μg／kg，按10倍信噪比计算，方法的定量下限（LOQ）约为0.10μg／kg。

2.3 回收率和精密度

取空白大豆油样品12份，按3个加标水平加标，按1.2前处理和色谱条件测试，测定苯并（a）芘的加标回收率见表1，回收率88.6%～101.0%，相对标准偏差均小于2%，精密度良好，满足分析要求。

该BAP专用SPE小柱的理论柱容量约为5 mg，理论过载浓度约为10 g／kg，当加标水平为500μg／kg时，平均回收率为94.5%，RSD为2.4%，能够满足检测需要。国家限量标准对苯并（a）芘规定为不超过10μg／kg，如果实际样品检测过程中浓度大于500 μg／kg时，考虑到仪器检测范围可增加提取溶剂，吸取一定比例提取液重新过柱检测。

表1 加标回收率和精密度试验结果（n＝3）

2.4 未知样品中苯并（a）芘的含量测定

利用本方法对市售的10种样品进行检测，结果见表2。由分析结果可知，苯并（a）芘含量均未超过10μg／kg的国家限量标准。

表2 未知样品中苯并（a）芘的含量

3 结论

采用成品商业固相萃取柱对食用油中苯并（a）芘进行净化、提取，用高效液相色谱仪荧光检测器对苯并（a）芘进行测定，相比GB／T 22509—2008《动植物油脂苯并（a）芘的测定反相高效液相色谱法》，大大缩短检测时间、节约试剂，准确率高，重现性好，线性关系、精密度和准确度均获得满意的结果，能够更好地满足食用油中苯并（a）芘的分析检测。

［1］GB／T 5009.27—2003，食品中苯并（a）芘的测定［S］

［2］GB／T 22509—2008动植物油脂，苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法［S］

［3］NY／T 1666—2008，肉制品中苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法［S］

［4］王红青，韩里明，屠海云，等.固相萃取-超高相液相色谱荧光法测定植物油中苯并（a）芘［J］.食品科学，2012，33（14）：216-218

［5］林慧，颜春荣，徐春祥.固相萃取-高相液相色谱法测定肉制品中中苯并（a）芘［J］.肉类研究，2012，26（6）：24-27

［6］牟钧.固相萃取—高效液相色谱法测定食品中的苯并（a）芘［J］.粮油食品科技，2011，19（3）：42-44

［7］李进伟，王兴国，金青哲.食用油中苯并（a）芘的来源、检测和控制［J］.中国油脂，2011，36（6）：7-11

［8］郑睿行，夏爱萍，祝华明，等.凝胶渗透色谱-液相色谱法测定熏烤肉制品中的苯并（a）芘［J］.食品研究与开发.2013，36（12）：76-78.

Determination of Benzo（a）pyrene in Edible Oil by HPLC with Solid Phase Extraction

Feng Hui Xie Junhong Ma Liping
（Yuyao Food Inspection and Testing Center，Yuyao 315400）

A solid phase extraction-high performance liquid chromatography（HPLC）method.was determined Benzo（a）pyrene in edible oil.The sample was purified and concentrated on a benzo（a）pyrene special solid phase extraction column（SPE）and separated on a Waters reversed phase C18（150 mm×4.6 mm，5μm）chromatographic column by using amobile phase composed of acetonitrile and water（95∶5，V／V）at a flow rate of 1.0 mL／min，with the excitation wavelength of 384 nm，and the emission wavelength of 406 nm.The result showed that benzo（a）pyrene showed good linearity relationship over the concentration range of 0.2～50μg／kg，a coefficient correlation was 0.999 9，the lowest limit of detection was0.1μg／kg，and the precision（RSD）was below 3%，the recovery rate was between 88.6%～101%.Themethod was rapid，convenient，high accuracy and good reproducibility，and could handle a large number of samples at the same time，and suitable determination for Benzo（a）pyrene in Edible oil.

solid-phase extraction，high performance liquid chromatography，fluorescence detection，benzo（a）pyrene，edible oil

TQ646

A

1003-0174（2015）07-0108-03

2014-01-29

冯辉，男，1980年出生，工程师，食品科学与工程