ABCC4和CEA在胃癌中的作用

王晓亮 李绍刚 李赛飞 林寒冰 曹斌校 王 军

奉化市人民医院，浙江奉化 315500

据Pakin 研究报道，胃癌为高发生率肿瘤，其死亡例数排位世界第二[1]。流行病学显示胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一。虽然胃癌的诊疗技术有了很大的提高，但是多数患者就诊时处于晚期，总体预后仍较差。ABCC4(ATP-binding cassette，subfamily C member 4)，是Cole 等研究小细胞肺癌时发现的耐药基因家族成员[2]。CEA 为癌胚抗原,属于CEA 基因家族成员。该研究通过检测胃癌组织标本中的ABCC4、CEA 表达水平，分析其与胃癌临床病理因素的相关性，以期作为评估治疗及预后的标志物，现分析2010年1月—2013年1月间该院收治的100 例胃癌患者的临床资料，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取在该院收治的胃癌患者100 例。病例特点：男性76例，女性24 例；年龄29～80 岁，平均年龄（61.23±10.4）岁。手术后病理结果：pT2 13 例，pT3 51 例，pT4?36 例；淋巴结pN0 28 例，pN1 21 例，pN2 26 例，pN3 25 例；pTNM 分期：IIA 期7 例，IIB 期23 例，IIIA 期19 例，IIIB 期21 例，V 期8 例；随访到2013年7月，随访期间死亡20 例。病例纳入标准：符合美国癌症联合委员会(AJCC )(第7 版)进展（期）胃癌诊断标准。排除标准：术前化疗，术前放疗，术前行胸片、腹部CT 检查肺部、肝脏、腹主动脉旁淋巴结等远处转移者。

1.2 试剂与方法

1.2.1 标本 所有组织蜡块均由该院病理科包埋，每例胃癌组织病理切片均由两位专家确诊。胃粘膜组织取自上述100 例标本距癌组织3 cm 以上的癌旁胃粘膜组织。

1.2.2 试剂 ABCC4 单克隆抗体购自美国SantaCruz 公司，CEA单克隆抗体购自福州迈新生物开发公司。

1.2.3 方法 采用免疫组织化SP 法。将标本连续切片，常规脱蜡、水化，经3%的H2O2消化内源性过氧化物酶，高压抗原修复，一抗(鼠抗人ABCC4、CEA 单克隆抗体)、二抗(生物素标记)作用后，用DAB 显色，苏木素复染后脱水透明，常规中性树胶封固后显微镜下观察。以PBS 代替一抗作阴性对照。

1.3 免疫组化结果判定

ABCC4 阳性表达定位于细胞膜或浆，呈现棕黄色或棕褐色颗粒，取5 个高倍视野，每个视野分别计数100 个细胞，计算阳性细胞所占百分率。染色结果根据阳性细胞占比率分为4 个等级，<5%为0 分；6～25%为1 分；26～50%为2 分，51～75%为3 分；≥76%为4 分。按着色程度计分：未着色为0 分；淡黄色为1 分；棕黄色为2 分，棕褐色为3 分，两种记分所得分值之和：0～1 分为阴性（0）；2 分为弱阳性（+）；3～4 分为中度阳性（++）；≥5 分为强阳性（+++）。

CEA 阳性表达定位与胞浆，呈现棕黄色或棕褐色颗粒，取5个高倍视野，每个视野分别计数100 个细胞，以切片中阳性数大于25%为阳性。

1.4 统计方法

所有数据均经SPSS17.0 软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。相关性采用Spearman 法分析。

2 实验结果

2.1 ABCC4 在胃癌组织和癌旁胃粘膜组织中的表达

100 例胃癌组织中ABCC4 阳性表达19 例，阳性表达率为19%；100 例癌旁胃粘膜组织中ABCC4 阳性表达1 例,阳性表达率为1%.ABCC4 在胃癌组织中的阳性表达率明显高于胃粘膜组织中的阳性表达率，差异有统计学意义(t=4.263，P=0.039＜0.05)，见图1，图2。

图1 ABCC4 在胃癌癌旁胃粘膜组织的阴性表达

图2 ABCC4 在胃癌组织的阳性表达

2.2 ABCC4 在胃癌中的表达与临床病理因素的关系

在100 例胃癌标本中，ABCC4 阳性表达率在T2、T3、T4 分别为0%、17.6%、27.8%，差异无统计学意义(P>0.05)；ABCC4 阳性表达率在N0、N1、N2、N3 分别为17.9%、19.0%、23.1%、16.0%，差异无统计学意义(P>0.05)；ABCC4 阳性表达率在胃低分化腺癌、高分化腺癌中分别为11.3%、27.7%，差异有统计学意义(P<0.05)，ABCC4 阳性表达率在是否复发中分别为17.4%、19.5%，差异无统计学意义(P>0.05)，见图3，图4，表1。

图3 ABCC4 阳性表达率在胃低分化腺癌的阳性表达

图4 ABCC4 阳性表达率在胃高分化腺癌的阳性表达

2.3 CEA 在胃癌中的表达与临床病理因素的关系

在100 例胃癌标本中，CEA 阳性表达率在T2、T3、T4 分别为38.5%、33.3%、36.1%，差异无统计学意义(P>0.05)；CEA 阳性表达率在N0、N1、N2、N3 分别为28.6%、42.9%、26.9%、44.0%，差异无统计学意义(P>0.05)；CEA 阳性表达率在胃高分化腺癌、低分化腺癌中分别为23.4%、45.2%，差异有统计学意义(P<0.05)，CEA阳性表达率在是否复发中分别为30.4%、36.4%，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 ABCC4 与胃癌临床病理因素的关系

表2 CEA 与胃癌临床病理因素的关系

2.4 胃癌组织中CEA 与ABCC4 表达水平的相关性分析

在CEA 表达阳性的35 例中，ABCC4 阳性表达占6 例；在CEA 表达阴性65 例中，ABCC4 阳性表达占13 例，Spearman 法分析显示CEA 和ABCC4 在胃癌组织中表达无相关性，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 胃癌组织中CEA 与ABCC4 表达水平的相关性分析

3 讨论

ABCC4 在人类中定位于染色体13q32，长312kb，含有31 个外显子[3]，是ABC 家族中结构最简单的蛋白[4]，广泛分布于胰腺和肠等多种组织中[5-6]。结直肠癌、头颈鳞癌细胞中ABCC4 强表达[7-8]，提示ABCC4 与肿瘤的发生发展相关。佟柏峰等[9]通过ABCC4 基因RNAi 有效靶点慢病毒(ABCC4siRNA)感染SGC-7901 细胞的研究表明，ABCC4 基因能促进胃癌细胞增殖。本研究通过免疫组化法发现ABCC4 在胃癌组织中呈高表达，并且阳性率明显高于癌旁胃粘膜组织，说明了ABCC4 与胃癌的发生相关。

此外，该研究还发现，ABCC4 表达水平与胃癌组织分化程度相关。在高分化胃癌组织中ABCC4 表达的阳性率明显高于低分化胃癌，提示随着胃癌的恶性程度进展,ABCC4 阳性表达率下降。临床发现某些分化程度低、恶性程度高的癌症患者较分化程度高的患者对化疗敏感,结合Yasui 等[10]比较顺铂耐药肿瘤细胞KK47/cDDP1O 的ABCC4 拷贝数高于顺铂敏感肿瘤细胞的ABCC4 拷贝数，提示ABCC4 在癌组织中的阳性表达率增高可能是肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性的原因之一，有待进一步分组研究证实。

CEA 是癌细胞膜上的一种结构蛋白，通常在体内浓度极低，但来自内胚层组织恶变时，如胃癌、肝癌、肺癌等组织中浓度可升高[1，11]。该研究发现胃高分化腺癌的CEA 阳性表达率高低于低分化腺癌的阳性表达率，这提示胃癌分化程度越低,CEA 阳性表达率越高，与王海燕等[12]的报道相符。

目前对肿瘤发生机制的研究已从单一基因发展到多基因协同作用和互相调节的研究。该研究发现CEA 和ABCC4 表达水平与胃癌的分化程度有关，但用Spearman 法分析发现CEA 和ABCC4 在胃癌组织中的表达无相关性，这提示CEA 和ABCC4对胃癌细胞的调控可能没有协同作用，可能通过不同的调控机制起作用。如CEA 可诱导CEACAM1 介导的凋亡途径[13]，ABCC4可通过参与转运细胞cAMP 和cGMP 等内源性分子，调控细胞内的环核苷酸水平，调节细胞凋亡[14]。

综上所述，该研究通过免疫组化法观察ABCC4 和CEA 在胃癌组织中的表达水平，分析其与胃癌临床病理因素的关系,证明了ABCC4 和CEA 表达与胃癌的分化程度有关，但二者的调控没有协同作用，联合检测ABCC4 和CEA，可能有助于对胃癌分化程度做出准确的评价。

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