GRIM-19蛋白在乳腺癌组织中的表达

翟娜娜，黄器伟，陈奎生，刘军伟，李喜强

(1.黄河科技学院医学院，河南 郑州450063;2.郑州大学第一附属医院，河南 郑州450052)

干扰素/维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因19(gene associated with retinoid-interferon-induced mortality-19，GRIM-19)是GRIMs 家族重要成员之一，是一种由干扰素联合全反式维甲酸诱导表达的新的细胞凋亡调节基因［1］。GRIM-19 的正常表达可以维持细胞的正常生活周期，使细胞从衰老进入凋亡，低表达则使某些细胞不能正常地进入细胞生活周期而凋亡，进而引发肿瘤。本文采用免疫组化S-P 法检测GRIM-19 蛋白在乳腺癌组织中的表达，并探讨GRIM-19 蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2012年1月至2013年1月郑州大学第一附属医院乳腺外科手术切除乳腺癌标本50 例及其肿瘤边缘5 cm 以上的正常乳腺组织50 例。患者年龄在23 ～82 岁，其中＜50 岁23 例，≥50 岁27例;无淋巴结转移29 例，有淋巴结转移21 例;高分化11 例，中分化22 例，低分化17 例;TNM 分期:I、Ⅱ期30 例，Ⅲ、Ⅳ期共20 例。

1.2 试剂 鼠抗人GRIM-19 多克隆抗体、DAB 显色试剂盒、S-P 试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.3 检验方法 蛋白检测采用免疫组化S-P 法进行染色，按试剂盒说明书进行。用PBS 代替一抗作为阴性对照，用已知的乳腺癌阳性组织切片作为阳性对照。

1.4 结果判断 GRIM-19 蛋白在细胞质或细胞核着色。参考文献［2］的免疫组化结果判断标准:在显微镜高倍视野下，随机观察5 个视野，记录染色阳性的细胞在肿瘤细胞中的百分率:＞50%，3 分;＞25% ～50%，2 分;5% ～25%，1 分;＜5%，0 分。同时观察显色程度:棕褐色，3 分;棕黄色，2 分;浅黄色，l 分;无显色，0 分。2 项评分相乘，＞6 分为强阳性(+++)，4 ～6分为阳性(++)，2 ～3 分为弱阳性(+)，三者均记为阳性;两者乘积≤1 分为免疫组化反应阴性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0 进行统计学分析，率的比较用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 GRIM-19 蛋白在不同乳腺组织中的表达GRIM-19 蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为26.00%(13/50)，低于正常乳腺组织中的84. 00%(42/50)，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.2 GRIM-19 蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系 见表1。

表1 GRIM-19 蛋白的表达与乳腺癌临床病理特征的关系n(%)

3 讨论

GRIM-19 是通过反义基因敲除的方法发现的一种细胞凋亡调节因子，由干扰素联合维甲酸诱导表达。Huang 等［3］研究发现GRIM-19 主要定位于线粒体，可能在细胞核中微量表达。本课题发现GRIM-19 在细胞核和细胞浆中均有表达，但以细胞浆表达为主。在人体多种正常组织中都可以检测到GRIM-19 蛋白的表达，并且存在显著的组织差异性［1-4］。GRIM-19 是细胞凋亡通路上的一个环节，可能在细胞信号转导途径上发挥致凋亡效应，其正常表达能够维持细胞正常的生活周期，而突变或低表达则导致细胞的变异及恶化。Gong 等［5］研究发现，直肠癌组织中GRIM-19 蛋白低表达，并与结肠癌临床分期、分化程度相关，说明GRIM-19 与直肠癌的发生发展有关。在肺癌［6］、甲状腺癌［7］、前列腺癌［8］、宫颈癌［9］等肿瘤相关研究也得到相似结果。

本文结果显示，GRIM-19 蛋白在乳腺癌组织中的表达水平明显低于正常乳腺组织，低分化乳腺癌组织中GRIM-19 蛋白表达明显低于高分化组织，晚期乳腺癌患者明显低于早期患者。提示GRIM-19 表达降低可能与乳癌的发生发展及恶性程度有关，GRIM-19 蛋白的低表达或缺失是导致乳腺癌发生的重要原因。

［1］Angell JE，Lindner DJ，Shapiro PS，et al. Identification of GRIM-19，a novel cell death-regulatory gene induced by the interferon-beta and retinoic acid combination，using a genetic approach［J］. J Biol Chem，2000，275(43):33416 -33426.

［2］Wilentz RE，Su GH，Dai JL，et al.Immunohistochemical labeling for dpc4 mirrors genetic status in pancreatic adenocarcinomas :a new marker of DPC4 inactivation［J］. Am J Pathol，2000，156(1):37-43.

［3］Huang G，Lu H，Hao A，et al.GRIM-19，a cell death regulatory protein，is essential for assembly and function of mitochondrial complex I［J］.Mol Cell Biol，2004，24(19):8447 -8456.

［4］Chidambaram NV，Angell JE，Ling W，et al.Chromosomal localization of human GRIM-19，a novel IFN-beta and retinoic acid-activated regulator of cell death［J］.J Interferon Cytokine Res，2000，20(7):661 -665.

［5］Gong LB，Luo XL，Liu SY，et al. Correlations of GRIM-19 and its target gene product STAT3 to malignancy of human colorectal carcinoma［J］.Ai Zheng，2007，26(7):683 -687.

［6］周爱民，赵继京，叶静，等.GRIM-19 蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义［J］.癌症，2009，28(4):431 -435.

［7］Kimura ET，Nikiforova MN，Zhu Z，et al.High prevalence of BRAF mutations in thyroid cancer:genetic evidence for constitutive activation of the RET/PTC-RAS-BRAF signaling pathway in papillary thyroid carcinoma［J］.Cancer Res，2003，63(7):1454 -1457.

［8］Gao AC，Lou W，Ichikawa T，et al.Suppression of the tumorigenicity of prostatic cancer cells by gene(s)located on human chromosome 19p13.1-13.2［J］.Prostate，1999，38(1):46 -54.

［9］Zhou Y，Li M，Wei Y，et al. Down-regulation of GRIM-19 expression is associated with hyperactivation of STAT3-induced gene expression and tumor growth in human cervical cancers［J］. J Interferon Cytokine Res，2009，29(10):695 -703.