卷柏黄酮对小鼠中枢神经系统的影响*

孙曙光，李玉洁，李玲玲，袁培培，赫金丽，王小兰

河南中医学院 郑州450046

卷柏为多年生草本植物，为蕨类卷柏科卷柏属植物卷柏的全草，主要功效为活血通经。前期研究结果表明卷柏具有雌激素样作用［1-2］，还可降血糖［3-5］、降血脂［6-7］、预防骨质疏松［8-9］和抗辐射等。该课题组对卷柏的化学成分进行了全面系统的研究，从中分离并富集得到大量的黄酮类化合物，且对卷柏黄酮的富集工艺进行了研究［10］。该研究着重探讨了卷柏黄酮对小鼠中枢神经系统的影响，为进一步进行临床研究和安全用药提供资料，也可为长期毒性实验设计和开发新药提供参考。

1 材料与方法

1．1 实验动物、药物、仪器及主要试剂 140只昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购自河南省实验动物中心，实验期间在二级动物房喂养，环境温度为(25 ±1)℃。卷柏科卷柏属卷柏，加体积分数70%乙醇回流提取2次，回收乙醇，浓缩至1．05～1.10 kg/L，按比例取提取部位上聚酰胺柱，依次用水、体积分数50%乙醇、体积分数80%乙醇洗脱，所得的体积分数80%乙醇部位即为卷柏黄酮部位。80%乙醇部位回收乙醇，浓缩至密度达1．3～1．4，计算浸膏重量，加入已均匀混合干燥的辅料，充分混匀，淀粉浆制粒(18 目筛)，45℃干燥，整粒，加入滑石粉，混匀，压制成片，即得66．7 g/L 的卷柏黄酮片剂。ZZ-6 小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)，AB204-N 万分之一精密分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)

1．2 各组小鼠自发活动的变化 采用随机数字表法将40只小鼠分为空白对照组、卷柏黄酮低剂量(74 mg/kg)组、中剂量(148 mg/kg)组、高剂量(296 mg/kg)组4组，每组10只，各药物组单次灌胃给药后30 min 将小鼠投入自主活动记录仪中，适应5 min 后，观察5、15、30、60、90 min 内小鼠自主活动次数。对照组给予等体积的生理盐水灌胃。

1．3 各组小鼠协调运动的变化 采用随机数字表法将50只小鼠分为5组(分组同1．2，另以氯丙嗪给药为阳性对照组)，每组10只，单次灌胃给药后，取直径1．0 cm、长70 cm 的光滑金属棒一根，垂直竖立固定，并于给药后30、60、90 min 将小鼠置于棒顶端，头向下使其自然爬行，观察小鼠协调运动能力，每只小鼠观察3次，记录爬杆时间并进行评分。评分标准:3 s 内完成爬行全程得4 分;超过3 s 并向下滑得3 分;未完成全程爬杆得2 分;抓不住杆得1分;正反反射消失得0 分。

1．4 各组小鼠对阈下剂量戊巴比妥钠催眠持续时间的比较 采用随机数字表法将50只小鼠分为5组(分组同1．2，另以地西泮给药为阳性对照组)，每组10只，单次灌胃给药后30 min，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)，以翻正反射消失1 min为标准，记录睡眠持续时间。

1．5 统计学处理 采用SPSS 13．0 进行分析，应用重复测量数据的方差分析比较各组小鼠自主活动次数和爬杆评分，应用单因素方差分析和LSD-t 检验比较各组小鼠阈下剂量戊巴比妥钠催眠持续时间，检验水准α=0．05。

2 结果

2．1 卷柏黄酮对小鼠自主活动的影响 见表1。给药5 min 后，3个药物组小鼠的自主活动次数有所增加。

表1 卷柏黄酮对小鼠自主活动的影响(n=10)

2．2 卷柏黄酮对小鼠协调运动的影响 见表2。

表2 卷柏对小鼠协调运动影响(n=10)

2．3 卷柏黄酮对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠催眠作用的影响 见表3。卷柏黄酮对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠睡眠持续时间无明显影响。

表3 卷柏对小鼠阈下剂量戊巴比妥钠催眠作用的影响

3 讨论

动物的自主活动度反映其中枢神经系统的功能状态，兴奋时其自主活动增加，抑制时则减少。因此，记录动物自主活动次数是神经精神药物研究中经典的实验方法。该实验结果显示，高剂量卷柏黄酮组小鼠给药后自主活动次数低于其他组。该实验用爬杆实验作为测定动物协调运动的指标，结果显示，与空白对照组相比，中、低剂量卷柏黄酮对小鼠的协调运动能力无明显影响，而高剂量卷柏黄酮可明显降低小鼠的协调运动能力;阈下剂量戊巴比妥催眠作用的实验也显示，不同剂量卷柏黄酮对小鼠睡眠持续时间的影响也不明显。

有文献［11］显示，含有卷柏药材的复方药物有镇静作用，该实验结果也显示中、低剂量卷柏黄酮具有一定的镇静作用，但该作用还需一定的重复性实验及作用机制等实验进一步的验证。

［1］郑晓珂，李冬梅，蒋赟，等．卷柏中雌激素类成分的提取［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(12):1

［2］郑晓珂，吕鹏飞，王玲巧，等．卷柏等5种中药植物雌激素活性筛选的实验研究［J］．中国中药杂志，2006，31(15):1254

［3］郑晓珂，李玉洁，张莉，等．卷柏对2 型糖尿病大鼠模型葡萄糖代谢影响的实验研究［J］．现代预防医学，2009，36(10):1918

［4］Zheng XK，Li YJ，Zhang L，et al．Antihyperglycemic activity of Selaginella tamariscina(Beauv．)Spring［J］．J Ethnopharmacol，2011，133(2):531

［5］Zheng XK，Zhang L，Wang WW，et al．Anti-diabetic activity and potential mechanism of total flavonoids of Selaginella tamariscina(Beauv．)Spring in rats induced by high fat diet and low dose STZ［J］．J Ethnopharmacol，2011，137(1):662

［6］郑晓珂，张鑫，王小兰，等．卷柏提取物改善高脂血症大鼠肝脏脂肪变及肝脏保护作用的实验研究［J］．中国新药杂志，2010，19(14):1216

［7］郑晓珂，宁桃丽，王小兰，等．卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF 蛋白表达的影响［J］．中国药学杂志，2011，46(13):998

［8］郑晓珂，陈克宇，侯庆伟，等．卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢的影响［J］．中草药，2010，41(10):1686

［9］王小兰，郑晓珂，魏悦，等．卷柏提取物对去势大鼠股骨中羟脯氨酸含量的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(10):132

［10］郑晓珂，侯庆伟，李民，等．卷柏总黄酮提取工艺的研究［J］．中国新药杂志，2011，20(16):1509

［11］陈美琳，李严．高贵波．卷柏复方的中枢抑制作用［J］．中成药研究，1987(11):45