金银花组织培养与快速繁殖研究

刘敏杰

摘 要：为了研究金银花的离体快繁技术，采用不同培养基配方对金银花的芽尖进行诱导、增殖并生根处理。结果表明：丛生芽诱导以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基为宜；增殖培养以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培养基为宜，可获得理想的效果，增殖倍数可达3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培养基上，可形成较发达的根系；试管苗移栽对基质要求不严，移栽到疏松透气的蛭石+珍珠+园土（1∶1∶1）混合基质中，成活率高达92%。

关键词：金银花；组织培养；快速繁殖；培养基配方

中图分类号 R282.2 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）21-21-02

金银花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬属的多年生半常绿藤本植物，是一种珍贵的观赏植物，也是我国特有的名贵中药材，具有清热、解毒、抗菌、增强免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播种繁殖是金银花的常用繁殖方式，然而这2种繁殖方式都易造成金银花植株携带病毒、细菌等，使植株生长不良，生产性能下降，植株及产品品质下降。通过组织培养的方式繁育金银花种苗，可使金银花植株脱毒，且繁殖速度快、繁殖系数高，从而提高金银花的产量和质量[2]。

1 材料与方法

1.1 实验材料 信阳当地野生金银花，采自河南信阳前进乡三桥村。

1.2 实验方法

1.2.1 外植体灭菌 取顶芽作为外植体，冲洗2～3遍，在低浓度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用软刷刷洗，流水冲洗干净。将外植体置于超净工作台中，用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，无菌水冲洗4～5次，然后用消毒滤纸吸干表面水分，备用[3]。

1.2.2 诱导培养 金银花诱导培养选用MS作为基础培养基，并加入不同种类和配比的植物生长物质。将经过消毒灭菌处理的外植体，分别接种于不同培养基中，每种处理接30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，筛选出芽萌动率高的培养基。

1.2.3 增殖培养 增殖培养以MS培养基加不同种类的细胞分裂素，将丛生芽分别接种于继代培养基中进行金银花的增殖培养。每种处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，观察不定芽的分化情况，选出分化率较高的激素配比。

1.2.4 生根培养 待丛生芽长至2cm高时，转接到1/2MS及1/2MS加不同浓度IBA的生根培养基上，并各加0.15%的活性炭。每种处理接种30个幼苗，重复3次，观察不定根的形成过程，选出最佳生根培养基。

1.2.5 培养条件 MS培养基中蔗糖浓度为30g·L-1，1/2MS培养基中的蔗糖浓度为20g·L-1，琼脂浓度均为7g·L-1，pH值为6.0。接种材料置于培养箱中，设定温度为24～26℃，光照强度为1 500～2 000lx，光照时间为12～14h/d。

1.3 驯化移栽 把生根好的试管苗拿到室温下，不打开瓶盖炼苗1～2d后，再打开瓶盖炼苗3～5d。然后取出试管苗，洗净根部粘附的培养基，栽植于配比为蛭石∶珍珠岩∶园土为1∶1∶1的基质中，浇透水，盖上塑料薄膜，并注意保温、保湿。当金银花试管苗长出新叶时，炼苗移栽就真正成功了，观察并统计成活率。

2 结果与分析

2.3 不同培养基对试管苗生根的影响 从表3可以看出，芽苗在5种不同的生根培养基上均能生根，根的数量和长度随IBA浓度的提高而增加；当IBA浓度为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。因此，适宜金银花生根的最佳培养基为1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗驯化移栽结果 试验结果表明，金银花试管苗在栽培基质上，移栽成活率高，幼苗生长健壮，叶色嫩绿，成活率高达92%。

3 结论与讨论

植物生长物质的种类，以及细胞分裂素与生长素的比例，对植物组织分化出苗或快速增殖影响十分显著。6-BA主要作用于芽的分化、促进侧芽萌发生长[4]。NAA具有较低浓度下促进细胞生长，高浓度下促进细胞成熟衰老的作用。IBA是试管苗生根中最常用的生根剂之一[5]，其浓度过低，不能很好地促进组培苗生根，浓度过高，则会诱导出大量的愈伤组织，从而降低生根率[6]。本次实验结果表明，6-BA浓度过高也会抑制腋芽的形成，一定浓度的NAA有利于促进腋芽生长，只有生长素和细胞分裂素同时存在时才能很好地诱导丛生芽。IBA为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。

参考文献

[1]石任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龚福宝.金银花快繁的研究现状[J].河北林业科技，2009，4.

[3]赵贤慧，刘庆华，张德锋.红金银花组织培养外植体灭菌的研究[J].江苏林业科技，2007，34（1）.

[4]李明军.怀山药组织培养及应用[M].北京：科学出版社，2004，20.

[5]李明军，陈明霞，洪森荣，等.NAA、IBA和PP333对怀山药试管苗生长发育的影响 [J].广西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陈明霞，张晓丽，龚玉佳，等.“金峰一号”金银花组织培养技术研究[J].北方园艺，2010（23）：126-129. （责编：张宏民）endprint

摘 要：为了研究金银花的离体快繁技术，采用不同培养基配方对金银花的芽尖进行诱导、增殖并生根处理。结果表明：丛生芽诱导以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基为宜；增殖培养以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培养基为宜，可获得理想的效果，增殖倍数可达3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培养基上，可形成较发达的根系；试管苗移栽对基质要求不严，移栽到疏松透气的蛭石+珍珠+园土（1∶1∶1）混合基质中，成活率高达92%。

关键词：金银花；组织培养；快速繁殖；培养基配方

中图分类号 R282.2 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）21-21-02

金银花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬属的多年生半常绿藤本植物，是一种珍贵的观赏植物，也是我国特有的名贵中药材，具有清热、解毒、抗菌、增强免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播种繁殖是金银花的常用繁殖方式，然而这2种繁殖方式都易造成金银花植株携带病毒、细菌等，使植株生长不良，生产性能下降，植株及产品品质下降。通过组织培养的方式繁育金银花种苗，可使金银花植株脱毒，且繁殖速度快、繁殖系数高，从而提高金银花的产量和质量[2]。

1 材料与方法

1.1 实验材料 信阳当地野生金银花，采自河南信阳前进乡三桥村。

1.2 实验方法

1.2.1 外植体灭菌 取顶芽作为外植体，冲洗2～3遍，在低浓度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用软刷刷洗，流水冲洗干净。将外植体置于超净工作台中，用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，无菌水冲洗4～5次，然后用消毒滤纸吸干表面水分，备用[3]。

1.2.2 诱导培养 金银花诱导培养选用MS作为基础培养基，并加入不同种类和配比的植物生长物质。将经过消毒灭菌处理的外植体，分别接种于不同培养基中，每种处理接30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，筛选出芽萌动率高的培养基。

1.2.3 增殖培养 增殖培养以MS培养基加不同种类的细胞分裂素，将丛生芽分别接种于继代培养基中进行金银花的增殖培养。每种处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，观察不定芽的分化情况，选出分化率较高的激素配比。

1.2.4 生根培养 待丛生芽长至2cm高时，转接到1/2MS及1/2MS加不同浓度IBA的生根培养基上，并各加0.15%的活性炭。每种处理接种30个幼苗，重复3次，观察不定根的形成过程，选出最佳生根培养基。

1.2.5 培养条件 MS培养基中蔗糖浓度为30g·L-1，1/2MS培养基中的蔗糖浓度为20g·L-1，琼脂浓度均为7g·L-1，pH值为6.0。接种材料置于培养箱中，设定温度为24～26℃，光照强度为1 500～2 000lx，光照时间为12～14h/d。

1.3 驯化移栽 把生根好的试管苗拿到室温下，不打开瓶盖炼苗1～2d后，再打开瓶盖炼苗3～5d。然后取出试管苗，洗净根部粘附的培养基，栽植于配比为蛭石∶珍珠岩∶园土为1∶1∶1的基质中，浇透水，盖上塑料薄膜，并注意保温、保湿。当金银花试管苗长出新叶时，炼苗移栽就真正成功了，观察并统计成活率。

2 结果与分析

2.3 不同培养基对试管苗生根的影响 从表3可以看出，芽苗在5种不同的生根培养基上均能生根，根的数量和长度随IBA浓度的提高而增加；当IBA浓度为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。因此，适宜金银花生根的最佳培养基为1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗驯化移栽结果 试验结果表明，金银花试管苗在栽培基质上，移栽成活率高，幼苗生长健壮，叶色嫩绿，成活率高达92%。

3 结论与讨论

植物生长物质的种类，以及细胞分裂素与生长素的比例，对植物组织分化出苗或快速增殖影响十分显著。6-BA主要作用于芽的分化、促进侧芽萌发生长[4]。NAA具有较低浓度下促进细胞生长，高浓度下促进细胞成熟衰老的作用。IBA是试管苗生根中最常用的生根剂之一[5]，其浓度过低，不能很好地促进组培苗生根，浓度过高，则会诱导出大量的愈伤组织，从而降低生根率[6]。本次实验结果表明，6-BA浓度过高也会抑制腋芽的形成，一定浓度的NAA有利于促进腋芽生长，只有生长素和细胞分裂素同时存在时才能很好地诱导丛生芽。IBA为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。

参考文献

[1]石任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龚福宝.金银花快繁的研究现状[J].河北林业科技，2009，4.

[3]赵贤慧，刘庆华，张德锋.红金银花组织培养外植体灭菌的研究[J].江苏林业科技，2007，34（1）.

[4]李明军.怀山药组织培养及应用[M].北京：科学出版社，2004，20.

[5]李明军，陈明霞，洪森荣，等.NAA、IBA和PP333对怀山药试管苗生长发育的影响 [J].广西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陈明霞，张晓丽，龚玉佳，等.“金峰一号”金银花组织培养技术研究[J].北方园艺，2010（23）：126-129. （责编：张宏民）endprint

摘 要：为了研究金银花的离体快繁技术，采用不同培养基配方对金银花的芽尖进行诱导、增殖并生根处理。结果表明：丛生芽诱导以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基为宜；增殖培养以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培养基为宜，可获得理想的效果，增殖倍数可达3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培养基上，可形成较发达的根系；试管苗移栽对基质要求不严，移栽到疏松透气的蛭石+珍珠+园土（1∶1∶1）混合基质中，成活率高达92%。

关键词：金银花；组织培养；快速繁殖；培养基配方

中图分类号 R282.2 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）21-21-02

金银花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬属的多年生半常绿藤本植物，是一种珍贵的观赏植物，也是我国特有的名贵中药材，具有清热、解毒、抗菌、增强免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播种繁殖是金银花的常用繁殖方式，然而这2种繁殖方式都易造成金银花植株携带病毒、细菌等，使植株生长不良，生产性能下降，植株及产品品质下降。通过组织培养的方式繁育金银花种苗，可使金银花植株脱毒，且繁殖速度快、繁殖系数高，从而提高金银花的产量和质量[2]。

1 材料与方法

1.1 实验材料 信阳当地野生金银花，采自河南信阳前进乡三桥村。

1.2 实验方法

1.2.1 外植体灭菌 取顶芽作为外植体，冲洗2～3遍，在低浓度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用软刷刷洗，流水冲洗干净。将外植体置于超净工作台中，用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，无菌水冲洗4～5次，然后用消毒滤纸吸干表面水分，备用[3]。

1.2.2 诱导培养 金银花诱导培养选用MS作为基础培养基，并加入不同种类和配比的植物生长物质。将经过消毒灭菌处理的外植体，分别接种于不同培养基中，每种处理接30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，筛选出芽萌动率高的培养基。

1.2.3 增殖培养 增殖培养以MS培养基加不同种类的细胞分裂素，将丛生芽分别接种于继代培养基中进行金银花的增殖培养。每种处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体，重复3次，观察不定芽的分化情况，选出分化率较高的激素配比。

1.2.4 生根培养 待丛生芽长至2cm高时，转接到1/2MS及1/2MS加不同浓度IBA的生根培养基上，并各加0.15%的活性炭。每种处理接种30个幼苗，重复3次，观察不定根的形成过程，选出最佳生根培养基。

1.2.5 培养条件 MS培养基中蔗糖浓度为30g·L-1，1/2MS培养基中的蔗糖浓度为20g·L-1，琼脂浓度均为7g·L-1，pH值为6.0。接种材料置于培养箱中，设定温度为24～26℃，光照强度为1 500～2 000lx，光照时间为12～14h/d。

1.3 驯化移栽 把生根好的试管苗拿到室温下，不打开瓶盖炼苗1～2d后，再打开瓶盖炼苗3～5d。然后取出试管苗，洗净根部粘附的培养基，栽植于配比为蛭石∶珍珠岩∶园土为1∶1∶1的基质中，浇透水，盖上塑料薄膜，并注意保温、保湿。当金银花试管苗长出新叶时，炼苗移栽就真正成功了，观察并统计成活率。

2 结果与分析

2.3 不同培养基对试管苗生根的影响 从表3可以看出，芽苗在5种不同的生根培养基上均能生根，根的数量和长度随IBA浓度的提高而增加；当IBA浓度为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。因此，适宜金银花生根的最佳培养基为1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗驯化移栽结果 试验结果表明，金银花试管苗在栽培基质上，移栽成活率高，幼苗生长健壮，叶色嫩绿，成活率高达92%。

3 结论与讨论

植物生长物质的种类，以及细胞分裂素与生长素的比例，对植物组织分化出苗或快速增殖影响十分显著。6-BA主要作用于芽的分化、促进侧芽萌发生长[4]。NAA具有较低浓度下促进细胞生长，高浓度下促进细胞成熟衰老的作用。IBA是试管苗生根中最常用的生根剂之一[5]，其浓度过低，不能很好地促进组培苗生根，浓度过高，则会诱导出大量的愈伤组织，从而降低生根率[6]。本次实验结果表明，6-BA浓度过高也会抑制腋芽的形成，一定浓度的NAA有利于促进腋芽生长，只有生长素和细胞分裂素同时存在时才能很好地诱导丛生芽。IBA为3.0mg·L-1时，植株生长健壮，叶色浓绿。

参考文献

[1]石任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龚福宝.金银花快繁的研究现状[J].河北林业科技，2009，4.

[3]赵贤慧，刘庆华，张德锋.红金银花组织培养外植体灭菌的研究[J].江苏林业科技，2007，34（1）.

[4]李明军.怀山药组织培养及应用[M].北京：科学出版社，2004，20.

[5]李明军，陈明霞，洪森荣，等.NAA、IBA和PP333对怀山药试管苗生长发育的影响 [J].广西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陈明霞，张晓丽，龚玉佳，等.“金峰一号”金银花组织培养技术研究[J].北方园艺，2010（23）：126-129. （责编：张宏民）endprint