磷酸替米考星可溶性粉对人工感染鸡毒支原体的疗效试验

范建华，何友义，韦玉勇，徐 步*，卜仕金

(1.中国农业科学院家禽所，江苏扬州225125;2.江苏威泰龙生物科技有限公司，江苏泰州225000;3.扬州大学，江苏扬州225009)

替米考星是一种半合成大环内酯类畜禽专用抗生素，常用于预防和治疗鸡毒支原体感染引起的支气管炎、气囊炎等［1］，是治疗鸡毒支原体感染等鸡慢性呼吸道疾病的最有效药物之一，至今尚未见有耐药菌株的报道［2］。磷酸替米考星是替米考星磷酸盐，易溶于水。为进一步验证磷酸替米考星对鸡毒支原体感染的防治效果，特进行如下试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品 受试药:磷酸替米考星可溶性粉:规格10%(以替米考星计)，由湖北某兽药厂提供。对照药:替米考星可溶性粉，含量10%，由天津某兽药厂生产。适应症为鸡支原体等慢性呼吸道疾病治疗，推荐用法与用量为:混饮，每1 L饮水加本品0.75 g(以替米考星计)，连用3 d。

1.1.2 鸡毒支原体菌种和抗原 鸡毒支原体(MGS6)及MG培养基均由江苏省农业科学院兽医研究所馈赠;鸡毒支原体血清平板凝集抗原由中国农业科学院家禽所生物安全研究室提供。

1.1.3 主要试剂及培养基 水解蛋白为美国Difco公司产品;酵母浸出物为英国OXOID公司产品;氨水25%(AR级)，上海生工生物制剂有限公司生产。

1.1.4 试验动物 200只1日龄苏禽黄羽肉鸡和小鸡粉料均购自扬州翔龙禽业发展有限公司，其中饲料为不加任何抗菌药的小鸡全价料。该鸡群试验前血清学检测鸡毒支原体结果为阴性。受试鸡采用网上饲养，自由采食和饮水，每天清理鸡粪，鸡舍自然通风。

1.2 方法

1.2.1 鸡毒支原体S6株菌液的制备 将冷冻保存的MGS6菌液解冻后取1mL接种于5 mL FM-4液体培养基中，37℃培养3～4 d至颜色变黄，随后置于-20℃冷冻保存。攻毒前先行在实验室通过非免疫鸡接种复壮。菌种复壮经传代后测定菌液的颜色变化单位(ccu/mL)。

1.2.2 分组与给药 苏禽黄羽肉雏鸡饲喂至14日龄后，从中挑选180只体重均匀、健康鸡作为试验对象，随机分成6组，每组30只，单羽称量初始重，具体分组情况见表1。

表1 试验鸡分组处理

1.2.3 人工疾病模型的复制 鸡毒支原体人工发病模型参照邵国青等［3］报道的方法。试验鸡于14日龄时各治疗组及感染对照组每只鸡经左右气囊注射接种鸡毒支原体液体培养物(108～109ccu/mL)，剂量为0.2 mL/100 g体重。健康对照组注射无菌生理盐水。接种后的试验鸡于80 mg/L氨环境进行应激。

1.2.4 药物治疗 各治疗组鸡在接种支原体第5 d后(即个别鸡出现呼吸症状时)，受试药各剂量组和药物对照组分别按表1处理方法通过饮水给予相应的药物治疗，连用3 d。健康及感染对照组不给药，自由饮水。各组试验期间均自由采食。

1.3 疗效评价指标［4-5］

1.3.1 临床观察 用药期间每天观察各组鸡的临床症状，记录死亡情况。对病死鸡进行剖检并作病原学分离、确诊。停药后继续观察14 d。

实验结束时对各实验组鸡单羽称末重、记录每组饲料消耗量，并据此分别计算各组鸡平均增重。分别根据下面公式计算相对增重率和饲料利用率。

相对增重率＝(试验组相对增重/健康对照组相对增重)×100%

饲料利用率(料肉比)＝平均饲料消耗总量(g)/平均增重(g)

1.3.2 死亡率 凡在试验期间，鸡出现典型支原体感染症状并死亡的，并通过剖检气囊、肺等脏器发现有典型病变，且鸡毒支原体分离阳性者，判定为鸡毒支原体感染死亡。根据死亡鸡数计算死亡率。

1.3.3 气囊病变损伤计分 试验结束后各组随机抽10只鸡进行剖检，观察气囊、肺、肝、心等主要脏器器官变化，并对气囊损伤程度进行分级评分［1，3］。0级:气囊膜清洁、薄而透明，记0分;1级:气囊膜轻度浑浊，记2分;2级:气囊部分区域有灰白色渗出物，气囊膜中度增厚，记4分;3级:大部分气囊布满黄白色干酪样渗出物，记6分;4级:严重的气囊炎，整个气囊布满黄白色干酪样渗出物，气囊增厚，记8分。并根据气囊损伤记分结果计算气囊损伤减少百分率。

1.4 试验数据统计分析 用生物统计学方法进行数据的显著性检验，其中死亡率、气囊损伤减少率用卡方检验，增重采用t检验。

2 结果与分析

2.1 人工疾病模型 人工接种毒后第5天时，除健康对照组外，各组别均有少数鸡出现精神不振，食欲减退;给药后第2天，各用药组症状均不同程度有所缓解，但在感染对照组中鸡的呼吸道症状在加剧，少数鸡出现持续性啰音，呼吸困难。感染对照组至种毒后第7天时2只鸡死亡，剖检发现呼吸道有较多粘液分泌、气囊膜增厚、浑浊，内有大量黄白色干酪样渗出物;肺部有出血点，且伴有较严重的心包炎、心包腔积液等病理变化。在对病死鸡气囊分泌物病原学检测时，可分离出支原体，其生物学特性与MGS6菌株吻合［4］，另外肝脏、肺组织中还分离出了大肠杆菌。这表明鸡死亡原因可能因支原体感染加重后导致抵抗力下降进而并发大肠杆菌感染所致。以上结果充分说明此次人工造病成功。

2.2 药物治疗效果 本次试验选择死亡率、气囊病变计分，以及相对增重率等作为主要试验监测指标。从表2结果来看，所有药物试验组和药品对照组在试验期内，均未出现死亡，但各试验组前期却表现出不同程度的呼吸道症状，而感染对照组在试验第7天，死亡2只，经实验室进一步病原分离鉴定得出，属支原体感染后期继发感染大肠杆菌引起的死亡。表2结果同时显示，试验期内尽管受试药各剂量组和药品对照组的鸡均增重及料肉比情况均好于感染组，但相对增重率统计结果差异不显著(P＞0.05)。气囊病变、损伤是支原体感染的典型表观。本次试验经抽选各组10只鸡剖检，感染对照组多数鸡除气囊明显出现浑浊和干酪样渗出外，还伴有严重的“包心”和“包肝”，与受试各药物组比较，气囊损伤减少率差异显著(P＜0.05)，具体试验结果见表3。

表2 药物治疗后对鸡体增重影响

表3 药物治疗后对气囊损伤的影响

3 讨论与小结

单纯感染MG的鸡，一般仅出现轻微的呼吸道症状或隐性感染［2，7］。本次试验经经气囊种毒，成功建立了人工感染鸡毒支原体的造病模型，为进一步开展受试药物的疗效试验奠定了良好基础。受试药高(1 g/L)、中(0.75 g/L)剂量组和药品对照组均能有效控制鸡毒支原体引起的鸡呼吸道感染，减轻气囊损伤，同时可减轻因感染鸡毒支原体引起的增重下降，这与国内宗昕如［8］、高迎春［6］等的报道基本一致。因此，推荐磷酸替米考星可溶性粉用于治疗支原体感染引起的鸡慢性呼吸道疾病的最佳治疗方法为:剂量0.75 g/L，连续饮水给药3 d。

［1］Frey M L，Hanson R P＆Anderson D P.A medium for the isolation of avian mycoplasmas［J］.Am Vet Res，1968，29:2163-2171.

［2］Lam K M.Resistance of chickens immunized against M.gallisepticum is mediated by bursal dependent lymphoid cells［J］.Vet Microbiology，1984，9:509-514.

［3］邵国青，许伟成，薛家宾，等.鸡毒支原体人工发病封闭模型的建立［J］.江苏农业学报，1998，14(4):228-231.

［4］中华人民共和国农业部公告第1247号.抗菌药物Ⅱ、Ⅲ期临床药效评价试验指导原则［Z］.

［5］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理学实验方法学［M］.第三版.人民卫生出版社:1647-1651.

［6］高迎春，张传津，陆庆泉，等.替米考星溶液对肉仔鸡人工感染鸡败血霉形体所致慢性呼吸道病的疗效试验［J］.家禽科学，2004，20(5):10-13.

［7］刘轶秋，赵 晖，徐 磊，等.替米考星及其他抗菌药对鸡毒支原体的体外联合抑菌试验［J］.中国家禽，2012，24(20):30-32

［8］宗昕如，张晓辉，辛凌翔，等.磷酸替米考星可溶性粉对人工感染鸡支原体的治疗试验［J］.畜牧与兽医，2013，12(8):23-24.