免疫学参数HLA 与腹腔子宫内膜异位症病因学关系

胡玉红，徐 建

（佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003）

子宫内膜异位症的发病机制尚不清楚，在过去的十年间，子宫内膜异位症发生发展的研究中，宿主的免疫应答因素得到了越来越多的关注。腹水中的免疫细胞大多是单核细胞，以巨噬细胞为主，还有其他免疫细胞如淋巴细胞，NK细胞等。所有这些细胞应该具有正常的免疫活性，然而，当腹腔内尤其是巨噬细胞和NK 细胞的免疫系统损害了，导致子宫内膜的上皮细胞和基质细胞清除不彻底，这可能是子宫内膜异位症发生的主要病理机制。在关于腹水中单核细胞的研究中，许多学者已经证实，单核细胞系的炎性因子在子宫内膜异位症患者中过渡表达。而且，随后的研究发现这些患者体内存在着很大程度的HLA 分子表达的减弱。HLA的功能为抗原递呈，由此提示我们可以通过对腹水中单核细胞的数量或者活性来对免疫应答系统进行功能检测。因此，免疫活性细胞的免疫应答功能的紊乱是子宫内膜异位症的病因机制这一观点得到了越来越多学者的关注。在本实验中我们通过对子宫内膜异位症患者及患有其他妇科疾病的女性PF巨噬细胞的表型和免疫活性的比较来研究子宫内膜异位症在免疫学中的易感性。

1 材料和方法

1.1 实验对象

实验组为患有子宫内膜异位症的患者，对照组为患有其他妇科疾病的患者并在术中排除子宫内膜异位症。实验对象均排除妊娠及GnRH 兴奋治疗的患者。

1.2 实验材料器械

PF于术中取自患者的腹腔液保存在肝素钠真空采血管内（武汉博士德生物公司）中。单克隆抗体（北京博奥森生物公司），FITC-标记的抗-CD14 单抗用于标记单核细胞。PE-标记的抗HLA-ABC和-DR 单抗用于评价抗原递呈。流式细胞仪用于分析实验。

1.3 实验方法

1.3.1 实验对象分组与处理：分为由子宫内膜异位症患者组成的实验组及非子宫内膜异位症患者组成的对照组两组，均来自佳木斯大学附属第一医院妇产科。实验组有30例患有子宫内膜异位症的女性（其中包括8例Ⅰ期，12例Ⅱ期，7例Ⅲ期，3例Ⅳ期患者（根据美国生殖医学会内异症评分方法）与对照组33例患有其他妇科疾病的女性（其中包括15例子宫肌瘤患者，11例卵巢囊肿患者，7例宫外孕患者）并且在术中排除子宫内膜异位症。实验组患者平均年龄为39岁，对照组的平均年龄为38岁，无明显差异。实验对象均排除妊娠，近12个月内接受过GnRH 兴奋实验的可能和能引起腹腔炎症可能的慢性病。PF 均取于术中行使手术前，约5mL。

1.3.2 PFMC的制取：制备腹水单个核细胞（PFMC），首先将PF样本约2mL放入离心机中，行2000r15min后弃上清。然后以5∶1 比例加入ACK 进行红细胞裂解。10min后再次离心2000r15min后弃上清，用PBS漂洗两次。

1.3.3 单克隆抗体反映标记：每种单抗5μL 分别加入200μL PFMC中在室温下反映1h。单抗反映后每组样本放入离心机离心后加入0.5mL PBS混匀后即检测分析。

1.4 流式细胞仪检测

首先用散射光法设门，用FSC（正向散射光）和SSC（侧向散射光）联合设门。检测出通过此区域的细胞所发生的荧光强度则及此区域的细胞数量。所以可以检测出携带着HLA-ABC和-DR 阳性染色的巨噬细胞和CD14阳性的巨噬细胞量，并且计算出存在的百分比。

1.5 统计学方法

采用SPSS用Student’s t-test检验来比较实验组和对照组患者体内HLA-ABC和-DR 的表达，P＜0.05为差异具有统计学意义。总体均数比较采用单因素方差分析。利用SPSS采用logistic回归来检验免疫学参数和子宫内膜异位症发生的关系。

2 结果

2.1 免疫参数结果与分析

PF巨噬细胞CD14 为阳性，其中HLA-ABC和-DR的表达在子宫内膜异位症患者和对照组患者有很大的不同。子宫内膜异位症患者体内HLA-ABC和-DR 的FI明显低于对照组的。

2.2 HLA-ABC表达的结果分析

经过流式细胞仪分析，CD14阳性的PF 巨噬细胞中表达HLA-ABC的百分比是：子宫内膜异位症实验和对照组中分别为（98.7±1.0），（97.1±5.7），无统计学意义（P＞0.05）。HLA-ABC的FI在实验组和对照组中的数据分别为（21.3±1.7），（12.9±1.5）。有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 HLA-DR

经流式细胞仪分析，表达HLA-DR 的在CD14阳性的PF巨噬细胞中的百分比在实验组和对照组中分别是（88.3±6.5），（75.2±5.0），有统计学意义（P＜0.05）。HLAABC的FI在实验组和对照组中的数据分别为（2.9±0.5），（2.3±0.5）。有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组免疫参数经流式细胞仪分析结果（±s）

表1 两组免疫参数经流式细胞仪分析结果（±s）

HLA 表达的结果分析：通过Student’s t-test计算得出在两组数据中，巨噬细胞表达HLA-ABC 的百分比P＞0.05，无统计学意义。而两组PF 巨噬细胞HLAABC 的FI，有统计学意义（P＜0.05）。两组中巨噬细胞表达HLA-DR 的百分比，有统计学意义（P＜0.05）。两组HLA-DR 的FI，有统计学意义（P＜0.05）。logistic回归证明这些免疫学参数是子宫内膜异位症的危险因素。

3 讨论

关于巨噬细胞的宿主免疫应答与子宫内膜异位症关系的研究得到了越来越多的关注。对于PF中的巨噬细胞的功能活性的研究，我们通过对HLA 的表达的检测来估测抗原递呈系统的功能。在免疫监测系统中，存在于腹腔空洞内的巨噬细胞会在外来抗原入侵时，在做出最初的免疫应答过程中起到调节作用。在此过程中，HLA和协同刺激因子共同作用于以T 细胞的趋化作用为主要功能的免疫应答的抗原的递呈过程。近期的研究表明，因为巨噬细胞膜镶嵌有脂筏，脂筏是一种可以识别两种细胞膜的结构。当巨噬细胞递呈抗原与T 细胞时，协同刺激因子做为一种黏附因子，集聚在脂筏上或附近并且与T 细胞上的配合基结合。由此，巨噬细胞膜上的脂筏与T 细胞膜的间隙变小，HLA 位于脂筏的中心，其可更快的将抗原信息递呈给T 细胞。子宫内膜异位症患者PF巨噬细胞中HLA-ABC和-Dr细胞的FI降低以及HLA-Dr阳性细胞在巨噬细胞中的百分比的降低，说明子宫内膜异位症患者体内抗原递呈能力不足和对外源组织（如内膜组织）免疫应答功能减弱使得内膜组织在腹腔内残留。子宫内膜异位症患者PF中巨噬细胞表达HLA 的减少的原因并不清楚。可能是因为内异症患者体内的PB（外周血）中的巨噬细胞在变成PF 中的巨噬细胞前HLA 就已经减弱；或者可能因为是腹腔内的内膜组织上的免疫抑制因子（如转化生长因子）减弱了PF 巨噬细胞上HLA 的表达。通过logistic回归证明了免疫学参数中HLA-ABC和-DR表达的降低与子宫内膜异位症的发生有关系。

经血逆流学说及上皮化生学说均为子宫内膜异位症重要病理机制，无论那种学说是正确的，免疫损害，尤其是巨噬细胞免疫功能的损害可以更准确的说明子宫内膜异位症的发生原因。PF巨噬细胞中HLA 这种免疫学参数的紊乱可以为子宫内膜异位症的种植或上皮化生这些学说做出免疫学解释。同样对子宫内膜异位症的发生发展有重要意义。

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