芦荟-丹参复方凝胶对痤疮主要致病菌的体外抑菌研究

李晓梅 秦桂美

痤疮是一种皮脂腺的慢性皮肤疾病，痤疮的主要致病菌是痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌，目前抗痤疮药物活性评价主要考察对这两种菌的抑菌作用[1]，丹参酮对痤疮的治疗已有系统评价[2]，芦荟在抗炎、消菌、美容方面的药理作用已有报道[3]。治疗痤疮的常规剂型有软膏剂、霜剂、洗剂、擦剂等，但临床应用有多种不足，而外用凝胶剂为透明半固体，质地均匀细腻，展开后容易涂布，涂布在皮肤上能形成透明的薄膜，附着性强，释药快，滞留时间长，无气闷，油腻感，易洗除，不污染衣物，对皮肤和黏膜无刺激性，适合痤疮治疗，以此为依据，与芦荟提取物芦荟多糖配制成复方凝胶，并系统考察其体外抑菌活性，拟为痤疮的治疗提供一种新的方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 凝胶制备材料 中药材芦荟为市售品；丹参酮（含量65%），上海源叶生物科技有限公司生产；甲硝唑注射液，山东长富洁晶药业有限公司生产，批号09092571；阿莫西林分散片，中诺药业有限公司生产，批号09117005；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 供试菌株 痤疮丙酸杆菌，Propionibacterium acnes，G+，购于广东微生物所；金黄色葡萄球菌，Staphyloccus aureus，G+，由山东大学（威海）海洋学院微生物实验室提供。

1.1.3 培养基 液体硫乙醇酸盐培养基用于痤疮丙酸杆菌的培养，营养琼脂、营养肉汤用于金黄色葡萄球菌的培养。

1.2 试验方法

1.2.1 芦荟多糖提取、精制及含量测定 采用水提醇沉法提取芦荟多糖，得到芦荟多糖粗品，透析法精制芦荟多糖，绘制标准曲线进行含量测定[4]。

1.2.2 菌悬液的制备 将金黄色葡萄球菌分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于37 ℃恒温培养箱中培养，将痤疮丙酸杆菌接种于硫乙醇酸盐液体培养基中，置于37 ℃厌氧培养罐中培养。一般接种量为每毫升药液含103～105个细菌。18～24 h后取出，利用平板培养计数法将各菌液的浓度稀释至107～108CFU/mL备用[5]。

1.2.3 供试药的制备

1.2.3.1 凝胶基质制备 按照卡波姆含量0.6%，甘油含量15%，丙二醇含量3%的比例配制卡波姆凝胶500 g 备用[6]。

1.2.3.2 供试凝胶制备 芦荟多糖600 mg，丹参酮600 mg，加入凝胶基质混匀制成复方方一20 g；芦荟多糖800 mg，丹参酮400 mg，加入凝胶基质混匀制成复方方二20 g；芦荟多糖提取物400 mg，丹参酮800 mg，加入凝胶基质混匀制成复方方三20 g；芦荟多糖1200 mg，加入凝胶基质混匀制成单方方一20 g；丹参酮1200 mg，加入凝胶基质混匀制成单方方二20 g。

1.2.4 抑菌圈试验 用丙二醇稀释供试凝胶至其饱和浓度，设置3个用量梯度（4、6、8 μL），放入直径6 mm的滤纸片浸泡2 h取出自然风干，贴于涂布菌液的平板表面。丙二醇做阴性对照，阿莫西林、甲硝唑作阳性对照，未涂布菌液的平板作空白对照。每组设平行样三个，结果取其平均值。将培养皿置于培养箱中培养，金黄色葡萄球菌37 ℃有氧培养，痤疮丙酸杆菌37 ℃无氧培养。24 h后测量抑菌圈直径。选出抑菌效果最强的复方制剂做进一步试验。

1.2.5 最低抑菌浓度（ minimum inhibition concentration，MIC）试验 将最优复方凝胶稀释至3 g/L作为待检药液，按表1用无菌吸管分装液体培养基，吸取待检药液1 mL加入第1管，吹吸混匀3次后取5 mL至第2管；混匀后取5 mL加至第3管，以此类推至第8管，混匀后，弃5 mL。第9管不加检样，为试验菌对照管，每组设三个重复。接种试验菌液，每管200 μL。金黄色葡萄球菌37 ℃恒温培养，痤疮丙酸杆菌37 ℃无氧培养。24 h后肉眼观察，以浊度为指标检查试管中有无细菌生长，以不显示浑浊、完全无细菌生长的那一管的药液稀释度作为MIC[7]。

2 结果与分析

2.1 精制芦荟多糖含量测定结果 经计算得精制的芦荟多糖含量为72.82%。

2.2 抑菌圈测定结果 试验表明，空白对照未长出菌落，阴性对照未出现抑菌圈，表明培养基与无水乙醇以及培养条件等对抑菌效果测定均无干扰。复方凝胶对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径大于单方凝胶，复方方三抑菌圈直径最大，且三种配方的抑菌圈直径随浓度的增大而增大。见表2和见表3。

表1 液体培养基连续稀释法测定MIC稀释度 mL

2.3 MIC测定结果 空白管中培养基澄清，说明培养基与培养条件对MIC的测定没有干扰。复方凝胶对金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌的MIC分别为37.5 mg/L、75 mg/L。见表4。

3 讨论

痤疮丙酸杆菌是人类皮肤毛囊皮脂腺滤泡中最主要的微生物，与金黄色葡萄球菌共同导致痤疮的发生，引起炎症性丘疹、脓包等皮损。用药物减少皮肤毛囊注：阴性对照为凝胶基质。阳性对照为甲硝唑，“-”表示不敏感，抑菌圈直径<7 mm；“+”表示低敏，抑菌圈直径7～10 mm；“++”表示中敏，抑菌圈直径10～15 mm；“+++”表示高敏，抑菌圈直径15～20 mm；“++++”表示极敏，抑菌圈直径>20 mm中的痤疮主要致病菌的数量是目前治疗痤疮的主要途径之一[8]。维A酸类和抗生素类是临床上较常使用的药物[9]。其中常用的抗生素有红霉素、甲硝唑等，但随着抗生素的不规范使用甚至滥用，细菌对药物产生耐药性，从而影响痤疮治疗的效果及稳定性[10]。芦荟是含有酚类、多糖及氨基酸等化合物的中药，对革兰氏阳性菌有较好抗性，且芦荟多糖和维生素对人体的皮肤有良好的营养、滋润、增白作用。丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用[11-12]。同时丹参酮还具有抗雄激素、温和的雌激素样活性和抑制皮脂分泌的作用，可以对痤疮发挥综合治疗的效果[13]。实验结果表明，芦荟-丹参复方凝胶对痤疮主要致病菌抑菌作用强于单方凝胶，且以1：2配比效果最佳，对金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌的MIC分别为37.5 mg/L和75 mg/L。且芦荟-丹参复方凝胶为中药制剂，杜绝了众多患者采取西药治疗引起的一系列副作用，细菌一般不产生抗药性。

表2 不同浓度凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径 mm

表3 不同浓度凝胶对痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径 mm

表4 最优复方凝胶对2种痤疮致病菌的MIC

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