抗感解毒泡腾片的质量标准

柳莹　蔡喜生

摘 要：目的 建立抗感解毒泡腾片的质量标准，提高药品的质量控制 方法 采用反相高效液相色谱法测定黄芩苷的含量，选用依利特C18（4.6×250mm，5?m）色谱柱，流动相：甲醇-水-磷酸（42：58：0.3）为流动相，流速：1.0ml﹒min-1，检测波长：276nm。结果 黄芩苷在0.1044～0.9396μg﹒mL-1范围内呈良好的线性，r=1.0000，方法的平均回收率为98.93%，RSD为0.32%。同时用薄层色谱法对栀子和板蓝根进行定性鉴别。结论 本法准确可靠，专属性强，结果稳定，重现性好，为药品的质量控制提供更有效的措施。

关键词：抗感解毒泡腾片 质量标准 含量测定

中图分类号：R92 文献标识码： A 文章编号：1674-098X（2014）04（c）-0225-02

抗感解毒泡腾片是由葛根、栀子、黄芩、菊花、板蓝根、茵陈等组成的复方中药制剂，同时也是一款新型的剂型（遇水可产生气体而呈泡腾状的片剂）。黄芩为该处方中的君药。黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，具有清热燥湿，泻火解毒之功效。与本品的功能主治密切相关，因此，以黄芩苷作为指标性成分，控制本制剂的内在质量，具有合理性。同时栀子和板蓝根具有清热解毒，凉血利咽、泻火除烦等功效，在此处方中有着不可忽视的作用，所以我们参考有关资料[1～4]对栀子、板蓝根拟定了薄层色谱鉴别方法；经方法学验证，表明所建立的方法专属性强、结果稳定可靠，操作简便可行，重复性好。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，黄芩苷对照品（批号：110842-201106，规格：供含量测定用）、栀子苷对照品（批号：110752-200912）、板蓝根对照品药材 （批号：110842-201106，）均购自中国药品生物制品检定所；抗感解毒泡腾片（吉林俊宏药业有限公司）；阴性药品自制。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 栀子的薄层色谱鉴别

取本品适量，研细，称取8 g，加甲醇30 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用无水硫酸钠脱水，滤过，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，加于中性氧化铝柱（100～200目，3g内径1 cm）上，用甲醇20mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再取除栀子外的全部样品成分，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5：5：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。（见图1）

2.2 板蓝根的薄层色谱鉴别

取本品适量，研细，称取12 g，加75%乙醇50 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加4%氢氧化钠溶液10 mL使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至2，用醋酸乙酯振摇提取3次，每次10 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取除板蓝根外的全部样品成分，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液2 μL，对照药材溶液、阴性对照溶液各5～10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40：1：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。（见图2）

3 含量测定的方法学考察

3.1 色谱条件

色谱柱：依利特C18（4.6×250 mm，5 ?m）；甲醇-水-磷酸（42：58：0.3）为流动相；流速：1.0 mL﹒min-1柱温：室温；检测波长为278 nm；进样量：10 ?L。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

3.2.2 供试品溶液的制备

取本品适量，研碎，精密称取0.65 g，置100 mL容量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理30 min，取出，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，弃去初滤液，取续滤夜，即得。

3.2.3 阴性对照的制备

按处方比例配成不含黄芩的全部药材，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

3.3 系统适用性试验

分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 ?L，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在相同的色谱条件下，供试品中黄芩苷峰与各相邻成分的峰能有较好的分离效果，且阴性对照溶液无干扰。（见图3）

3.4 线性关系的考察

精密称取黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，分别精密吸取对照品溶液2、6、10、14、18μL测定，注入液相色谱仪，平行进样2次，以对照品溶液进样量（μg）为横坐标，以峰面积值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=-3618.3+2128518.678X （r=1.0000），结果表明黄芩苷0.1044～0.9396 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验endprint

精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复5次，测定其色谱峰面积值RSD为0.2%结果表明仪器本身的精密度良好。

3.6 稳定性实验

取同一批号的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h，同法测定含量，RSD为0.2% 结果表明12 h内供试品溶液中黄芩苷成分基本稳定不变。

3.7 重复性实验

取同一批号供试品，取样5份，依“3.2.2”项下方操作，制备供试品溶液用外标法计算黄芩苷含量（mg/片），测得平均含量为20.0 mg/片，RSD为1.0%，结果表明本法具有良好的重复性。

3.8 回收率实验

精密称取已知含量的供试品（批号：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分别精密加入一定量的对照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。

3.9 样品测定结果及限度

依3.2.2 项下方法测定三批样品，结果见表2。

4 结语

（1）茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分，主要含有绿原酸和咖啡酸等，我们对茵陈拟定了薄层色谱鉴别方法，以茵陈对照药材、绿原酸对照品作对照，效果均不理想，试验方法还有待进一步研究，故暂不列入质量标准。

（2）对展开剂的选择：板蓝根的薄层色谱鉴别中，我们参考文献[4]对两种展开剂进行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）结果显示，后者分离清晰且显而易见，故展开剂②纳入正文。

（3）试验研究中，参考相关文献[5]，①提取试剂的选择：用甲醇、50%甲醇为溶媒制备供试品溶液，结果表明，用50%甲醇提取黄芩苷测定结果偏高，且重现性好，故溶媒选用50%甲醇；②提取方法的选择：供试品测定中，同时选用超声提取30 min和回流30 min，结果显示无明显差别，故选用超声提取简便易行；③流动相的选择：我们对甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）进行优化试验，结果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

（4）此外，本试验还按照2010年版《中国药典》（一部） 附录片剂项下规定，进行了重量差异、崩解时限、发泡量及微生物限度等检测，均符合规定。

（5）以TLC、HPLC对抗感解毒泡腾片进行质量控制，能更有效的保证产品的安全性、有效性和可控性。

参考文献

[1] 国家药典委员会编.中国药典[M].中国医药科技出版社，2010.

[2] 肖飞，陈桦，李其凤，等.抗病毒分散片质量标准研究[J].中国药业，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒胶囊[S].国家食品药品监督管理局国家药品标准.

[4] 李亚玲，叶云，余德智.蒲地兰消炎口服液中板蓝根等4味药材薄层色谱鉴别[J].辽宁中医药大学学报，2012，14（6）.

[5] 陈珂，宋岚，邝明，等.高效液相色谱法测定杏杷止咳颗粒中黄芩苷含量[J].中国药业，2011，20（1）.endprint

精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复5次，测定其色谱峰面积值RSD为0.2%结果表明仪器本身的精密度良好。

3.6 稳定性实验

取同一批号的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h，同法测定含量，RSD为0.2% 结果表明12 h内供试品溶液中黄芩苷成分基本稳定不变。

3.7 重复性实验

取同一批号供试品，取样5份，依“3.2.2”项下方操作，制备供试品溶液用外标法计算黄芩苷含量（mg/片），测得平均含量为20.0 mg/片，RSD为1.0%，结果表明本法具有良好的重复性。

3.8 回收率实验

精密称取已知含量的供试品（批号：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分别精密加入一定量的对照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。

3.9 样品测定结果及限度

依3.2.2 项下方法测定三批样品，结果见表2。

4 结语

（1）茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分，主要含有绿原酸和咖啡酸等，我们对茵陈拟定了薄层色谱鉴别方法，以茵陈对照药材、绿原酸对照品作对照，效果均不理想，试验方法还有待进一步研究，故暂不列入质量标准。

（2）对展开剂的选择：板蓝根的薄层色谱鉴别中，我们参考文献[4]对两种展开剂进行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）结果显示，后者分离清晰且显而易见，故展开剂②纳入正文。

（3）试验研究中，参考相关文献[5]，①提取试剂的选择：用甲醇、50%甲醇为溶媒制备供试品溶液，结果表明，用50%甲醇提取黄芩苷测定结果偏高，且重现性好，故溶媒选用50%甲醇；②提取方法的选择：供试品测定中，同时选用超声提取30 min和回流30 min，结果显示无明显差别，故选用超声提取简便易行；③流动相的选择：我们对甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）进行优化试验，结果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

（4）此外，本试验还按照2010年版《中国药典》（一部） 附录片剂项下规定，进行了重量差异、崩解时限、发泡量及微生物限度等检测，均符合规定。

（5）以TLC、HPLC对抗感解毒泡腾片进行质量控制，能更有效的保证产品的安全性、有效性和可控性。

参考文献

[1] 国家药典委员会编.中国药典[M].中国医药科技出版社，2010.

[2] 肖飞，陈桦，李其凤，等.抗病毒分散片质量标准研究[J].中国药业，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒胶囊[S].国家食品药品监督管理局国家药品标准.

[4] 李亚玲，叶云，余德智.蒲地兰消炎口服液中板蓝根等4味药材薄层色谱鉴别[J].辽宁中医药大学学报，2012，14（6）.

[5] 陈珂，宋岚，邝明，等.高效液相色谱法测定杏杷止咳颗粒中黄芩苷含量[J].中国药业，2011，20（1）.endprint

精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复5次，测定其色谱峰面积值RSD为0.2%结果表明仪器本身的精密度良好。

3.6 稳定性实验

取同一批号的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12 h，同法测定含量，RSD为0.2% 结果表明12 h内供试品溶液中黄芩苷成分基本稳定不变。

3.7 重复性实验

取同一批号供试品，取样5份，依“3.2.2”项下方操作，制备供试品溶液用外标法计算黄芩苷含量（mg/片），测得平均含量为20.0 mg/片，RSD为1.0%，结果表明本法具有良好的重复性。

3.8 回收率实验

精密称取已知含量的供试品（批号：20050401含量20.0 mg/片）0.34g 6份，分别精密加入一定量的对照品溶液（52.2 μg/ml）5 ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。

3.9 样品测定结果及限度

依3.2.2 项下方法测定三批样品，结果见表2。

4 结语

（1）茵陈为菊科植物滨蒿或茵陈蒿的干燥地上部分，主要含有绿原酸和咖啡酸等，我们对茵陈拟定了薄层色谱鉴别方法，以茵陈对照药材、绿原酸对照品作对照，效果均不理想，试验方法还有待进一步研究，故暂不列入质量标准。

（2）对展开剂的选择：板蓝根的薄层色谱鉴别中，我们参考文献[4]对两种展开剂进行考察，①苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）②苯-醋酸乙酯-冰醋酸（40∶1∶0.5）结果显示，后者分离清晰且显而易见，故展开剂②纳入正文。

（3）试验研究中，参考相关文献[5]，①提取试剂的选择：用甲醇、50%甲醇为溶媒制备供试品溶液，结果表明，用50%甲醇提取黄芩苷测定结果偏高，且重现性好，故溶媒选用50%甲醇；②提取方法的选择：供试品测定中，同时选用超声提取30 min和回流30 min，结果显示无明显差别，故选用超声提取简便易行；③流动相的选择：我们对甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3），甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.3）进行优化试验，结果，以甲醇-水-磷酸（42∶58∶0.3）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

（4）此外，本试验还按照2010年版《中国药典》（一部） 附录片剂项下规定，进行了重量差异、崩解时限、发泡量及微生物限度等检测，均符合规定。

（5）以TLC、HPLC对抗感解毒泡腾片进行质量控制，能更有效的保证产品的安全性、有效性和可控性。

参考文献

[1] 国家药典委员会编.中国药典[M].中国医药科技出版社，2010.

[2] 肖飞，陈桦，李其凤，等.抗病毒分散片质量标准研究[J].中国药业，2012，21（21）.

[3] WS-056（Z-056）-2001（Z）抗感解毒胶囊[S].国家食品药品监督管理局国家药品标准.

[4] 李亚玲，叶云，余德智.蒲地兰消炎口服液中板蓝根等4味药材薄层色谱鉴别[J].辽宁中医药大学学报，2012，14（6）.

[5] 陈珂，宋岚，邝明，等.高效液相色谱法测定杏杷止咳颗粒中黄芩苷含量[J].中国药业，2011，20（1）.endprint