阿莫西林分散片人体生物等效性研究

李晋峰，沙 莹，李佩琼 ，王九辉，林明琴

(1．海口市制药厂有限公司，海南 海口 570311;2．海南医学院药理学教研室，海南 海口 571101)

阿莫西林为半合成广谱青霉素类抗生素，性质稳定，口服吸收快，体内分布广，价格便宜，临床应用广泛。其口服制剂有片剂、胶囊剂、颗粒剂、咀嚼片、干混悬剂、分散片等多种剂型，与普通片剂相比，分散片具有崩解快、吸收快、生物利用度高等特点。本研究中旨在对海口市制药厂有限公司研制的阿莫西林分散片进行人体生物等效性评价，为临床用药提供参考。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(1525泵，Waters 2487检测器，Breeze色谱工作站);HH－1型漩涡混合器;TL－16型台式高速冷冻离心机等。试验制剂为海口市制药厂有限公司研制的阿莫西林分散片(规格为0．25 g，批号为110701);参比制剂阿莫西林分散片(华北制药集团制剂有限公司，规格为0．25 g，批号为1202003);阿莫西林对照品(海口市制药厂有限公司，含量为84．4%);甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、氢氧化钠为分析纯。

2 方法与结果

2．1 研究对象

受试者为健康男性志愿者，无烟酒嗜好，无药物过敏史和药物依赖史，无精神病史及其他慢性疾病史，试验前经病史询问、体格检查和实验室检查均无异常，试验前2周内未服用任何药物。受试者服药后避免剧烈运动，且不得长时间卧床。试验期间统一进清淡饮食。试验经伦理委员会批准，受试者签署知情同意书。

2．2 试验设计

采用双周期、随机、交叉试验设计，选择20名受试者，随机分为两组，每组10人。一组先服用参比制剂，经7 d洗脱后再服用试验制剂;另一组给药顺序相反。给药剂量均为0．75 g。试验前禁食12 h，服药2 h后可饮水，4 h后统一进餐。于给药前及给药后0．25，0．50，0．75，1．00，1．50，2．00，2．50，3．00，3．50，4．00，5．00，6．00，8．00 h时抽取上肢静脉血 5 mL，注入肝素试管中，分离血浆，于－20℃保存，待测。

2．3 血浆药物浓度测定方法学

2．3．1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);柱温:室温;流动相:0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用2 mol/L的氢氧化钠溶液调 pH 至 5．5)－甲醇(89∶11);流速:1．0 mL/min;紫外检测波长:230 nm;进样量 20 μL。

2．3．2 样品处理

精密吸取血浆样品100 μL，精密加入甲醇200 μL，涡旋混合1 min，以6 000 r/min的速率离心10 min，取上清液20 μL进样，以峰面积进行定量分析。

2．3．3 方法考察

专属性考察:取空白血浆、空白血浆加对照品、受试者服药后血浆样品，按2．3．2项下方法处理后测定，记录高效液相色谱(HPLC)图，考察方法专属性。结果阿莫西林保留时间约为5．1 min，无内源性物质及其他杂质干扰主成分的测定，方法专属性强，见图1。

图1 阿莫西林含量测定方法高效液相色谱图

标准曲线和定量下限确定:配制质量浓度为0．116，0．232，0．464，0．928，1．856，3．712，7．424，14．848 μg/mL的阿莫西林加空白血浆标准系列，按2．3．2项下方法处理后测定，以峰面积对质量浓度进行线性回归，得回归方程 Y=289．45X+0．2541，r=0．9998(n=8)。阿莫西林质量浓度线性范围为 0．116 ～14．848 μg/mL，最小可定量质量浓度为0．116 μg/mL。

精密度和回收率试验:配制质量浓度为0．232，1．856，7．424μg/mL的低、中、高3组阿莫西林加空白血浆标准样各5份并测定，以测定值与加入值之比计算回收率，并计算日内精密度;连续3 d配制并测定阿莫西林浓度，考察日间精密度。结果见表1。

表1 精密度与回收率试验结果(n=5)

稳定性试验:配制阿莫西林质控样品，分别于室温放置12 h，－20℃冷冻保存1个月，－20℃反复冻融4次以考察室温、冷冻、冻融3种条件下生物样品的稳定性。结果不同条件下的测定结果偏差均小于15%，阿莫西林血浆样品稳定性良好。

2．4 药代动力学

取受试者给药前及给药后各时间点的血浆样品，按2．3．2项下方法测定，采用标准曲线计算阿莫西林血药浓度。20名受试者口服0．75g参比制剂和等剂量试验制剂后阿莫西林的平均血药浓度－时间曲线见图2。

根据测得的20名健康受试者的血药浓度，用DAS 2．0软件计算阿莫西林在健康男性志愿者体内的药代动力学参数。20名健康受试者口服参比制剂和试验制剂后阿莫西林的主要药代动力学参数见表2。

图2 20名受试者平均血药浓度－时间曲线

表2 试验制剂与参比制剂的药代动力学参数比较()

表2 试验制剂与参比制剂的药代动力学参数比较()

参数0 ～8 h药时曲线下面积[AUC0→8，μg/(h·mL)]0 ～∞药时曲线下面积[AUC0→∞，μg/(h·mL)]峰浓度(Cmax，μg/mL)达峰时间(tmax，h)半衰期(t1/2，h)相对生物利用度(F，%)试验制剂25．10 ± 4．41 25．81 ± 4．48 10．031 ± 1．928 1．30 ± 0．25 1．22 ± 0．50 101．46 ± 11．42参比制剂24．85 ± 3．98 24．56 ± 4．24 9．83 ± 2．11 1．35 ± 0．24 1．29 ± 0．68

2．5 生物等效性评价

用DAS 2．0软件对主要药代动力学参数进行统计学分析，tmax经Mann－Whitney检验，试验制剂与参比制剂无显著性差异(U=1．102，P=0．919)。Cmax，AUC0→∞，AUC0→∞经对数转换后进行方差分析，两制剂在不同周期间差异无显著性意义。试验制剂AUC0→8和 AUC0→∞的 90%可信区间均未超出参比制剂相应AUC0→8和 AUC0→∞的80% ～125%的范围;试验制剂 Cmax的90%可信区间也未超出参比制剂 Cmax的70% ～143%的范围。结果表明，两制剂在健康男性志愿者体内的吸收速度和吸收量差异均无显著性，二者均有生物等效性。

3 讨论

阿莫西林血药浓度的测定文献大多采用HPLC－UV法，本研究在文献[1]的基础上对色谱条件进行优化，当流动相的磷酸二氢钾溶液(0．05mol/L)用2mol/L的氢氧化钠溶液调节至 pH为5．5时，杂质及主成分出峰均较快，主成分峰形较好，与杂质峰分离良好，试验分析周期短，适用于样品量大的生物等效性研究。也有文献采用液相色谱－串联质谱联用(LC－MS/MS)法[2]，但检测成本过高。在样品处理中，采用了直接蛋白沉淀法，通过对比多种蛋白沉淀剂，发现在所建立的色谱条件下，用甲醇作沉淀剂杂质最少。20名健康受试者在试验过程中均未出现不良反应。该厂生产的阿莫西林分散片的主要药代动力学参数与文献[3－5]报道相近，受试制剂与参比制剂生物学等效。

[1]张继明，沈 斌，朱余兵，等．阿莫西林制剂血浓度测定及相对生物利用度研究[J]．中国药师，2010，13(8):1 109 －1 112．

[2]Sailer R，Arnold P，Erenmemisoglu A，et al．Comparative pharmacokinetics of two tablet formulations of amoxicillin:bioequivalence assessment[J]．Arzneimittel－ Forschung，2007，57(4):227 － 231．

[3]何菊英，刘松青，夏培元，等．阿莫西林胶囊的人体相对生物利用度研究[J]．中国药业，2006，15(12):7－8．

[4]王川平，任进民，崔爱荣，等．阿莫西林/双氯西林钠分散片的人体生物等效性研究[J]．中国药房，2007，18(8):583 －586．

[5]孟 玲，王永庆，张 静，等．阿莫西林颗粒剂人体生物利用度及生物等效性研究[J]．药学与临床研究，2008，16(1):29－31．