热敏灸“大椎”穴对哮喘大鼠行为学及病理学的影响*

★ 张伟 熊俊 张琳

(江西中医药大学附属医院 江西南昌330006)

支气管哮喘(bronchial asthma，简称哮喘)是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病［1］。目前，全球哮喘患者约3亿人，中国哮喘患者约3 000万。哮喘是影响人们身心健康的重要疾病。气道炎症几乎是所有类型哮喘的共同特征，也是临床症状和气道高反应性的基础，气道炎症存在于哮喘的所有时段。目前西医用药主要以激素、β2-受体激动剂、白三烯受体拮抗剂、茶碱、抗胆碱药物、抗IgE治疗，但需要规范化长期治疗，只能控制不能根治，且给患者造成较大经济负担。热敏灸疗法［2-7］是一种新型的中医灸疗方法，它以腧穴的热敏化为技术核心，施以人体需要的饱和灸量，最大限度调动人体的自我调控能力，从而提高人体自我修复能力，以达到治疗疾病的目的。热敏灸疗法用时短，直接提高人体正气，疗效显著且经济实惠，值得临床推广。现就热敏灸改善哮喘大鼠的行为学、病理学情况作以下详细研究。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 SD雄性大鼠40只，体重220～250g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号:SCXK(湘)2009-0004，动物在实验前适应性驯养1周，饲养环境为江西中医学院热敏灸重点实验室，室温25℃，空气湿度为50%，通风条件良好。按随机数字表法，空白组、模型组每组各10只、治疗组20只，根据“大椎”穴是否被热敏化自动分为普通悬灸组(未热敏化)和热敏灸组(热敏化)。

1.2 主要试剂和仪器 TSI-21型热扫描成像系统(北京贝亿医疗器械有限公司)，卵清蛋白(生产商:Sigma公司，北京索莱宝科技有限公司分装)、氢氧化铝干粉500g/瓶(广州化学试剂厂)、灭菌注射用水(运城市天源制药有限公司)、超声雾化器(型号:402AI，上海鱼跃医疗设备有限公司)，0.5% ～1%的伊红酒精溶液、苏木素染液、1%盐酸酒精分化液、奥林巴斯OLYMPUS BX41研究显微镜、秒表、艾条(0.4cm×10cm，江西省中医院生产)。

1.3 造模方法 大鼠于第1、8天腹腔注射致敏混悬剂(含卵蛋白100mg、氢氧化铝干粉100 mg、灭活百日咳杆菌5×109个)1mL，第15天开始用1%卵白蛋白生理盐水雾化吸入激发哮喘，每天1次，每次20min，共1周。正常对照组用灭菌注射用水代替卵清白蛋白液进行注射和雾化吸入。

1.4 造模成功标准 以大鼠出现烦躁、呛咳、打喷嚏，呼吸频率加快、幅度加大、腹式呼吸明显和点头运动，严重者呼吸减慢或节律不整，四肢瘫软，行动迟滞或俯伏不动，反应迟钝等症状为激发成功。

1.5 穴位热敏化标准 用固定夹将大鼠固定后，选取大鼠大椎穴，定位取穴按照国家十一五规划教材李忠仁主编的《实验针灸学》，以及胡元亮编《实验动物针灸手册》，取第7颈椎与第1胸椎之间背部正中。用艾条悬于大椎穴上约2mm处先回旋灸2 min预热局部皮肤，再固定于大椎穴施行温和灸。艾灸“大椎”穴10min后，对大鼠进行红外热像检测，红外热成像产生沿脊柱纵向扩散或横向扩散的红外辐射增强区域(温度升高0.5℃以上)长径≥3cm被视为腧穴的热敏化阳性。

1.6 治疗方法 造模成功后，开始介入艾灸治疗。每日于早9∶00开始，普通悬灸组与热敏灸组各灸20min，每日1次，共治疗7天。

1.7 样本采集及检测 治疗结束后，模型组、普通悬灸组、热敏灸组做最后一次雾化激发实验，之后将所有大鼠乙醚麻醉后于股动脉取血并处死。取大鼠右肺中叶，10%缓冲福尔马林固定液固定，再进行脱水、透明、石蜡包埋、切片和HE染色，最后在光镜下观察结果。

1.8 统计方法 用SPSS 13.0软件包处理，所有数据用平均数±标准差(±s)表示，进行多个样本均数的方差分析以及均数间两两比较(SNK-q检验)，如果出现方差不齐，经数据转换后使方差齐，再进行检验。

2 结果

2.1 哮喘大鼠行为学观察 (1)最后一次激发实验各组大鼠行为变化。模型组在激发后出现明显鼻部瘙痒抓鼻，进而呼吸加深、加快，跌倒，少动，点头呼吸，呈哮喘样表现;热敏化组、普通悬灸组症状明显减轻，且热敏化组优于普通悬灸组。

(2)大鼠20min引喘潜伏期、发作总持续时间比较。见表1。

表1 大鼠20min引喘潜伏期、发作总持续时间比较

说明:■P ＜0.01，说明造模成功;▲P ＜0.01，说明热敏灸与普通悬灸对于减轻哮喘大鼠的发作，改善哮喘大鼠的行为学指标皆有非常显著的疗效;●P＜0.01，说明热敏化组对于改善哮喘大鼠的行为学指标明显优于普通悬灸组。

(3)大鼠20min发作次数、打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数比较。见表2。说明:■P ＜0.01，说明造模成功;▲P ＜0.01，说明普通悬灸组及热敏化组对于减轻哮喘大鼠的发作，改善哮喘大鼠的行为学指标皆有非常显著的疗效;●P＜0.01，说明热敏化组对于改善哮喘大鼠的行为学指标明显优于普通悬灸组。

表2 大鼠20min发作次数、打喷嚏次数、鼻痒抓鼻次数比较

2.2 病理组织学观察 (1)正常肺组织切片。正常对照组肺组织显示细支气管管壁光滑，支气管平滑肌细胞未见增生，支气管粘膜皱壁无增生，管腔通畅，管内无炎性渗出物，小动脉管壁厚薄均匀，肺泡壁厚薄均匀一致，肺泡大小均匀一致，肺泡无溶合(见图1、2)。

图1 、2 为正常肺组织切片

(2)模型组肺组织切片。病理组织学改变:气管管壁周围有大量炎性细胞浸润;支气管粘膜皱裳增多延长，杯状细胞增生明显，平滑肌增厚，管腔缩窄，内有粘液栓;伴行小动脉管壁增厚缩窄，管腔闭塞;部分肺泡壁变薄或断裂，融合成肺气肿(见图3、4)。

图3 、4 为模型组肺组织切片

(3)普通悬灸组肺组织切片。病理组织学改变:气管管壁周围有较多炎性细胞浸润;支气管粘膜皱裳有增多延长，杯状细胞有增生，平滑肌中度增厚，管腔中度缩窄，内有少量粘液栓;伴行小动脉管壁中度增厚缩窄，管腔狭窄;少量肺泡壁变薄或断裂，融合成肺气肿(见图5、6)。

图5 、6 为普通悬灸组肺组织切片

(4)热敏灸组肺组织切片。病理组织学改变:气管管壁周围有少量炎性细胞浸润;支气管粘膜皱裳少许增多延长，杯状细胞少量增生，平滑肌轻度增厚，管腔稍有缩窄，内有少量粘液栓;伴行小动脉管壁轻度增厚缩窄，管腔稍狭窄;少量肺泡壁变薄或断裂，融合成肺气肿(见图7、8)。

图7 、8 为热敏灸组肺组织切片

综上所述，普通悬灸组、热敏灸组与模型组比较，说明艾灸可改善肺组织的形态学结构，减轻肺组织的炎症反应和气道高反应性，对哮喘有明显的改善作用;而热敏灸组与普通悬灸组比较，肺组织形态学方面亦有非常明显的改善，说明热敏灸“大椎穴”可明显改善哮喘大鼠的炎症反应和气道高反应性，减轻哮喘发作。

3 讨论

哮喘是临床常见病多发病，目前，西医学有关支气管哮喘的基础研究已进入细胞和分子研究水平，但在治疗方面只能控制病情，所以在远期疗效和预后的评价上仍不令人十分满意。艾灸是使用灸火给人体以温热性刺激，通过经络腧穴的作用，以达到防治疾病目的的一种方法［8］，能温经散寒、活血通络、扶阳固脱。《医学入门·针灸》载:“药之不及，针之不到，必须灸之。”是中医学治疗哮喘的常用手段。热敏灸疗法是利用某些穴位喜热、嗜热的特性，温和灸产生一个“小刺激大反应”，通过穴位的六种热敏化形式产生经气感传并达到饱和灸量，从而使治疗效果达到最大化的治疗手段。

大量研究说明艾灸能调节机体免疫功能，并对改善肺通气功能有显著效果，尤其适用于变态反应性疾病和气道反应性疾病，能有效控制哮喘发作。本人以前的研究［9，10］亦发现艾灸哮喘大鼠“大椎穴”可降低血清中IL-4、IgE含量，提高IFN-γ含量，从而提高TH1/TH2，减轻气道炎症及高阻性。本研究热敏灸组与非热敏灸组对哮喘大鼠行为学、病理学均有显著改善，说明艾灸对改善哮喘大鼠的行为学、病理学有较好疗效;而热敏灸组与非热敏灸组比较，热敏灸组对哮喘大鼠行为学、病理学方面较非热敏灸组有非常显著性改善，说明热敏灸通过穴位的热敏化治疗提高疗效。

“灸之要，气至而有效”，此研究说明艾灸同样需要重视穴位的状态，而热敏化腧穴正是处于敏化状态的喜热、嗜热穴位，艾灸热敏化腧穴可发动经气感传甚至气至病所，可大大提高疗效，值得临床推广应用。

［1］叶任高.内科学［M］.第6版.北京:人民卫生出版社，2004:64.

［2］陈日新，陈明人，康明非.热敏灸实用读本［M］.北京:人民卫生出版社，2009:3-16.

［3］陈日新，康明非.腧穴热敏化的临床应用［J］.中国针灸，2007，27(3):199-202.

［4］陈日新，康明非.腧穴热敏化艾灸新疗法［M］.北京:人民卫生出版社，2006:10.

［5］陈日新，陈明人，康明非，等.重视热敏灸感是提高灸疗疗效的关键［J］.针刺研究，2010，35(4):311-314.

［6］陈日新，康明非，陈明人.岐伯归来-论腧穴“敏化状态”说［J］.中国针灸，2011，31(2):134-138.

［7］陈日新，康明非，陈明人.《内经》腧穴概念在热敏灸中的重要指导作用［J］.江西中医学院学报，2010，22(3):36-38.

［8］石学敏.针灸学［M］.第2版.北京:中国中医药出版社，2007:152.

［9］张伟，陈明人，熊俊.悬灸“大椎”穴对哮喘大鼠血清IL-4、IFN-γ 的影响［J］.中国中医基础医学杂志，2012，18(5):541-542.

［10］张伟，陈明人，熊俊.不同灸量悬灸“大椎”穴对哮喘大鼠细胞免疫学机制的影响［J］.针刺研究，2012，37(3):202-205.