曲安奈德益康唑乳膏中防腐剂苯甲酸含量测定

★ 聂鹤云 王森 朱卫丰 沈冬冬

(1.江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室 江西 南昌330004;2.上海百安制药有限公司 上海201501)

防腐剂［1］是指能防止或抑制病原微生物生长发育的化学药品，作为制剂处方中的重要组成部分之一，在防止药品被微生物污染，确保药品质量方面起着重要作用。同时由于防腐剂本身存在着一定的毒性，若制剂中防腐剂的选择与用量控制不当，将对人体产生不良反应［2］，因此在药物制剂研发过程中确定防腐剂的选择与用量是一关键项目。在常用的外用O/W型乳膏剂中，苯甲酸常作为防腐剂加入其中以确保药品质量［3］，而在现行中国药典(2010版)并未对其做含量测定要求。本文以派瑞松(西安杨森制药有限公司)为例，对其防腐剂苯甲酸进行含量测定。

1 仪器设备及试药

1.1 仪器设备 Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)、BT25S Sartorius电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)、SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 试药 苯甲酸对照品(纯度100%，中国食品药品检验研究院)、曲安奈德益康唑乳膏(西安杨森制药有限公司，派瑞松)、甲醇(HPLC，TEDIA，US)、异丙醇(HPLC，TEDIA，US)、乙腈(HPLC，TEDIA，US)、己烷磺酸钠(HPLC，上海展云化工有限公司)、85%磷酸(AR，国药集团化学试剂有限公司)、重蒸水(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验［4］色谱柱Phenomenex C8柱(250mm ×4.6mm)柱温:40℃，以乙腈:异丙醇:双蒸水:己烷磺酸钠:85%磷酸(140∶140∶720∶0.94∶1)为流动相 A 相;甲醇:双蒸水:己烷磺酸钠:85%磷酸(900∶100:0.94∶1)为 B相;流速:1mL/min;检测波长:240nm，进样量10μL，梯度洗脱条件如表1。苯甲酸峰对称因子为0.98，分离度10.6，见图1、图2。

表1 梯度洗脱程序

图1 苯甲酸对照品图谱

图2 曲安奈德益康唑乳膏供试品图谱

2.2 溶液制备

2.2.1 乳膏供试品溶液 取派瑞松(批次:110219654)1.25g，精密称定，置25mL量瓶中，加2mL四氢呋喃振摇使溶解，甲醇定容至刻度即得供试品溶液。

2.2.2 苯甲酸对照品储备液 精密量取苯甲酸8.00mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解，加入四氢呋喃2mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得800.0μg/mL苯甲酸对照品储备液。

2.3 线性试验 精密量取苯甲酸对照品储备液0.15mL、0.3mL、0.6mL、1.2mL、2.4mL、4.8mL 置10mL量瓶中，制备成系列对照品溶液。按2.1方法精密吸取上述对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积。以峰面积分值为横坐标，对照品浓度(μg/mL)为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为:Y=0.0181X+1.7348，r=0.9996，苯甲酸在12.0～384.0μg/mL范围内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取线性系列同一对照品溶液10μL，重复进样测定8次，苯甲酸峰面积RSD为0.31%，精密度良好，符合要求。

2.5 溶液稳定性 取制备的乳膏供试品溶液分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h 进样，测定，苯甲酸面积RSD为1.26%，表明样品在24h内稳定。

2.6 回收率试验 分别取派瑞松乳膏供试品溶液0.8mL、1mL、1.2mL，相应加入苯甲酸对照品储备液0.8mL、1mL、1.2mL，按上述色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率结果(n=9)

2.7 重复性试验 取上述回收率试验的一份供试品溶液，按上述色谱条件分别精密量取各10μL注入液相色谱仪，进样6次测定，记录色谱图，计算相对标准偏差(RSD)，结果见表2，RSD为1.96%，表明该方法重复性较好。

2.8 苯甲酸含量测定 取曲安奈德益康唑乳膏(派瑞松，批次:110219654、110219655、110219656)供试品溶液各两份，按上述色谱条件分别精密量取各10μL注入液相色谱仪，进样测定，用外标法计算含量，结果见表3。

表3 防腐剂含量测定结果

3 结果与讨论

试验表明，上述方法在测定曲安奈德益康唑乳膏时，灵敏度高、操作简便，且在测定该乳膏主药曲安奈德、硝酸益康唑时能兼顾本防腐剂的测定，对于企业提升产品质量内控标准，降低质量风险具有一定意义［5］。同时测得该乳膏苯甲酸含量为0.15%，为该品种仿制药研发防腐剂处方设计提供了参比依据。

［1］李慧敏.HPLC法检测口服液类保健食品中苯甲酸和山梨酸的含量［J］.中国药事，2013(1):38.

［2］成海平.药品研发中防腐剂的应用及质控［J］.中国新药杂志，2005(8):954.

［3］何应龙.醋酸曲安奈德益康唑乳膏的研究［D］.湖北中医药大学，2011.

［4］国家药典委员会.中国药典二部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:269.

［5］金树辉，刘树林.药品生产过程质量风险管理探讨［J］.中国药物警戒，2007(6):352.