PHLPP在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

谢优优等

[摘要] 目的 探讨PHLPP 在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学染色的方法检测82例NSCLC组织中PHLPP蛋白的表达情况，并结合临床及病理因素进行相关性分析。 结果 PHLPP主要在细胞膜上表达，在NSCLC中63%阴性表达、11%为+、10%为++、16%为+++，PHLPP的表达与NSCLC的分化程度存在显著相关性（P=0.024），与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及分期没有显著相关性。结论 PHLPP蛋白在人NSCLC组织中表达率为37%，与NSCLC的分化程度有相关性。

[关键词] 非小细胞肺癌；PHLPP；免疫组织化学

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）27-0021-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of PHLPP in non-small cell lung cancer （NSCLC） and its correlations of clinicopathological characteristics. Methods All of 82 tissue specimens with NSCLC were examined with immunohistochemical staining， and the results of IHC were analyzed with the clinicopathologic characteristics. Results PHLPP mainly expressed on the cell membrane. The rate of PHLPP expression was negative in 63%， poor in 11%， moderate in 10% and strong in 16%， respectively. The expression of PHLPP was significantly correlated with differentiation， but not with age， smoking states， pathological type and stage. Conclusion The positive expression rate of PHLPP is 37% in human NSCLC tissue specimens and was correlated with histological differentiation .

[Key words] Non-small cell lung cancer（NSCLC）；PHLPP；Immunohistochemistry（IHC）

肺癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一[1]，其发生、发展的分子机制目前尚未完全明了，癌基因的激活及抑制基因的缺失和（或）突变是导致肺癌发生的主要原因。PHLPP（PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase，PHLPP）是Gao等[2]发现的一种新型抑癌基因，可特异性地使细胞中pAkt的疏水基团去磷酸化，从而降低活化Akt的水平，促进细胞凋亡和抑制细胞增殖，发挥抑制肿瘤发生发展的作用。之前有研究已经在H157细胞（一种非小细胞肺癌细胞）中发现PHLPP的过度表达导致AKT活性降低，使得细胞凋亡增加，而PHLPP的敲除使得细胞凋亡减少[2]。但是，目前尚未有研究证实其在体内的表达情况及其作用机制，本研究初步通过免疫组织化学染色的方法检测PHLPP在NSCLC中的表达情况，并分析其与临床、病理学因素的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象

取自我院2008年6月～2010年12月人体组织库和病理科经手术切除病理证实的NSCLC石蜡包埋标本82例。其中男68例，女14例；中位年龄59岁（35～80岁）。根据2002年AJCC肺癌分期标准第6版[3]，Ⅰ期26例，Ⅱ期20例，Ⅲ36例。全部病例术前均未行任何化疗或放疗。见表1。

2 结果

2.1 PHLPP在NSCLC中表达

PHLPP主要以细胞膜表达为主，阳性染色呈棕黄色或黄褐色（封三图1b）。在NSCLC中，仅26%的病例为高表达，74%的病例呈现低表达或不表达，分布情况见封三图1a。

2.2 PHLPP蛋白表达与NSCLC临床病理因素的相关性分析

PHLPP蛋白表达与分化程度有相关性（P=0.024），与年龄、性别、吸烟状态、组织学类型及分期均无相关性（P>0.05）。见表2。

3讨论

肺癌是全球癌症死亡率最高的恶性肿瘤[1]，在国内其发病率和死亡率在城市恶性肿瘤中居首位，非小细胞肺癌占全部肺癌患者的80%，临床Ⅰ/Ⅱ期患者手术治疗的5年生存率约为40%，而遗憾的是可手术的患者仅占全部肺癌病例的20%～30%，约30%～40%的病例在确诊时已经是局部晚期，40%病例确诊时已有远处转移，且治疗肺癌的疗效往往也不理想，总的非小细胞肺癌的5年生存率很低。因此探索肺癌的发生、发展的分子机制对提高肺癌的防治水平和改善预后有极为重要的意义。癌基因的激活及抑制基因的缺失或（和）突变是导致肺癌发生的主要原因。PI3K/Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一，通过影响下游多种效应分子的活化状态，在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用。多种研究表明pAkt过度活化，与其发生、发展、治疗疗效及耐放化疗存在密切的关系[6，7]。PHLPP是Gao等[2]在2005年首先发现的一种新型抑癌基因，通过使Akt的疏水基团在Ser473位点去磷酸化，使磷酸化的Akt降解或灭活，抑制了PI3K/Akt信号转导系统，从而发挥抑癌作用。endprint

PHLPP在人体各组织器官及细胞中均有广泛表达，近年来多项研究表明其在肿瘤中的表达明显下降[8-10]。国外J Liu等[5]发现在人大肠癌组织中PHLPP1和PHLPP2表达下降或缺失了78%和86%。同样，PHLPP在前列腺癌的发生发展中存在密切关系，多项研究发现PHLPP在前列腺癌中表达降低，Chen 等[11]报道在人前列腺癌组织中30%存在PHLPP1蛋白表达降低，45%存在PHLPP2蛋白表达降低。国内廖琪等[12]采用免疫组织化学方法检测PHLPP在上皮性卵巢癌中的表达情况，发现在卵巢癌中的表达率为25.6%，显著低于良性卵巢肿瘤的表达率（92.5%）。研究发现，相比乳腺癌的原发病灶，乳腺癌的转移病灶中Ser473的表达更高，同时可检测到转移灶中PHLPP表达的大量缺失，据此我们可以推断乳腺癌细胞中的PHLPP的低表达与乳腺癌的转移有很大关系[13]。最近，Li X[14]等发现PHLPP通过对RAF1的调节在RAF/MAPK/ERK信号通路中对肿瘤起到抑制作用，从而进一步提高了PHLPP基因在肿瘤中的作用。而且，还发现在乏氧状态下使得PHLPP表达下降，从而导致了化疗药物的耐受[15]。但是，对于PHLPP蛋白在NSCLC中的表达情况，目前国内外尚未有报道，仅Gao等[2]在H157（人非小细胞肺癌细胞系）中通过转染PHLPP使其呈高表达，从而在流式细胞仪检测发现细胞凋亡增加。本研究首次应用免疫组织化学染色的方法检测NSCLC组织标本PHLPP蛋白的表达情况，发现PHLPP主要在肺癌细胞膜上表达，在NSCLC中63%为阴性表达、11%为+、10%为++、16%为+++（封三图2）。PHLPP表达与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及分期无显著相关性，但与NSCLC的分化程度存在显著相关性（P=0.024），且其表达强度随分化程度的增高而增高，表明PHLPP表达与NSCLC的恶性程度相关，提示PHLPP蛋白的低表达可能作为NSCLC恶性程度的诊断依据，值得进一步的研究，因此，提高NSCLC细胞内PHLPP蛋白的表达量可能为NSCLC的治疗提供新策略和新靶点。

[参考文献]

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[12] 廖琪， 杜绍敏， 李秀岩. PHLPP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义[J]. 中国妇幼保健，2010，25（32）：4773-4774.

[13] Qiao M，Iglehart J，Pardee A. Depends on Akt/protein kinase B activation metastatic potential of 21T human breast cancer cells[J]. Cancer Res，2007，67（11）：5293-5299.

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[15] Yang-An Wen， Payton D，Stevens1，et al. Downregulation of PHLPP expression contributes 1 to hypoxia-induced resistance to chemotherapy in colon cancer cells[J]. Mol Cell Biol，2013，33（22）：4594-4605.

（收稿日期：2014-05-29）endprint

PHLPP在人体各组织器官及细胞中均有广泛表达，近年来多项研究表明其在肿瘤中的表达明显下降[8-10]。国外J Liu等[5]发现在人大肠癌组织中PHLPP1和PHLPP2表达下降或缺失了78%和86%。同样，PHLPP在前列腺癌的发生发展中存在密切关系，多项研究发现PHLPP在前列腺癌中表达降低，Chen 等[11]报道在人前列腺癌组织中30%存在PHLPP1蛋白表达降低，45%存在PHLPP2蛋白表达降低。国内廖琪等[12]采用免疫组织化学方法检测PHLPP在上皮性卵巢癌中的表达情况，发现在卵巢癌中的表达率为25.6%，显著低于良性卵巢肿瘤的表达率（92.5%）。研究发现，相比乳腺癌的原发病灶，乳腺癌的转移病灶中Ser473的表达更高，同时可检测到转移灶中PHLPP表达的大量缺失，据此我们可以推断乳腺癌细胞中的PHLPP的低表达与乳腺癌的转移有很大关系[13]。最近，Li X[14]等发现PHLPP通过对RAF1的调节在RAF/MAPK/ERK信号通路中对肿瘤起到抑制作用，从而进一步提高了PHLPP基因在肿瘤中的作用。而且，还发现在乏氧状态下使得PHLPP表达下降，从而导致了化疗药物的耐受[15]。但是，对于PHLPP蛋白在NSCLC中的表达情况，目前国内外尚未有报道，仅Gao等[2]在H157（人非小细胞肺癌细胞系）中通过转染PHLPP使其呈高表达，从而在流式细胞仪检测发现细胞凋亡增加。本研究首次应用免疫组织化学染色的方法检测NSCLC组织标本PHLPP蛋白的表达情况，发现PHLPP主要在肺癌细胞膜上表达，在NSCLC中63%为阴性表达、11%为+、10%为++、16%为+++（封三图2）。PHLPP表达与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及分期无显著相关性，但与NSCLC的分化程度存在显著相关性（P=0.024），且其表达强度随分化程度的增高而增高，表明PHLPP表达与NSCLC的恶性程度相关，提示PHLPP蛋白的低表达可能作为NSCLC恶性程度的诊断依据，值得进一步的研究，因此，提高NSCLC细胞内PHLPP蛋白的表达量可能为NSCLC的治疗提供新策略和新靶点。

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PHLPP在人体各组织器官及细胞中均有广泛表达，近年来多项研究表明其在肿瘤中的表达明显下降[8-10]。国外J Liu等[5]发现在人大肠癌组织中PHLPP1和PHLPP2表达下降或缺失了78%和86%。同样，PHLPP在前列腺癌的发生发展中存在密切关系，多项研究发现PHLPP在前列腺癌中表达降低，Chen 等[11]报道在人前列腺癌组织中30%存在PHLPP1蛋白表达降低，45%存在PHLPP2蛋白表达降低。国内廖琪等[12]采用免疫组织化学方法检测PHLPP在上皮性卵巢癌中的表达情况，发现在卵巢癌中的表达率为25.6%，显著低于良性卵巢肿瘤的表达率（92.5%）。研究发现，相比乳腺癌的原发病灶，乳腺癌的转移病灶中Ser473的表达更高，同时可检测到转移灶中PHLPP表达的大量缺失，据此我们可以推断乳腺癌细胞中的PHLPP的低表达与乳腺癌的转移有很大关系[13]。最近，Li X[14]等发现PHLPP通过对RAF1的调节在RAF/MAPK/ERK信号通路中对肿瘤起到抑制作用，从而进一步提高了PHLPP基因在肿瘤中的作用。而且，还发现在乏氧状态下使得PHLPP表达下降，从而导致了化疗药物的耐受[15]。但是，对于PHLPP蛋白在NSCLC中的表达情况，目前国内外尚未有报道，仅Gao等[2]在H157（人非小细胞肺癌细胞系）中通过转染PHLPP使其呈高表达，从而在流式细胞仪检测发现细胞凋亡增加。本研究首次应用免疫组织化学染色的方法检测NSCLC组织标本PHLPP蛋白的表达情况，发现PHLPP主要在肺癌细胞膜上表达，在NSCLC中63%为阴性表达、11%为+、10%为++、16%为+++（封三图2）。PHLPP表达与年龄、性别、吸烟状况、病理类型及分期无显著相关性，但与NSCLC的分化程度存在显著相关性（P=0.024），且其表达强度随分化程度的增高而增高，表明PHLPP表达与NSCLC的恶性程度相关，提示PHLPP蛋白的低表达可能作为NSCLC恶性程度的诊断依据，值得进一步的研究，因此，提高NSCLC细胞内PHLPP蛋白的表达量可能为NSCLC的治疗提供新策略和新靶点。

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