注射用阿奇霉素及其辅料对猫血压的影响

北京市药品检验所（100035）孙圆媛

1 前言

阿奇霉素为15元大环内酯类抗生素，是由红霉素进一步合成而得。阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中几乎不溶[1]，故在生产过程中选用酸性物质作为其助溶剂。由于抗生素药物生产技术复杂且不易控制，异物污染可能性较大，多数不稳定，分解产物的带入使其药效降低，无效或有毒性。生产过程中易混入组胺、腐胺、尸胺及其他降压物质。因而除各国药典均规定的注射剂常规检查外，还应进行降压物质检查，以确保临床安全用药[2]。

枸橼酸为注射用阿奇霉素的助溶剂。截至目前，国内尚无法定的无菌枸橼酸的质量标准，所以使用无菌枸橼酸的企业，几乎都是通过借鉴无菌粉生产的通用规定对普通药用级别的枸橼酸进行处理，使其无菌，热原项指标符合无菌粉针剂的相应要求[3]。因枸橼酸酸性较强，且它同时也是一种钙离子螯合剂[4]，高浓度下能完全结合去除细胞外的Ca2+，从而对血压造成一定程度的影响，因此在试验中有必要对枸橼酸进行降压物质检查。

降压物质检查法系比较组胺对照品（S）与供试品（T）引起麻醉猫血压下降的程度，以判定供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。针对原料药做降压物质检查不仅可以从源头把关而且对之后制剂生产有重要意义。同时对助溶剂（辅料）进行降压物质检查，可为生产企业开发此类品种选择合适的助溶剂提供依据和借鉴，并为临床安全用药提供保障。由此我们采用《中国药典》2010年版中降压物质检查法对该品种进行试验。在剂量设计过程中，我们参考“注射用阿奇霉素”的国家标准规定剂量：2000IU/kg，和“注射用阿奇霉素”的最大临床用量：0.5g/60kg，先进行预试。从预试中可确定该原料药是否与其制剂的国家标准规定降压物质检查的剂量一致。最后依据预试结果对三批阿奇霉素和枸橼酸进行试验，以确保在该剂量下所引起麻醉猫降压幅度均小于对照品所引起的降压幅度，根据结果可以确定注射用阿奇霉素引起降压的主要物质基础。

附图1 批号： 120801 剂量：8000 IU/kg

附图2 批号：120801 剂量：4000 IU/kg

附图3 批号： 120801 剂量：2000 IU/kg

附图4 批号： 120801 剂量：1000 IU/kg

附图5 批号： 120801

附图6 批号： 120802

附图7 批号： 120803

附图8 批号：20121001 剂量：4.2mg/kg

2 实验材料

2.1 供试品

2.1.1 原料药 阿奇霉素；北京太阳药业有限公司；批号：120801，120802，120803；规格：原料，类白色结晶性粉末；贮藏：室温保存。

2.1.2 助溶剂：枸橼酸；生产厂家：湖南尔康制药有限公司；批号：20121001，20121005，20121007。

2.2 试剂及配制

2.2.1 苯巴比妥钠注射液 批号：0605111；单位：天津金耀化学氨基酸有限公司。

2.2.2 戊巴比妥钠 批号：WS20050411；生产单位：批号：国药集团化学试剂有限公司；称取戊巴比妥钠0.10g，加注射用水10ml配成1%溶液。

2.2.3 氯化钠注射液 批号：120412403；生产单位：石家庄四药有限公司。

2.2.4 肝素钠溶液 批号：120218；常州千红生化制药股份有限公司；规格：2ml：12500单位；用时加氯化钠注射液配成100 IU/ml的溶液。

2.3.5 组胺对照品溶液的配制 精密称取磷酸组胺对照品适量，按组胺计算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分装于适宜的容器内，4℃～8℃贮存，如无沉淀析出,可在3个月内使用。

2.3.6 对照品稀释液的配制 临用前，精密量取组胺对照品溶液适量，用氯化钠注射液配成每1ml中含组胺0.5μg的稀释液。

2.3.7 灭菌注射用水 批号：12060431 生产厂家：天津药业焦作制药有限公司。

2.3 主要仪器及用具

2.3.1 天平 型号BS 224S；生产单位：梅特勒－托利多（上海）有限公司。

2.3.2 多导生理记录仪 型号DC－120H；生产单位：日本光电工业株式会社。

2.3.3 其他用具 注射器、吸管、移液管、容量瓶、测量尺、三通开关、脱脂棉、线绳、手术器械。

2.4 实验动物 健康无伤、体重2kg以上的猫，雌雄均可，雌者无孕。

3 实验方法

3.1 剂量设计

3.1.1 阿奇霉素剂量设计 阿奇霉素为大环内酯类抗生素，属于原料药。我们根据《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧ B中降压物质检查设定限值[6]和“注射用阿奇霉素”的最大临床用量（0.5g/60kg），同时参照其制剂的质量标准（国家药品标准WS1-(X-296)-2003Z）制定试验剂量，选择系列剂量为8000单位/kg、4000单位/kg、2000单位/kg、1000单位/kg，进行试验。

3.1.2 枸橼酸剂量设计 枸橼酸为注射用阿奇霉素的助溶剂，属于辅料。根据“注射用阿奇霉素”制剂处方中阿奇霉素与枸橼酸的比例，可知枸橼酸的最大人用量为2.1mg/kg。我们按《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧ B中降压物质检查设定限值[6]，同时参照预试验剂量进行降压物质检查试验。选择系列剂量为4.2mg/kg、1.05mg/kg、0.5mg/kg进行试验。

附图9 批号：20121001 剂量：1.05mg/kg

附图10 批号：20121001 剂量：0.5mg/kg

附图11 批号：20121001

附图12 批号：20121005

附图13 批号：20121007

3.2 试验方法 取上述动物，选用1%戊巴比妥钠（1ml/kg）和10%苯巴比妥钠（1ml/kg），1∶1混合腹腔注射麻醉后，按照《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ G降压物质检查的方法进行检验，将阿奇霉素用枸橼酸稀释成4万单位/ml、2万单位/ml、1万单位/ml、5000单位/ml系列浓度（溶液中阿奇霉素和枸橼酸的比例与 “注射用阿奇霉素”制剂处方中阿奇霉素与枸橼酸的比例一致），注入体积0.2ml/kg 。将枸橼酸用注射用水稀释成4.2mg/ml、1.05mg/ml、0.5mg/ml系列浓度，注入体积1.0ml/kg。将供试品降压幅度与磷酸组胺对照品降压幅度进行比较。

4 实验结果与分析

4.1 阿奇霉素降压物质检查试验

4.1.1 预试试验结果 血压图谱见附图1～4。预试验结果表明：阿奇霉素在8000单位/kg和4000单位/kg的剂量下，猫血压的下降幅度均超过对照品所致的血压下降；在2000单位/kg的剂量下，引起的猫血压下降幅度均未超过对照品所致的血压下降；在1000单位/kg的剂量，猫血压下降幅度均未超过对照品所致的血压下降的一半。

4.1.2 正式试验结果 根据预试验的结果提示，阿奇霉素的剂量规定为：2000 IU/kg，对三批供试品进行降压物质检查试验，血压图谱见附图5～7。结果表明，将阿奇霉素的剂量规定为：2000 IU/kg进行降压物质检查，结果三批阿奇霉素引起猫血压下降幅度均低于对照品所致血压下降幅度，符合《中国药典》2010年版二部的有关规定。

4.1.3 分析 试验结果表明：阿奇霉素以2000单位/kg剂量，按照《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ G降压物质检查，结果3批样品降压幅度均未超过磷酸组胺对照品所致血压下降幅度，此剂量与“注射用阿奇霉素”的质量标准（国家药品标准WS1－(X－296)－2003Z）中规定的降压物质检查剂量相同。此剂量为“注射用阿奇霉素”最大人用量的1/4。

4.2 枸橼酸降压物质检查试验4.2.1 预试试验结果 预试血压图谱见附图8～10。预实验结果表明：枸橼酸在4.2mg/kg和1.05mg/kg的剂量下，引起的猫血压下降幅度均超过对照品所致的血压下降；在0.5mg/kg的剂量下，引起的猫血压下降幅度均未超过对照品所致的血压下降。

4.2.2 正式试验试验结果 将枸橼酸的剂量规定为：0.5mg/kg，对三批供试品进行降压物质检查试验，血压图谱见附图11～13。结果表明：枸橼酸在0.5mg/kg剂量下时，3批枸橼酸引起猫血压下降幅度均低于磷酸组胺对照品所致血压下降幅度。

4.2.3 分析 试验结果表明：枸橼酸以0.5mg/kg剂量，按照《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ G降压物质检查，结果3批样品降压幅度均未超过磷酸组胺对照品所致血压下降幅度，此剂量为“注射用阿奇霉素”在最大人用量时，所含枸橼酸量的1/4。

4 结论与讨论

4.1 结论 阿奇霉素（枸橼酸溶解）在2000IU/kg（1万IU/ml,0.2ml/kg）剂量时降压物质检查符合规定；枸橼酸 在0.5mg/kg（0.5mg/ml,1.0ml/kg）剂量时降压物质检查符合规定。可以初步确定阿奇霉素的降压作用主要是由枸橼酸助溶剂引起的。

4.2 讨论 阿奇霉素作为新一代大环内酯类抗生素，其抗菌效果明显，但由于生产过程不当易混入组胺、腐胺、尸胺及其它降压物质，需要对其进行降压物质检查。枸橼酸作为该原料药注射用的助溶剂，其酸性较强且本身是一种Ca2+螯合剂对血压有一定影响，因而也需要单独对其进行降压物质检查。

我们根据《中国药典》2010年版一部附录ⅩⅧ B中降压物质检查限值，参照其制剂的质量标准（国家药品标准WS1-(X-296)-2003）以及“注射用阿奇霉素”制剂处方中阿奇霉素与枸橼酸的比例制定试验剂量。通过预试及正式试验，分别对三批样品进行降压物质检查，确定出样品降压幅度小于组胺对照品所致血压下降幅度的剂量，阿奇霉素为2000IU/kg，此剂量与“注射用阿奇霉素” 国家标准中规定检查的剂量一致，相当人用阿奇霉素最大量的1/4。枸橼酸为0.5mg/kg，此剂量相当于枸橼酸最大人用量的1/4倍。

由于枸橼酸是一种钙离子螯合剂本身对血压有一定影响，而阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中几乎不溶。通过本次试验可以推断出：注射用阿奇霉素产生的降压反应主要是来自于枸橼酸辅料。由于枸橼酸自身具有引起血压下降的药理特性，辅料是否合理，剂量如何把握，都是有待解决的问题。尝试选择刺激性小，使用更安全，更稳定的助溶剂，降低药物的不良发应，以确保人民的用药安全。本试验为合理使用抗生素及助溶剂的选择问题提供借鉴。