HPLC法测定复方鱼腥草片中绿原酸的含量

天津市宝坻区药品检验所（301800）曹金枝 苏志刚

复方鱼腥草片是由鱼腥草等五位药材经提取制成的中药制剂，具有清热解毒的功效。临床用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎等症。收载于《中国药典》2010年版一部，标准中该制剂项下有TLC鉴别，黄芩苷含量测定项[1]。本文采用高效液相色法对其绿原酸的含量进行测定，结果满意。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT，试药：绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-201314）；阴性样品自制（药材均购自市场），复方鱼腥草片市售品为广东某制药有限公司生产（批号1311106，1309104，1307094），水为超纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex Luna C18,5μm，250×4.60mm;流动相：乙腈-0.05%磷酸（10∶90）；流速：1.0ml·min-1；检测波长：327nm；柱温：40℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量（10.10mg），置25ml量瓶中，加70%乙醇溶解至刻度，精取5ml置50ml量瓶，加70%乙醇溶解至刻度，摇匀（每1ml含40μg的绿原酸），即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品l0片，精密称定，研细，精密称取细粉约1g，置25ml量瓶，精密加入70%乙醇25ml，称定重量，超声波处理30min，放冷，补足减失的重量，摇匀、滤过，精取续滤液即得。

2.4 阴性对照溶液的制备及干扰试验 按处方及制剂工艺取除金银花外的其他各药物，制得阴性对照溶液。按上述色谱条件下测定，结果表明，阴性样品无干扰。供试品溶液色谱图中绿原酸的保留时间约26min，理论塔板数以绿原酸计算为7000。(见附图1～3)。

附表1 回收率试验数据表

附表2 样品测定结果

2.5 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品适量，加70%乙醇制成每毫升含40μg的溶液。精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25ul，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量(ul)为横坐标，绿原酸峰面积为纵坐标，得回归方程y=116327x+105065，r=0.9997，表明绿原酸在0.20～1.0μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。（见附图4）

附图1 A对照品溶液色谱图

附图2 B样品溶液色谱图

附图3 C阴性对照色谱图

附图4 绿原酸与峰面积的线性关系

2.6 精密度试验 取对照品溶液10μl，连续进样6次，分别测其峰面积，RSD为0.16%。

2.7 重复性试验 取同一批号样品5份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，含量RSD为0.61%。

2.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液于0、2、4、6、12、24h测定，RSD为1.2%,结果表明在24h内稳定。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，分别加入一定量的绿原酸对照品(0.088mg.ml-1)25ml按供试品溶液制备与测定项下同法定，结果平均回收率为99.54%，RSD：0.92%。（结果见附表1）2.10 样品的含量测定 取本品3个样品，按供试品项下方法试验，分别精密吸取上述对照品与供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以外标法计算样品中的绿原酸含量。（结果见附表2）

3 讨论

3.1 经测定，绿原酸在327nm处有最大吸收，本试验选择327nm为检测波长，保证了检测的灵敏度。

3.2 在供试品溶液制备时，以30%的乙醇，50%的乙醇，70%的乙醇为提取溶剂，分别超声提取30min。以70%的乙醇为溶剂，分别超声提取10、20、30分钟，以30分钟提取完全。因此，采用“2.3”制备供试品溶液。

3.3 曾试验改变流动相比例，以甲醇∶水∶冰醋酸(20∶80∶0.1)，乙腈∶0.05%磷酸（10∶90）为流动相，分别注入样品溶液，结果以本实验流动相比例最佳，绿原酸与相邻峰基线分离较好，分离度约为2.8。市售品与自制品含量差异较大，除与原料有关外，与其生产工艺也有关系。

3.4 本法操作简便，结果准确，可用于本制剂中绿原酸的含量测定。