苗药双肾草提取物对肾阳虚小鼠的影响△

陆翔恩，罗春丽,2*，赵致,2，周国化，李金玲,2，黄明进,2，罗夫来,2，刘红昌,2，王华磊,2

(1.贵州大学 农学院 中药材研究所,贵州 贵阳 550025;2.贵州省药用植物繁育与种植重点实验室，贵州 贵阳 550025)

贵州大学自然科学青年基金——双肾草生药学研究([2007]056)；贵州省发展和改革委员会高技术产业化示范工程项目(黔发改高技[2009]2805)；贵州省科技厅创新人才团队建设项目(黔科合人才团队[2010]4006)；贵州省科技厅重点实验室计划项目(黔科合计Z字[2010]4015)；贵州省药用植物繁育与种植人才基地(黔人领发[2013]15号)

*

罗春丽，副教授，研究方向： 苗药的开发与利用，中药材采收加工及炮制技术；E-mail： lilyluo310@126.com

苗药双肾草提取物对肾阳虚小鼠的影响△

陆翔恩1，罗春丽1,2*，赵致1,2，周国化1，李金玲1,2，黄明进1,2，罗夫来1,2，刘红昌1,2，王华磊1,2

(1.贵州大学 农学院 中药材研究所,贵州 贵阳 550025;2.贵州省药用植物繁育与种植重点实验室，贵州 贵阳 550025)

目的探究苗药双肾草水提液、醇提液对肾阳虚症小鼠主要性器官和免疫器官的影响。方法以小鼠主要性器官睾丸、前列腺、精囊、肾脏和免疫器官胸腺、脾脏等的湿重作为测定指标，测定各指标湿重体重比指数。结果双肾草水提组、55%醇提组、95%醇提组的体重增长率都高于模型组，低于空白对照组；水提组性器官精囊湿重体重比、睾丸湿重体重比、前列腺湿重体重比与模型组比较差异都有统计学意义，醇提各组也有不同程度的差异，免疫器官胸腺湿重、脾脏湿重体重比与模型组比较差异没有统计学意义。结论双肾草水提液对大剂量氢化可的松所致的小鼠主要性器官萎缩有明显改善作用，对免疫器官无显著影响。

双肾草；肾阳虚模型；氢化可的松；性器官；免疫器官

双肾草始载于《海南药用植物志》，为兰科植物角盘兰属条叶角盘兰Herminiumballeyi(Rolfe)Tang et Wang的块茎或全草[1]。味甘，性温，入肾经。具有温补肾阳的功能。用于肾虚阳痿遗泄，肾阳不足，精关不固，常治阳痿、遗精、滑泄、血不养筋、精不生髓及腰膝酸软等症[2]，民间常将其用水煎服或泡酒服[3]。双肾草是贵州苗族人民的习用药材之一[4-5]，故列入苗药。因其在民间用药效果显著，而且目前对苗药双肾草的药理研究还是空白，所以加强对苗药双肾草基础药理研究具有重要的科研意义和社会价值。通过用水和不同浓度的醇溶液为提取溶剂，建立小鼠肾阳虚模型，以小鼠主要性器官睾丸、前列腺、精囊、肾脏和免疫器官胸腺、脾脏等作为测定指标，测定湿重体重比等指标的变化情况，探究苗药双肾草对小鼠肾阳虚的影响。

1 材料及实验动物

1.1 试药

双肾草采自贵州省龙里县，经贵州大学中药材研究所鉴定为兰科植物角盘兰属条叶角盘兰Herminiumbulleyi(Rolfe)Tang et Wang的干燥根茎。氢化可的松[上海现代哈森(商丘)药业有限公司，批号：20110923]。

1.2 动物

SPF级，雄性KM小鼠，(24±2)g，许可证号：SCXK(渝)2012-0006，质量检测单位：重庆市动物质量检测中心。

2 方法

2.1 实验动物的准备和处理

昆明种小鼠适应环境3 d后，从中选择健康、精神状态好的72只。随机分成6组：空白对照组、模型组、水提组、55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组。每天每只进食5 g，蒸馏水足量。再适应性喂养3 d，分别称定体重后，标记备用。

2.2 供试液制备

氢化可的松现配现用，临用前用同等体积0.9%氯化钠稀释后使用。

双肾草水提液的制备：取双肾草干燥块茎，粉碎，过1号筛，称取20.0 g，用20倍量蒸馏水浸泡3 h，85 ℃回流提取2 h，同时收集挥发油成分及水提液，回收滤液，滤渣中加入12倍量蒸馏水再提取2 h。合并两次滤液，浓缩至60 mL。合并浓缩液和挥发成分，置于100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100 mL，相当于0.2 g生药·mL-1，放在4 ℃冰箱中备用。

双肾草不同醇提取液的制备：用95%、75%、55%乙醇溶液回流提取，滤液挥尽溶剂后，用蒸馏水定容到100 mL，相当于0.2 g生药·mL-1，4 ℃冰箱中备用。

2.3 模型的建立及给药

实验小鼠除空白对照组外，其余5组腹腔注射氢化可的松25 mg·kg-1·d-1。另外水提组、55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组分别灌胃4 g生药·kg-1·d-1(1mL含生药0.2 g)双肾草提取液。同时空白对照组腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液和灌胃等体积的蒸馏水，模型组灌胃等体积的蒸馏水。灌胃和注射同时进行，连续给药28 d后开始进行相关指标的测定。

2.4 双肾草不同提取液对小鼠体重增长率的影响

末次给药4 h后，称体重。以造模前小鼠体重均数为基数，计算各组小鼠用药后体重增长率。

2.5 双肾草不同提取液对小鼠性器官及免疫器官的影响

取小鼠睾丸、前列腺、精囊、肾脏、脾脏、胸腺，精密称定其湿重，计算睾丸、前列腺、精囊、肾脏、脾脏、胸腺等脏器指数，进行数据分析。

2.6 数据统计方法

数据采用Excel 2003和DPS 2012统计软件进行完全随机单因素试验统计分析。

3 结果

3.1 双肾草不同提取液对小鼠体重增长率的影响

组间比较F值为0.939。表1数据分析结果显示，除了75%醇提组外，空白对照组、水提组、55%醇提组、95%醇提组均明显高于模型组；模型组和75%醇提组体重增长率无显著变化。空白对照组、水提组、55%醇提组、95%醇提组体重增长率的差异无统计学意义。

3.2 双肾草不同提取液对小鼠主要性器官的影响

3.2.1 双肾草不同提取液对小鼠睾丸湿重的影响 组间比较F值为3.238。表2数据分析结果显示，55%醇提组、模型组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，其他组与空白对照组比较差异无统计学意义。各处理组与模型组的比较：水提组、75%醇提组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，55%醇提组、95%醇提组与模型组比较差异无统计学意义。另外从实验解剖结果发现，水提组和3个醇提处理组的附睾明显大于模型组和空白组。

3.2.2 双肾草不同提取液对小鼠前列腺湿重的影响 组间比较F值为5.784。表2数据分析结果显示，模型组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；95%醇提组、75%醇提组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；水提组、55%醇提组与空白对照组比较差异不具有统计学意义(P<0.01)。水提组、55%醇提组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；75%醇提组、95%醇提组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。从解剖直观结果上也证实了数据分析结果，给药组比模型组的前列腺普遍偏大。

3.2.3 双肾草不同提取液对小鼠精囊湿重的影响 组间比较F值为9.277。表2数据分析结果显示，模型组与空白对照组比较差异无统计学意义；水提组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。水提组、55%醇提组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)；95%醇提组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。从实验解剖结果可以看出，水提组和3个醇提处理组的精囊普遍大于模型组，水提组最突出。

3.2.4 双肾草不同提取液对小鼠肾脏湿重的影响 组间比较F值为2.593。表2数据分析结果显示，模型组与空白对照组比较差异无统计学意义；与空白组比较，所有处理和空白组差异都无统计学意义。55%醇提组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；75%醇提组与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 双肾草不同提取液对小鼠体重的影响

表2 双肾草不同提取液对小鼠睾丸、前列腺、精囊、肾脏湿重的影响

注：与空白组比较，★P<0.05，★★P<0.01；与模型组比较，☆P<0.05，☆☆P<0.01；下同

3.3 双肾草不同提取液对小鼠免疫器官的影响

3.3.1 双肾草不同提取液对小鼠脾脏湿重的影响 组间比较F值为3.41。表3数据分析结果显示，模型组、95%醇提组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；75%醇提组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；而水提组、55%醇提组与空白对照组比较差异无统计学意义。双肾草各提取组与模型组比较差异无统计学意义。实验结果显示用氢化可的松造小鼠肾阳虚模型可导致脾指数降低，而双肾草不同提取液对于此种情况无明显改善作用。

3.3.2 双肾草不同提取液对小鼠胸腺湿重的影响 组间比较F值为42.61。表3数据分析结果显示，模型组、水提组、55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；而水提组、55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组与模型组比较差异无统计学意义。从解剖的结果也证实了分析结果，空白对照组的胸腺明显大于模型组、水提组、55%醇提组、75%醇提组、95%醇提组。实验结果显示用氢化可的松造小鼠肾阳虚模型可导致胸腺指数明显降低，而双肾草不同提取液对于此种情况无明显改善作用。

表3 双肾草不同提取液对小鼠脾、胸腺湿重的影响

4 结论

实验结果表明，双肾草不同提取液对大剂量氢化可的松所致的肾阳虚小鼠主要性器官萎缩有明显的改善作用；对小鼠免疫器官无明显调节作用。这与文献报道氢化可的松模型是较为经典的肾阳虚证动物模型[6]，同时也是小鼠免疫抑制剂[7-9]一致。笔者对比水提液组及不同浓度醇提液组结果，显示水提组对前列腺和精囊的作用最为显著，其次是55%醇提组、75%醇提组，可推测其改善雄性小鼠性腺器官作用有效部位主要为极性成分，临床可考虑采用水提及低浓度乙醇提取为主。双肾草作为苗族人民补肾壮阳习用药材，具有良好开发前景，其相关药效及毒理学研究有待进一步深入开展。

[1] 刘育辰，邱德文.苗药双肾草研究概况[J].人参研究，2008，(2)：16-20.

[2] 吴征镒.新华本草纲要[M].第三册.上海：上海科学技术出版社，1990：601.

[3] 刘育辰，杨叶昆，李忠荣，等.苗药双肾草挥发油化学成分研究[J].中成药，2008，30(5)：712-715.

[4] 罗春丽，廖韦卫，牛治存，等.苗药双肾草生药鉴定研究[J].时珍国医国药，2011，22(1)：209-210.

[5] 邱德文，杜江.贵州十大苗药研究[M].北京：中医古籍出版社，2008：555.

[6] 陈小野.实用中医症候动物模型[M].北京.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993：100.

[7] 侯春兰，董蕾，张新雅，等.黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用[J].西安交通大学学报(医学版)，2006，27(5)：480-482.

[8] 李有贵，吕志强，钟石，等.桑椹素对氢化可的松致老龄阳虚模型小鼠的影响[J].蚕业科学，2008，34(3)：534-538.

[9] 马骏，任远，崔祝梅，等.红芪多糖对氢化可的松所致免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞亚群的影响[J].甘肃中医学院学报，2003，20(3)：18-19.

TheEffectofAqueousandEthanolExtractsofHerminiumballeyi(Rolfe)TangetWangtoKidneyDeficiency-YangMice

LUXiang’en1，LUOChunli1,2﹡，ZHAOZhi1,2，ZHOUGuohua1,2,LIJinling1,2，HUANGMingjin1,2，LUOFulai1,2，LIUHongchang1,2，WANGHualei1,2

(1.CollegeofAgriculture，InstituteofTraditionnalChineseMedicinalMaterials，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China;2.GuizhouLaboratoryforBreedingandPlantingEngineeringofTraditionnalChineseMedicinalMaterials，Guiyang550025，China)

Objective：This paper aims to explore the function of aqueous and ethanol extract liquid of Miao ethnomedicineHerminiumballeyi(Rolfe)Tanget Wang on the main sexual organs of experimental kidney-insufficient mice.MethodsThe measure indexes are based on the mice’s sexual organs：testicle，prostate，spermatophore，and the immune organs：thymus，spleen，etc.to measure the ratios of the natural weight of the indexes.ResultsThe weight growth rates of the aqueous extract group，the 55% ethanol extract group，95% ethanol extract are higher than the model group，lower than the bland contrast group.There are obvious differences of the aqueous extract group in the natural weight ratios of spermatophore，testicle and prostate compared to the model group；the ethanol extract groups also different in varying degrees.The natural weight ratios of the immune organs：thymus and spleen，do not have obvious difference compared to the modelgroup.ConclusionAqueous extract liquid ofH.balleyihas obvious effect on the mains sexual organ atrophy of small mice caused by high dose of hydrocortisone，but the effect to immune organs is not so obvious.

Herminiumballeyi(Rolfe)Tanget Wang；Deficiency of kidney-yang，Hydrocortisone；Sexual organ；Immune organ

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.008

2013-12-03)