神香草组织培养与快速繁殖技术

陈春伶+徐美隆+乔改霞+刘玉娟

摘要：以神香草幼嫩茎段为外植体，建立神香草的组织培养快速繁殖技术体系，结果表明：最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

关键词：神香草；组织培养；快速繁殖；腋芽诱导培养基；合成根培养基

中图分类号：Q943.1 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0060-02

神香草（Hyssop）为唇形科多年生半灌木，穗状花序细长，小花密集，唇形花冠呈管状，花紫色，有白色、玫红等品种。由于蜜汁丰富，极易招蜂引蝶，因此可作为园林绿化植物，种植在岩石园、草药园中，也可组合盆观赏。同时，神香草也是难得的蜜源、芳香油、药用植物。神香草具有抗衰老的作用，其所含的挥发油成分可解除支气管痉挛，神香草的叶、花均可入药，具有镇咳祛痰的功效^[1-3]。神香草既有观赏价值，又可作芳香蔬菜或辛香调料，经济价值很高。目前，神香草主要以播种、分株、扦插等方式进行繁殖，繁殖速度慢，繁殖效率低^[4]。笔者开展了神香草的组织培养与快速繁殖技术研究，旨在为加快神香草推广与应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

神香草当年生幼嫩茎段，2012年6月采自宁夏回族自治区银川金凤区银川植物园。

1.2 方法

1.2.1 外植体的准备

剪取生长健壮的幼嫩茎段，去掉基部的叶片，先在加有洗衣粉的洗涤液中用软毛刷将茎段轻轻刷洗干净，再用自来水冲洗1～2 h。在超净工作台上，将茎段剪成长2～3 cm的小段，先用70%乙醇消毒10 s，无菌水冲洗后，再用0.1% HgCl2溶液消毒2～5 min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干多余水分，将其接种在腋芽诱导培养基中。

1.2.2 腋芽的诱导

将灭菌后的外植体放到含有6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基中光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计腋芽诱导率。

1.2.3 不定芽的诱导

当外植体诱导出的腋芽长到0.5～1 cm 时，将其剪下，接种到不定芽诱导培养基中，培养基为含有6-BA（0、0.5、0.8、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基，光照培养，光照度为 2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度为23～27 ℃。30 d 后统计不定芽的诱导系数。

1.2.4 生根诱导

将长至2.5～3 cm高的不定芽剪下，接种到含有IBA（0、0.2、0.5、0.8 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的1/2MS培养基中，前1周弱光培养（不放灯下），1周后光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计不定芽的生根率。

1.2.5 生根苗的移栽

试管苗生根培养17～20 d，当生根苗根长达到0.5 cm时可出瓶移栽。先将培养瓶移至温室进行炼苗，自然条件下炼苗7 d，然后松开瓶盖炼苗1 d，最后打开瓶盖炼苗1 d。炼苗期间前期需适当遮光，确保光照强度为自然光的50%～60%。炼苗完成后取出小苗，洗净根部附着的培养基，将其移栽到消毒过的混合基质中（草炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩=1 ∶1 ∶1），温度控制在20～30 ℃，前10 d用小拱棚覆盖，相对湿度控制在85%以上，之后逐渐揭开小拱棚，降低湿度，移栽21 d后完全揭开小拱棚。移栽30 d时统计移栽成活率。

2 结果与分析

2.1 不同激素处理对神香草腋芽诱导的影响

从表1可以看出，不同激素组合对神香草的腋芽诱导效果不同，最适合的组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，在这个激素组合下，神香草腋芽平均诱导率达到90.2%，除去污染率20%，实际诱导率为72.1%。

2.2 不同激素处理对神香草不定芽诱导的影响

从表2可以看出，6-BA、NAA、IAA组合对神香草的不定芽分化有很好的促进作用。当培养基中只有6-BA与NAA组合时，分化系数最多只能达到3.0左右；当培养基中添加了IAA时，分化系数明显增加；在6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IAA 1.5 mg/L处理下，神香草不定芽的分化系数最高，达5.5，且不定芽生长情况很好，没有玻璃化现象出现。当6-BA浓度达1.0 mg/L，不定芽玻璃化现象较为严重；当6-BA浓度达2.0 mg/L时，玻璃化现象很严重，直接影响了不定芽分化（图1）。

养的植物激素包括生长素类、细胞分裂素类两大类。生长素类的主要作用是重新启动有丝分裂，使已停止分裂的植物细胞恢复分裂能力；细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂、扩大，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长。虽然添加植物激素对植物的组织培养具有关键作用，但是植物激素浓度的把握是难点，通常不同的植物所需的植物激素的种类或浓度不完全相同。本研究表明，最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.01 mg/L。

参考文献：

[1]裘惠霞，姚 雷. 神香草及提取物的抗衰老作用[J]. 上海交通大学学报，2005，23（1）：1-4.

[2]刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志（上）[M]. 乌鲁木齐：新疆人民出版社，1986：423-429.

[3]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：维吾尔药分册[M]. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：78.

[4]樊 璐. 神香草的引种栽培研究[J]. 中国野生植物资源，2005，24（3）：61-65.

摘要：以神香草幼嫩茎段为外植体，建立神香草的组织培养快速繁殖技术体系，结果表明：最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

关键词：神香草；组织培养；快速繁殖；腋芽诱导培养基；合成根培养基

中图分类号：Q943.1 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0060-02

神香草（Hyssop）为唇形科多年生半灌木，穗状花序细长，小花密集，唇形花冠呈管状，花紫色，有白色、玫红等品种。由于蜜汁丰富，极易招蜂引蝶，因此可作为园林绿化植物，种植在岩石园、草药园中，也可组合盆观赏。同时，神香草也是难得的蜜源、芳香油、药用植物。神香草具有抗衰老的作用，其所含的挥发油成分可解除支气管痉挛，神香草的叶、花均可入药，具有镇咳祛痰的功效^[1-3]。神香草既有观赏价值，又可作芳香蔬菜或辛香调料，经济价值很高。目前，神香草主要以播种、分株、扦插等方式进行繁殖，繁殖速度慢，繁殖效率低^[4]。笔者开展了神香草的组织培养与快速繁殖技术研究，旨在为加快神香草推广与应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

神香草当年生幼嫩茎段，2012年6月采自宁夏回族自治区银川金凤区银川植物园。

1.2 方法

1.2.1 外植体的准备

剪取生长健壮的幼嫩茎段，去掉基部的叶片，先在加有洗衣粉的洗涤液中用软毛刷将茎段轻轻刷洗干净，再用自来水冲洗1～2 h。在超净工作台上，将茎段剪成长2～3 cm的小段，先用70%乙醇消毒10 s，无菌水冲洗后，再用0.1% HgCl2溶液消毒2～5 min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干多余水分，将其接种在腋芽诱导培养基中。

1.2.2 腋芽的诱导

将灭菌后的外植体放到含有6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基中光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计腋芽诱导率。

1.2.3 不定芽的诱导

当外植体诱导出的腋芽长到0.5～1 cm 时，将其剪下，接种到不定芽诱导培养基中，培养基为含有6-BA（0、0.5、0.8、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基，光照培养，光照度为 2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度为23～27 ℃。30 d 后统计不定芽的诱导系数。

1.2.4 生根诱导

将长至2.5～3 cm高的不定芽剪下，接种到含有IBA（0、0.2、0.5、0.8 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的1/2MS培养基中，前1周弱光培养（不放灯下），1周后光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计不定芽的生根率。

1.2.5 生根苗的移栽

试管苗生根培养17～20 d，当生根苗根长达到0.5 cm时可出瓶移栽。先将培养瓶移至温室进行炼苗，自然条件下炼苗7 d，然后松开瓶盖炼苗1 d，最后打开瓶盖炼苗1 d。炼苗期间前期需适当遮光，确保光照强度为自然光的50%～60%。炼苗完成后取出小苗，洗净根部附着的培养基，将其移栽到消毒过的混合基质中（草炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩=1 ∶1 ∶1），温度控制在20～30 ℃，前10 d用小拱棚覆盖，相对湿度控制在85%以上，之后逐渐揭开小拱棚，降低湿度，移栽21 d后完全揭开小拱棚。移栽30 d时统计移栽成活率。

2 结果与分析

2.1 不同激素处理对神香草腋芽诱导的影响

从表1可以看出，不同激素组合对神香草的腋芽诱导效果不同，最适合的组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，在这个激素组合下，神香草腋芽平均诱导率达到90.2%，除去污染率20%，实际诱导率为72.1%。

2.2 不同激素处理对神香草不定芽诱导的影响

从表2可以看出，6-BA、NAA、IAA组合对神香草的不定芽分化有很好的促进作用。当培养基中只有6-BA与NAA组合时，分化系数最多只能达到3.0左右；当培养基中添加了IAA时，分化系数明显增加；在6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IAA 1.5 mg/L处理下，神香草不定芽的分化系数最高，达5.5，且不定芽生长情况很好，没有玻璃化现象出现。当6-BA浓度达1.0 mg/L，不定芽玻璃化现象较为严重；当6-BA浓度达2.0 mg/L时，玻璃化现象很严重，直接影响了不定芽分化（图1）。

养的植物激素包括生长素类、细胞分裂素类两大类。生长素类的主要作用是重新启动有丝分裂，使已停止分裂的植物细胞恢复分裂能力；细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂、扩大，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长。虽然添加植物激素对植物的组织培养具有关键作用，但是植物激素浓度的把握是难点，通常不同的植物所需的植物激素的种类或浓度不完全相同。本研究表明，最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.01 mg/L。

参考文献：

[1]裘惠霞，姚 雷. 神香草及提取物的抗衰老作用[J]. 上海交通大学学报，2005，23（1）：1-4.

[2]刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志（上）[M]. 乌鲁木齐：新疆人民出版社，1986：423-429.

[3]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：维吾尔药分册[M]. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：78.

[4]樊 璐. 神香草的引种栽培研究[J]. 中国野生植物资源，2005，24（3）：61-65.

摘要：以神香草幼嫩茎段为外植体，建立神香草的组织培养快速繁殖技术体系，结果表明：最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

关键词：神香草；组织培养；快速繁殖；腋芽诱导培养基；合成根培养基

中图分类号：Q943.1 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0060-02

神香草（Hyssop）为唇形科多年生半灌木，穗状花序细长，小花密集，唇形花冠呈管状，花紫色，有白色、玫红等品种。由于蜜汁丰富，极易招蜂引蝶，因此可作为园林绿化植物，种植在岩石园、草药园中，也可组合盆观赏。同时，神香草也是难得的蜜源、芳香油、药用植物。神香草具有抗衰老的作用，其所含的挥发油成分可解除支气管痉挛，神香草的叶、花均可入药，具有镇咳祛痰的功效^[1-3]。神香草既有观赏价值，又可作芳香蔬菜或辛香调料，经济价值很高。目前，神香草主要以播种、分株、扦插等方式进行繁殖，繁殖速度慢，繁殖效率低^[4]。笔者开展了神香草的组织培养与快速繁殖技术研究，旨在为加快神香草推广与应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

神香草当年生幼嫩茎段，2012年6月采自宁夏回族自治区银川金凤区银川植物园。

1.2 方法

1.2.1 外植体的准备

剪取生长健壮的幼嫩茎段，去掉基部的叶片，先在加有洗衣粉的洗涤液中用软毛刷将茎段轻轻刷洗干净，再用自来水冲洗1～2 h。在超净工作台上，将茎段剪成长2～3 cm的小段，先用70%乙醇消毒10 s，无菌水冲洗后，再用0.1% HgCl2溶液消毒2～5 min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干多余水分，将其接种在腋芽诱导培养基中。

1.2.2 腋芽的诱导

将灭菌后的外植体放到含有6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基中光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计腋芽诱导率。

1.2.3 不定芽的诱导

当外植体诱导出的腋芽长到0.5～1 cm 时，将其剪下，接种到不定芽诱导培养基中，培养基为含有6-BA（0、0.5、0.8、1.0、2.0 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的MS培养基，光照培养，光照度为 2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度为23～27 ℃。30 d 后统计不定芽的诱导系数。

1.2.4 生根诱导

将长至2.5～3 cm高的不定芽剪下，接种到含有IBA（0、0.2、0.5、0.8 mg/L）与NAA（0、0.01、0.05、0.1 mg/L）两两组合的1/2MS培养基中，前1周弱光培养（不放灯下），1周后光照培养，光照度为2 000～2 500 lx，光照时间为16 h/d，培养温度23～27 ℃。30 d后统计不定芽的生根率。

1.2.5 生根苗的移栽

试管苗生根培养17～20 d，当生根苗根长达到0.5 cm时可出瓶移栽。先将培养瓶移至温室进行炼苗，自然条件下炼苗7 d，然后松开瓶盖炼苗1 d，最后打开瓶盖炼苗1 d。炼苗期间前期需适当遮光，确保光照强度为自然光的50%～60%。炼苗完成后取出小苗，洗净根部附着的培养基，将其移栽到消毒过的混合基质中（草炭 ∶蛭石 ∶珍珠岩=1 ∶1 ∶1），温度控制在20～30 ℃，前10 d用小拱棚覆盖，相对湿度控制在85%以上，之后逐渐揭开小拱棚，降低湿度，移栽21 d后完全揭开小拱棚。移栽30 d时统计移栽成活率。

2 结果与分析

2.1 不同激素处理对神香草腋芽诱导的影响

从表1可以看出，不同激素组合对神香草的腋芽诱导效果不同，最适合的组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，在这个激素组合下，神香草腋芽平均诱导率达到90.2%，除去污染率20%，实际诱导率为72.1%。

2.2 不同激素处理对神香草不定芽诱导的影响

从表2可以看出，6-BA、NAA、IAA组合对神香草的不定芽分化有很好的促进作用。当培养基中只有6-BA与NAA组合时，分化系数最多只能达到3.0左右；当培养基中添加了IAA时，分化系数明显增加；在6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IAA 1.5 mg/L处理下，神香草不定芽的分化系数最高，达5.5，且不定芽生长情况很好，没有玻璃化现象出现。当6-BA浓度达1.0 mg/L，不定芽玻璃化现象较为严重；当6-BA浓度达2.0 mg/L时，玻璃化现象很严重，直接影响了不定芽分化（图1）。

养的植物激素包括生长素类、细胞分裂素类两大类。生长素类的主要作用是重新启动有丝分裂，使已停止分裂的植物细胞恢复分裂能力；细胞分裂素的主要作用是促进细胞的分裂、扩大，诱导芽分化，促进侧芽萌发生长。虽然添加植物激素对植物的组织培养具有关键作用，但是植物激素浓度的把握是难点，通常不同的植物所需的植物激素的种类或浓度不完全相同。本研究表明，最适合神香草腋芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合分化的培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+IAA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L，最适合生根的培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.01 mg/L。

参考文献：

[1]裘惠霞，姚 雷. 神香草及提取物的抗衰老作用[J]. 上海交通大学学报，2005，23（1）：1-4.

[2]刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志（上）[M]. 乌鲁木齐：新疆人民出版社，1986：423-429.

[3]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：维吾尔药分册[M]. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：78.

[4]樊 璐. 神香草的引种栽培研究[J]. 中国野生植物资源，2005，24（3）：61-65.