树兰的组织培养研究

王泽祺+李聆睿+张佳燕+杜瑶瑶+杜碧云+崔永一+夏国华

摘要：以树兰茎段为外植体，研究不同植物生长调节物质对其愈伤组织诱导、不定芽增殖及生根培养的影响。结果表明，茎段可同时诱导出愈伤组织、不定芽。愈伤组织诱导以NAA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.4 mg/L 效果最好，愈伤组织诱导率达24.44%；以NAA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L对不定芽的诱导效果最好；生根培养以1/2MS+NAA 1.0 mg/L+活性炭1.0 g/L+蔗糖25 g/L培养基最佳，生根率达93.06%。

关键词：树兰；组织培养；茎段；不定芽

中图分类号：S682.310.4+3；Q943.1 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0045-03

全球约有1 000多种树兰属（Epidendrum）植物。树兰属植物原产自厄瓜多尔，观赏价值很高，具有花色繁多、花期长等特点，可作为园林地被植物或室内盆栽植物^[1-2]。目前国内关于树兰的繁殖技术还不成熟，一定程度上制约了树兰产业的发展。采用组织培养技术可以大大缩短树兰的培育时间^[3-11]。目前关于树兰组织培养的研究报道较多^[12-25]。笔者采用正交试验研究树兰组织培养技术，快速生产树兰优良种苗，旨在为促进树兰产业化发展提供新途径。

1 材料与方法

1.1 材料

树兰无菌苗茎段由浙江农林大学林学基础试验教学中心提供。

1.2 方法

1.2.1 不定芽、愈伤组织诱导 以1/2MS为基本培养基，采用正交试验研究NAA、IBA、6-BA对树兰茎段不定芽及愈伤组织诱导的影响。NAA浓度分别设置为：0.5、1.0、1.5 mg/L；IBA浓度分别设置为：0.1、0.2、0.3 mg/L；6-BA浓度分别设置为：0.2、0.4、1.0 mg/L。将无菌苗茎段切成长约1.0 cm的小段接入诱导培养基中进行培养，每处理接种3瓶，每瓶接种10个茎段，60 d后观测不定芽、愈伤组织的诱导情况，统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率。计算公式如下：愈伤组织诱导率=出愈苗数/接种数×100%；不定芽诱导率=出芽苗数/接种数×100%。

1.2.2 不定芽的增殖培养 以1/2MS为基本培养基，采用正交试验方法研究NAA、IBA、6-BA对树兰茎段不定芽增殖的影响。NAA浓度分别设置为：0.1、0.2、0.5 mg/L；IBA浓度分别设置为：0.05、0.1、0.15 mg/L；6-BA浓度分别设置为：1、1.5、2 mg/L。将不定芽切成长1.0 cm的小段接入增殖培养基中进行培养，每处理接种3瓶，每瓶接种10个不定芽，60 d 后观测不定芽的增殖情况，统计不定芽增殖率。计算公式如下：不定芽增殖率=不定芽数/接种数×100%。

1.2.3 生根培养 以1/2MS为基本培养基，研究NAA对树兰茎段不定芽生根的影响，NAA浓度分别设置为：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L。每处理都添加1.0 g/L的活性炭，分割增殖培养得到的不定芽，随后接入生根培养基中，每处理接种3瓶，每瓶接种10个不定芽，培养60 d后统计生根数，计算生根率。计算公式如下：生根率=生根苗数/接种数×100%。

培养基均加入7 g/L琼脂粉、25 g/L蔗糖，pH值5.8。培养基装瓶后在121 ℃、0.14 MPa高温高压下灭菌20 min。接种材料后，在25 μmol/（m2·s）的光照下培养，每天光照时间13 h，培养温度25 ℃左右，50～60 d 后结束试验。

1.3 数据处理

采用PASW Statistics 18.0软件进行Duncan多重比较。

2 结果与分析

2.1 愈伤组织、不定芽的诱导培养

取长约1.0 cm的树兰茎段平放接种在诱导培养基上，30 d 后部分茎段的两端隆起，颜色由深变浅，出现愈伤组织，60 d后愈伤组织膨大，数量增加，呈浅绿色。由表1可知，不同浓度的NAA、IBA、6-BA组合对树兰茎段愈伤组织的诱导效果差异显著，以NAA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.4 mg/L诱导效果最好，愈伤组织诱导率达到24.44%。 NAA浓度对树兰茎段愈伤组织诱导影响最大，IBA、6-BA对愈伤组织诱导影响相差不大，相比NAA影响略小。

不定芽不仅能诱导出愈伤组织，也会诱导出不定芽（图1、图2），各处理的不定芽诱导率都比较高，且差距不大，最低达65.56%，以NAA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L 对不定芽的诱导效果最好（表2）。6-BA浓度对树兰茎段不定芽诱导率的影响最大，其次是IBA浓度，NAA浓度对不定芽诱导率的影响最小。

2.4 试管苗移栽

树兰为附生兰，选择松树皮作为移栽基质。组培苗在塑料大棚中进行炼苗，先密封放置2～3 d，再开盖1/3放置2～3 d，最后将盖子全部打开再放置2～3 d，整个过程用遮阳网作遮阴处理。随后将幼苗从瓶中取出并冲洗干净，在干燥的环境下放置12 h，然后进行移栽。先用热水浸泡松树皮，然后取出。移栽时在塑料花盆底下铺较大的树皮，上层用较细小的树皮，树兰移栽后浇透水，接下来3 d停止浇水，防止烂根，后期根据树皮的潮湿程度确定是否浇水，30 d后有新芽生长可确定成活，移栽成活率达90%以上（图5）。

3 结论与讨论

本研究表明，树兰部分茎段不仅诱导出了愈伤组织，同时大部分茎段还诱导出不定芽，愈伤组织诱导率最高达24.44%，不定芽诱导率最高达80%，这可能是由于树兰大部分诱导出不定芽，故影响了愈伤组织诱导率。NAA、IBA浓度较高不利于不定芽增殖。本试验愈伤组织诱导率均不高，最高仅有24.44%，不定芽增殖的效率相比诱导愈伤组织更高，说明树兰茎段在一定条件下诱导不定芽比诱导愈伤组织更容易实现，对于快速繁殖来说，直接诱导不定芽更有意义。通过茎段诱导不定芽，对其进行增殖培养，为大量繁殖获取不定芽提供了途径，相对于先诱导原球茎再通过原球茎分化获取不定芽的方法，本方法优化了获取不定芽的效率及数量，大大提高了生产效率^[26-27]。不定芽生命力较强，诱导方便，增殖效率高，速度快，培养方便，只须诱导生根即可移栽成活，故取不定芽作为增殖材料对批量化生产树兰有重要意义。移栽时根据树兰特性，参考其他学者的研究成果，选择透气性好的树皮作为基质，虽然移栽成活率较高，但是生长缓慢，冬季不易越冬，后期的栽培管理技术还有待进一步研究。

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