复方大血藤对丙酸睾酮所致小鼠前列腺增生的防治作用

倪阳，崔毓桂

（1.浙江省中医院 药剂科，浙江 杭州 310006；2.南京医科大学 医学科学部，江苏 南京 210029）

复方大血藤对丙酸睾酮所致小鼠前列腺增生的防治作用

倪阳1，崔毓桂2

（1.浙江省中医院 药剂科，浙江 杭州 310006；2.南京医科大学 医学科学部，江苏 南京 210029）

目的研究复方大血藤（complex of daxueteng，CDXT）对前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）的防治作用，并探讨其可能的作用机制。方法取昆明种小鼠60只随机分成6组，即对照组、模型组、CDXT低（0.225 g／kg）、中（0.45 g／kg）、高剂量组（0.9 g／kg）、阳性对照组（QLBETS，0.67 g／kg）。于昆明种雄性小鼠皮下注射丙酸睾酮溶液复制BPH动物模型，用CDXT进行治疗，观察该药对小鼠前列腺增生的防治作用及对前列腺组织形态的影响，并用免疫组化法检测前列腺组织中雄激素受体（AR）的表达。结果对丙酸睾酮所致小鼠BPH，CDXT可降低小鼠前列腺指数，抑制前列腺上皮组织增生、腺体增生及间质纤维组织增生，改善BPH小鼠前列腺细胞超微结构，并降低前列腺组织中AR的表达。结论CDXT对前列腺增生具有较好的防治作用，可抑制前列腺上皮组织增生、腺体增生及间质纤维组织增生，改善BPH小鼠前列腺细胞超微结构，其作用机制可能与降低前列腺组织中AR的表达有关。

复方大血藤；前列腺增生；雄激素受体

大量研究表明中医药在治疗前列腺增生方面具有独特优势，能有效缓解临床症状、改善患者生活质量［5-7］。本实验采用小鼠皮下注射丙酸睾酮建立小鼠BPH模型，观察CDXT对前列腺炎及BPH的作用，并探讨其可能的作用机制，为其临床应用提供药理学理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 60只昆明种雄性小鼠，体质量29～31 g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号 SCXK（黔）2002-0001。

1.2 药物与试剂 复方大血藤由贵州省贵定县胡三帖药业有限公司提供，每毫升药液含生药0.1 g；前列闭尔通栓（QLBETS）由黑龙江省济仁药业有限公司生产，国药准字：Z20020130；丙酸睾酮注射液由天津金耀氨基酸有限公司生产，国药准字：H12020531；兔抗鼠雄激素受体（AR）多克隆抗体、即用型链霉素亲和过氧化物酶复合物（SABC）免疫组化染色试剂盒、DAB显色剂、0.1 mol／L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.3）、0.01mol／L枸橼酸盐缓冲液（pH 7.3）由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.3 实验方法

1.3.1 分组、造模及给药方法：昆明种小鼠60只，随机分成6组，即对照组、模型组、CDXT低（0.225 g／kg）、中（0.45 g／kg）、高剂量组（0.9 g／kg）、阳性对照组（QLBETS，0.67 g／kg）。对照组于消毒部位皮下注射灭菌橄榄油（5 mL／kg），其余小鼠则皮下注射丙酸睾酮溶液（5mg／kg），连续皮下注射21 d，同时，对照组及模型组直肠给予等容量蒸馏水，各组按上述剂量分2次给药，即每天上午9点及下午1点直肠给药各1次，连续给药21 d。

1.3.2 观察指标：末次给药后24 h，称小鼠体质量，脱颈椎处死小鼠。取前列腺组织，电子天平称取前列腺湿重，计算其相应的前列腺指数：前腺指数＝前列腺重／体质量（mg／g）。

1.3.3 前列腺组织病理形态学检查：取相同部位的前列腺组织迅速放入10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋切片，HE染色。光镜下观察前列腺组织病理改变。

前列腺病理改变分级标准：①前列腺上皮组织增生、腺体增生：未出现该病变为阴性，出现该病变占组织块30%以下为轻度，占组织块30～50%为中度，占组织块50%以上为重度。②间质纤维组织增生：在间质内纤维组织数量增多，呈漩涡状或不规则排列，无该病变为阴性，出现该病变占组织块内腺体30%以下为轻度，占组织块内腺体30～50%为中度，占组织块内腺体50%以上为重度。

1.3.4 透视电镜检查：取前列腺组织约1 mm×1mm×1mm的组织块，迅速用25%戊二醛固定，在透射电镜下观察超微结构病理变化。

1.3.5 雄激素受体（AR）检测：前列腺组织常规固定，制成厚度为4μm的石蜡切片。用免疫组化染色（SABC法）检测前列腺组织中AR的表达，显微镜观察，胞核上出现棕黄色颗粒的即为阳性细胞，用PBS代替一抗做阴性对照。结果判断：AR阳性表达为组织细胞核呈棕色颗粒，显色结果采用BI-2000图像分析系统分析，每张切片取10个×400视野，分别计算100个间质和上皮细胞的阳性细胞数，取平均值，计算阳性表达颗粒所占百分率。根据着色强度、范围和分布分为4级［24］：细胞内外无淡黄及棕黄色颗粒，或阳性颗粒在5%以下为“－”；细胞内淡黄及棕黄色颗粒占整个切片的5%～30%为“＋”；细胞内淡黄及棕黄色颗粒占整个切片的30%～70%为“＋＋”；细胞内淡黄及棕黄色颗粒占整个切片的70%以上为“＋＋＋”。

2 结果

2.1 CDTX对小鼠前列腺指数的影响 与对照组相比，模型组大鼠前列腺指数增大，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组相比，CDTX高、中剂量组、QLBETS组均可明显降低前列腺指数，差异有统计学意义（P＜0.01，见表1）。

表1 CDTX对小鼠前列腺指数的影响Tab.1 The effect of CDTX on the coefficient of prostate in mice

2.2 CDTX对小鼠前列腺组织病理学的影响 光镜下观察正常组小鼠前列腺组织腺体结构异常，腺上皮呈单层柱状，腺腔内可见分泌物，腺腔未见扩张；模型组小鼠前列腺组织腺上皮增生、腺体增生明显，腺上皮呈复层或假复层柱状，间质增生明显，腺腔内可见大量分泌物，部分腺腔扩张；CDTX高、中给药组小鼠前列腺组织腺上皮、腺体增生程度明显下降，间质增生程度降低，腺腔内分泌物较模型组减少，少数腺腔扩张（见图 1）。

图1 光镜下各组小鼠前列腺组织病理学HE染色结果（×100）Fig.1 HE results of prostate tissues ofmouses in each group（×100）

2.3 各组小鼠前列腺病理改变相关检测指标统计结果模型组小鼠前列腺上皮及腺体增生明显，腺腔明显扩张，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。CDXT高、中剂量组、QLBETS组小鼠前列腺上皮增生、腺体增生、间质增生均有所减轻，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01，见表2）。

表2 CDXT对小鼠前列腺增生病理改变的影响［n（%）］Tab.2 The effect of CDTX on the pathological changes［n（%）］

2.4 透视电镜检查 正常组前列腺上皮细胞可见大量的线粒体和粗面内质网，丰富的粗面内质网轻度扩张成池，高尔基体丰富发达。模型组前列腺上皮细胞可见异常丰富的粗面内质网重度扩张，线粒体数目减少，可见部分线粒体扩张或呈空泡样改变，高尔基体数目亦减少。CDTX高剂量组前列腺上皮细胞粗面内质网轻度扩张，线粒体数目基本正常，仅见少量线粒体轻度扩张，少见空泡性改变，高尔基体数目基本正常（见图2）。

图2 电镜下各组小鼠前列腺组织HE染色结果（×2000）Fig.2 HE results of prostate tissues ofmouse in each group（×2000）

2.5 CDTX对小鼠前列腺组织中AR表达的影响 AR阳性信号呈棕黄色颗粒位于细胞核上。对照组小鼠前列腺组织有少量AR阳性细胞，分布较分散，且颜色浅淡；模型组小鼠前列腺组织AR阳性细胞呈强阳性表达，染色较深，分布较多；治疗组小鼠前列腺组织AR阳性细胞数较模型组减少，染色减轻，分布较模型组有所减少（见图3、表3）。

图3 各组小鼠前列腺组织AR表达（HE，×100）Fig.3 Prostate tissues ofmouse in themiddle CDXT dosage group（HE，×100）

表3 CDXT对小鼠前列腺增生前列腺组织中AR表达的影响Tab.3 Effect of CDTX on expression of AR of prostate tissue of benign prostatic hyperplasia in mice

3 讨论

前列腺增生是老年男性的常见病、多发病。关于BPH的发病机制，目前主要有以下几种学说：激素-内分泌学说、生长因子学说、上皮-间质细胞相互作用学说、细胞凋亡与基因调控学说等。然而作为一个多病因疾病，以上任何一种学说都不可能独立解释BPH的发病机制。大量研究证实，BPH的发生与雄激素及其受体有很大的关系［8-10］。

前列腺是一种雄激素依赖性器官，雄激素对前列腺的发生、发展、疾病有很大的影响。雄激素可通过刺激前列腺上皮和前列腺基质细胞增殖，从而促进前列腺增生。大量实验研究表明动物通过外源性给予雄激素后，可造成前列腺增生动物模型，其病理改变与临床病理改变相似，实验结果对于临床用药具有指导意义［11-12］。本实验参照唐望海等［13］，给小鼠皮下注射丙酸睾酮，实验结果显示CDXT可降低模型组小鼠前列腺指数，光镜下可见模型组小鼠前列腺腺体、腺上皮增生及间质纤维组织增生明显；CDXT高、中剂量组小鼠则可见其腺体、腺上皮增生及间质纤维组织增生程度明显下降；透射电镜下可见模型组小鼠前列腺上皮细胞线粒体空泡变，内质网水肿扩张，与正常组间存在明显差异；而高剂量组大鼠可见前列腺上皮细胞细胞器形态基本恢复正常。说明CDTX可改善BPH的病理组织结构，对小鼠前列腺细胞的超微结构也有明显的改善，对BPH有一定的防治作用。

雄激素是前列腺增生症不可缺少的条件，而雄激素生物学效应则是由细胞内受体（核受体）介导的，AR属于甾体激素核受体，是抑制雄激素依赖性转录因子，由睾丸间质细胞合成和分泌的睾酮（T）在5α-还原酶的作用下转化为双氢睾酮（DHT），后者与AR结合，调节基因促进细胞增殖和分化，从而引起前列腺增生。因此，雄激素发挥作用，与AR的表达有关［14-15］。实验结果显示模型组小鼠前列腺组织中AR表达明显增加（P＜0.01），治疗组小鼠前列腺组织中AR表达下降，表明在BPH发生过程中，AR表达增加可能促使前列腺增生；CDXT可降低BPH小鼠前列腺组织中AR的表达，从而减少雄激素与AR的结合，抑制前列腺增生。因此，降低前列腺组织中AR的表达可能是CDTX治疗BPH的一个作用机制。

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（编校：吴茜）

Effect of complex of daxueteng on benign prostatic hyperplasia m ice induced by testosterone propionate

NIYang1，CUIYu-gui2

（1.Department of Pharmacy，Zhejiang Province Traditional Chinese Medical Hospital，Hangzhou 310006，China；2.Division of Medical Sciences，Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China）

ObjectiveTo study the preventive and therapeutical effect of complex of daxueteng（CDXT）on benign prostatic hyperplasia，in ordev to investigate themechanism of action of CDXT.Methods60 Kunmingmiceswere randomly divided into 6 groups，control group，model group，CDXT low（0.225 g／kg），（0.45 g／kg），high dose group（0.9 g／kg）and positive control group（QLBETS，0.67 g／kg）.Benign prostatic hyperplasia animal models were constructed by hypodermic injecting testosterone propionate，and treated with CDXT.The preventive and therapeutical effect of CDXT and the changes of prostate tissueswere observed.And then，we detected the expression of AR in prostatic tissue by immuno-histochemistry.ResultsCDXT decreased the coefficient of prostate inmice with benign prostatic hyperplasia（BPH）induced by testosterone propionate，and inhibited tissue hyperplasia of prostatic glandular epithelium，corpus glandulae hyperplasia and interstitial fiber tissue hyperplasia in model mice，improved prostate cell ultranstructure and lowed the expression of androgen receptor（AR）in prostatitic tissue ofmodelmice.ConclusionCDXT has good effect of prevention and cure to BPH.It can inhibit tissue hyperplasia of prostatic glandular epithelium and corpus glandulae hyperplasia，and improve prostate cell ultranstructure in prostatic mice.Itsmechanism may be related to the decreased expression of AR in prostatic tissue.

complex of daxueteng；benign prostatic hyperplasia；androgen receptor

R246.3

A

1005－1678（2014）05－0012－04

前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）是临床的常见病，多发于老年男性患者，我国60～69岁年龄段老人中重度前列腺增生的患病率约为66%，70岁以上的患病率则高达70%［1］，严重影响患者的生活质量。临床表现为尿频、排尿困难等下尿道症状，如不及时治疗，严重者可导致尿潴留、肾功能损害。目前其病因及发病机制不清楚［2-3］，有研究表明，BPH的发生与雄激素及其受体相关，雄激素与其受体结合后，可促进前列腺细胞的增殖和分化［4］。

2011年国家自然科学基金（81170559）

倪阳，女，药师，硕士，研究方向：临床药学，E-mail：penny7999＠163.com。