PTEN、P27对HER2阳性乳腺癌新辅助化疗疗效的预测价值

陈天文 陶霖玉 梁亚男 王开昕 张好云 王红鲜

20%～30%的乳腺癌患者存在人表皮生长因子受体2(human epithelial growth factor receptor2,HER2)基因扩增或高表达。由于HER2阳性乳腺癌普遍表现为低分化、高增殖能力和高侵袭性，所以预后较差[1-2]，蒽环类或紫杉类药物是我国HER2阳性乳腺癌化疗中的常用选择。因此，探寻HER2阳性乳腺癌蒽环类化疗疗效预测指标，对于优化HER2阳性乳腺癌个体化治疗、提高其化疗受益具有重要的临床意义。本研究选取HER2受体信号转导通路中关键调控分子PTEN和P27蛋白为研究对象，研究分子表达与乳腺癌蒽环类新辅助化疗疗效的关系，探讨PTEN和P27对化疗疗效的预测价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

样本选择标准：①女性、单侧乳腺癌、无远处转移；②既往无乳腺癌或其它癌症病史；③空芯针穿刺活检证实为浸润性导管癌，保留有空芯针穿刺活检标本；④术前接受至少2个疗程FEC方案(氟尿嘧啶+表阿霉素+环磷酰胺)新辅助化疗，化疗后可手术，接受过曲妥珠单抗靶向治疗的患者除外；⑤专职的乳腺病理医师对HER2免疫组化切片进行逐一重新阅片，确认HER2的IHC结果为+++或者FISH阳性。

选取2007年5月至2012年9月我院甲状腺乳腺外科收治的113例HER2阳性乳腺癌患者，均符合样本选择标准且具有完备的临床病理资料。患者中位年龄49岁，38.9%的患者已绝经，原发癌灶大小为(5.5±2.6)cm，新辅助化疗前临床分期：Ⅱa期占26.0%，Ⅱb期 42.0%，Ⅲa 期24.0%，Ⅲb期8.0%。患者于新辅助化疗后8例接受保乳手术，55例为乳腺癌改良根治术，50例为乳腺癌根治术。

1.2 新辅助化疗方案

患者均接受了至少2个周期的FEC方案新辅助化疗。具体用药：表柔比星 80 mg/m2，第1天，静脉滴注；氟尿嘧啶 500 mg/m2，第1天，静脉滴注；环磷酰胺600 mg/m2，第1天，静脉推注，21 天为 1 个周期，化疗2～4个周期后休息1周行手术治疗。

1.3 新辅助化疗疗效评价标准

化疗前及化疗后均由副主任医师以上职称的临床医生体检和超声医师应用B 超测量肿瘤大小来评定疗效。疗效评价参照 WHO 制定的统一标准。疗效分为完全缓解(complete remission，CR)、部分缓解(partial remission，PR)、疾病稳定(stable disease，SD)和疾病进展(progressive disease，PD)。完全缓解又分为病理完全缓解(pathologic complete remission，pCR)，临床完全缓解(clinical complete remission，cCR) 。pCR 定义为原发肿瘤及区域淋巴结均无残留浸润性癌细胞，其中残留原位癌也包括在pCR 组。

1.4 实验试剂与免疫组化检测

鼠抗人PTEN和P27单抗免疫组化试剂盒购自上海麦莎生物科技有限公司。空芯针穿刺标本经4%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，脱蜡水化，3% H2O2室温孵育10 min以阻断内源性过氧化物酶；PBS冲洗，每次3 min，共3次，于pH 6.0 的柠檬酸缓冲液中微波修复15 min，室温冷却20 min；以非免疫动物血清封闭10 min，PBS冲洗，每次3 min，共3次，加一抗室温(24 ℃)孵育 1 h，PBS冲洗，每次3 min，共3次，加生物素标记的二抗，室温(24 ℃) 10 min，PBS 冲洗，用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素复合物孵育 10 min，PBS 冲洗，DAB染色，苏木精复染，脱水，封片，以PBS代替一抗作为阴性对照，用试剂盒已知阳性片作阳性对照。

1.5 免疫组化结果判定

所有切片均由一名专职乳腺癌免疫组化阅片的副主任医师盲法独立阅片完成，主要根据显微镜下肿瘤细胞着色(棕黄色着色视为阳性着色)的比例进行半定量法评估，均为400倍镜下观察10个视野下阳性细胞所占的比例，PTEN和P27均按以下标准评分：0～15%为阴性，≥15%为阳性。

1.6 统计学处理

应用 SPSS17.0软件进行统计分析，均数±标准差及 95%可信区间(CI)进行参数描述。计量资料采用秩和检验或t检验，计数资料采用χ2检验。以P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN和P27的表达

PTEN和P27在乳腺癌原发灶中的阳性表达率分别为62.8%(71/113)和70.8%(80/113),PTEN和P27共表达(PTEN及P27均阳性)率为44.2%(50/113)，共缺失(PTEN及P27均阴性)率为23.0%(26/113)。

2.2 新辅助化疗疗效评价

新辅助化疗后，临床部分缓解及病理完全缓解定义为临床有效，疾病稳定及疾病进展定义为临床无效。113 例患者中，临床部分缓解66例(58.4%)，病理完全缓解14例(12.4%)，临床有效患者共80例(70.8%)；疾病稳定30例(26.5%)，疾病进展3例(2.7%)，临床无效患者共33例(29.2%)。

2.3 PTEN和P27的表达与新辅助化疗疗效的关系

单因素分析患者年龄、月经状态、雌激素受体状态、PTEN、P27分子表达等因素与新辅助化疗疗效的关系。结果表明，单独PTEN或P27的表达与否不会影响蒽环类化疗的疗效，但PTEN与P27共表达的患者蒽环类化疗的临床有效率较高，与非共表达患者疗效有显著性差异(P=0.003)，见表1。多因素logistic回归分析表明，PTEN与P27共表达是HER2阳性乳腺癌蒽环类新辅助化疗疗效的独立预测指标(OR=3.411,95%CI=1.212～9.597,P=0.020)。

表1 单因素分析各因素与新辅助化疗疗效的关系(例，%)

3 讨论

蒽环类化疗在HER2阳性乳腺癌的辅助治疗中仍然占据着重要地位。国内学者蔡媛等[3]对蒽环类药物在乳腺癌新辅助化疗疗效预测中的价值进行了深入研究。研究揭示HER2阳性较HER2阴性的乳腺癌患者能从蒽环类新辅助化疗中获得更高的有效率。本研究从HER2受体信号转导通路出发，以接受蒽环类新辅助化疗的HER2阳性乳腺癌患者为研究对象，探索HER2受体通路关键调控分子表达与新辅助化疗疗效的关系，试图寻找蒽环类化疗的疗效预测指标，从而指导HER2阳性乳腺癌的个体化治疗，提高患者的化疗受益。

HER2/PI3K/Akt信号转导通路在HER2阳性乳腺癌患者中普遍处于活化状态，通路的高活性与癌细胞低分化、高增殖、易复发和远处转移等恶性生物学行为有关[4]。PTEN及P27蛋白均是此通路的负性调控蛋白，分别通过抑制PI3K及CDK2的活性，引起PIP3去磷酸化和CyclinD1的下调，从而抑制下游分子的一系列磷酸化过程及细胞周期的进展[5]。因此，PTEN及P27的表达对于通路活性的调控及HER2阳性乳腺癌细胞分化、凋亡及侵袭能力具有重要影响。一些体外研究表明，PTEN的缺失以及P27的下调与HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗耐药有关[5-7]，但PTEN及P27的表达在乳腺癌化疗疗效预测及预后中的价值目前尚未完全阐明。

本研究揭示，在局部晚期HER2阳性乳腺癌中，PTEN及P27阳性表达率分别为62.8%和70.8%,PTEN和P27共表达率为44.2%，共缺失率为23.0%，近1/5患者存在PTEN及P27蛋白的缺失。PTEN-P27共表达的患者新辅助化疗有效率较高(70.8%)，可能机制为：蒽环类药物通过抑制拓扑异构酶Ⅱ，减少癌细胞DNA复制，从而与PTEN及P27蛋白协同负性调控癌细胞周期进展和细胞凋亡。但具体机制有待体内体外研究来揭示。

总之，PTEN-P27共表达可以作为HER2阳性乳腺癌蒽环类新辅助化疗疗效的独立预测指标，但这一分子指标的临床指导价值还有待更大样本的前瞻性临床研究来证实。

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