马黛茶对高脂血症大鼠血液流变学及心肌ATP酶活性的影响

高红莉 刘昭纯 陈 强 曲晓兰

(泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

研究发现，马黛茶主要含有多酚类、生物碱、黄酮、皂苷等成分〔1～3〕，具有抗氧化〔4〕、抗炎〔5〕、减肥〔6〕等作用。高脂血症是动脉粥样硬化及心血管疾病的主要危险因素〔7〕。血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的升高是导致高脂血症的主要原因之一，与冠心病的发病率和死亡率呈正相关，因此控制血脂成为上述疾病防治的重要措施。近年来天然植物提取物对心血管疾病的预防和治疗作用多有报道，已有研究表明马黛茶具有一定的心血管保护功能〔8〕，但其抗心血管病变的机制尚不完全清楚。本实验探讨马黛茶对高脂血症心血管的作用及机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 SPF级雄性SD大鼠50只，体重180～220 g，山东中医药大学实验动物中心提供〔动物合格证号：SCXK(鲁)20080015〕。饲养于泰山医学院实验动物中心SPF 级环境中，室温(22 ± 2)℃，相对湿度(45 ± 15)％，光暗周期12 h，自由摄食和饮水，饲料饮水每日更新。按组别分盒喂养，每盒2只，连续喂养 8 w。

1.2药物 马黛茶为阿根廷原装进口(商品Yerba Mate，无梗马黛茶，阿根廷玛利亚公司，批号L280 7A3311)，本实验使用为同一批次马黛茶。以绿原酸为标准品，用Folin-Ciocalteu法〔9〕测得马黛茶干叶中马黛茶多酚的含量为340 mg/g。分别称取马黛茶碎干叶10 g，20 g，40 g，加入蒸馏水(95℃)1 000 ml冲泡20 min之后滤纸过滤，放置至室温备用，茶液浓度分别为10，20，40 g/ml(1％，2％，4％ w/v)。实验用茶为每天新鲜配制。马黛茶的大鼠日饮用量约为30 ml(体重按300 g计)，则马黛茶高、中、低剂量约为1 g/kg，2 g/kg和4 g/kg。

1.3试剂 血清TC试剂盒(批号100451)、甘油三酯(TG)试剂盒(批号100671)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(批号100381)、LDL-C试剂盒(批号100321)均购于中生北控生物科技股份有限公司。ATP 酶测定试剂盒(Na+-K+-ATPase 及Ca2+-Mg2+-ATPase，批号20110610)和考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒(批号20101027)由南京建成生物工程研究所提供。绿原酸标准品为中国食品药品检定研究院提供，其余试剂为国产分析纯。

1.4主要仪器 利霸XL-600全自动生化分析仪(德国)，SA-6000 全自动旋转式血流变分析仪(北京赛科希德公司)；T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用)，JA-1003A电子分析天平(上海精天电子仪器有限公司)及水浴锅、离心机等。

1.5实验方法 50只雄性SD大鼠，基础饲料适应性喂养1 w后，根据体重随机分为五组：正常对照组，高脂模型组，马黛茶高、中、低剂量处理组，每组10只。正常对照组进食基础饲料，其余四组进食高脂饲料(78.8％基础饲料添加1％胆固醇、0.2％胆酸钠、10％猪油、10％蛋黄粉)，连续8 w。第5周起马黛茶高剂量处理组大鼠饮水完全以4％浓度马黛茶水提液代替，马黛茶中剂量组则给予2％浓度的马黛茶液，马黛茶低剂量组给予1％马黛茶液，正常对照组和高脂模型组继续给予纯净水，连续处理4 w。每日测量大鼠24 h马黛茶/纯净水的饮用量，实验期间自由摄食，每周测体重及摄食量2次。

1.6观察指标 第8周末，大鼠禁食12 h后水合氯醛(350 mg/kg)麻醉，腹主动脉采血，其中5 ml全血肝素抗凝，全自动血流变检测仪测定全血黏度及血浆黏度。另3 ml全血分离血清，全自动生化仪酶学法测定TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量。取血后，取相同部位大鼠心肌，在冰水浴中匀浆，-20 ℃保存备用。按试剂盒说明，分别测定匀浆中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，用考马斯亮蓝比色法测定匀浆液中的蛋白含量。

1.7统计学处理 应用SPSS13.0软件进行单因素方差分析及t检验。

2 结 果

2.1马黛茶对高脂血症大鼠体重的影响 实验期间，各组大鼠生长正常，各组之间的摄食量无明显差别，马黛茶/水的日摄入量约为29 ml/只，各组之间无明显差别(P>0.05)。各组初始体重组间无明显差异(P>0.05)，而高脂模型组大鼠的终末体重明显高于正常对照组(P<0.05)，提示长期食用高脂食物容易引起体重过度增加。马黛茶高剂量组大鼠终末体重明显低于高脂模型组(P<0.05)，马黛茶中、低剂量组体重低于高脂模型组，但统计学比较无明显差异(P>0.05)。见表1。

2.2马黛茶对高脂血症大鼠血脂水平的影响 高脂模型组大鼠血清 TC、TG、LDL-C水平显著高于正常对照组，而HDL-C水平显著低于正常对照组(P<0.01)，提示造模成功。马黛茶高、中剂量处理组能明显降低血清TC和LDL-C水平(P<0.05)，高剂量组马黛茶能显著降低TG水平，升高HDL-C水平(P<0.05)。见表2。

表1 马黛茶对高脂血症大鼠体重的影响

表2 马黛茶对高脂血症大鼠血脂及血液流变学水平的影响

2.3马黛茶对高脂血症大鼠血液流变学的影响 高脂模型组全血黏度和血浆黏度均高于正常对照组(P<0.01)。与高脂模型组比较，马黛茶高、中、低剂量组均可降低大鼠血浆黏度(P<0.01或P<0.05)。马黛茶高剂量组可明显降低高脂血症大鼠全血黏度中切和低切(P<0.05)，马黛茶中剂量组可降低高脂血症大鼠全血黏度低切(P<0.05)，而马黛茶高、中、低剂量组对全血黏度高切没有明显作用(P>0.05)，提示马黛茶有较好的改善高脂血症大鼠血液黏度的特性。见表2。

2.4马黛茶对高脂血症大鼠心肌ATP酶影响 高脂模型组大鼠心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低(P<0.01)。与高脂模型组比较，高剂量马黛茶处理组大鼠的心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均显著升高(P<0.05)，中剂量马黛茶组的心肌Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著升高(P<0.05)，提示马黛茶可保护高脂血症大鼠的心肌功能。见表3。

表3 马黛茶对高脂血症大鼠心肌ATP酶的影响

3 讨 论

高脂血症被认为是心血管疾病发病的一种重要危险因素〔10〕。目前，心血管疾病引发的死亡率一直居高不下，而患有心血管疾病的患者通常伴有TC和LDL-C水平的升高〔11〕，因此控制血脂成为防治心血管疾病的关键环节。

血液流变学指标的异常变化是心脑血管疾病出现临床症状之前的早期表现，其发生的机制与血脂水平的变化密切相关〔12〕。高脂血症时，TC、TG增加，细胞膜胆固醇含量增加，可致膜流动性降低，通过影响红细胞膜脂质双层和骨架蛋白，使红细胞膜微黏度增高，变形能力下降，纤维蛋白溶酶活性和血小板聚集功能异常改变，致使血液流速降低，微循环减慢，导致组织缺血缺氧及代谢紊乱。同时血液流变学异常又可成为高脂血症的一种中间环节或促进因子，加重和促进高脂血症所致的病理改变和临床症状。心肌Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶对维持心肌细胞正常的离子梯度、维持心肌细胞正常收缩功能具有重要的作用〔13〕。心肌功能受损时，Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性下降。

本实验表明，高脂饮食是导致高脂血症的重要因素，同时发现高脂血症大鼠血液黏度增高，心肌ATP酶活性降低。而马黛茶可降低血脂，改善血液流变性，提高心肌ATP酶活性，从而降低动脉粥样硬化的风险，具有保护心血管系统的功能，其药理作用的详细机制，有待深入研究。

4 参考文献

1Bastos DHM,Fornari AC,Queiroz YS,etal.Bioactive compounds content of Chimarrao infusions related to the moisture of Yerba Mate(Ilex paraguariensis)leaves〔J〕.Braz Arch Bio Tech,2006;49(3):399-404.

2Heck CI,de Mejia EG.Yerba Mate Tea(Ilex paraguariensis),a comprehensive review on chemistry，health implications，and technological considerations〔J〕.J Food Sci,2007;72(9):R138-R51.

3Bastos DHM,Saldanha LA,Catharino RR,etal.Phenolic antioxidants identified by ESI-MS fromYerba Mate(Ilex paraguariensis)and green tea(Camelia sinensis)extracts〔J〕.Molecules,2007;12(3):423-32.

4Schinella GR,Troiani G,Davila V,etal.Antioxidant effects of an aqueous extract of Ilex paraguariensis〔J〕.Biochem Biophys Res Comm,2000;269(2):357-60.

5Burris KP,Davidson PM,Stewart CN,etal.Antimicrobial activity of Yerba Mate(ilex paraguariensis)aqueous extracts against Escherichia coli O157:h7 and Staphylococcus aureus〔J〕.J Food Sci,2011;76(6):M456-62.

6Arçari DP,Bartchewsky W,dos Santos TW,etal.Antiobesity effects of yerba mate extract(Ilex paraguariensis)in high-fat diet-induced obese mice〔J〕.Obesity,2009;17(12):2127-33.

7Beller GA.Coronary heart disease in the first 30 years of the 21st century：challenges and opportunities:the 33rd Annual James B.Herrick Lecture of the Council on Clinical Cardiology of the American Heart Association〔J〕.Circulation,2001;103(20):2428-35.

8Schinella G,Fantinelli JC,Mosca SM.Cardioprotective effects of Ilex paraguariensis extract:evidence for a nitricoxide-dependentmechanism〔J〕.Clin Nutr,2005;24(3):360-6.

9Singleton VL,Orthofer R,Lamuela-Raventos RM.Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent〔J〕.Metlaods Enzymol,1999;299:152-78.

10Tarride JE,Lim M,Des Meules M,etal.A review of the cost of cardiovascular disease〔J〕.Can J Cardiol,2009;25(6):195-202.

11Dembowski E,Davidson MH.A review of lipid management in primary and secondary prevention〔J〕.J Cardiopulm Rehabil Prev,2009;29(1):2-12.

12Jeong YJ,Choi YJ,Kwon HM,etal.Differential inhibition of oxidized LDL-induced apoptosis in human endothelial cells treated with different flavonoids〔J〕.Br J Nutr,2005;93(5):581-91.

13Okafor C,Liao R,Perreault-Micale C,etal.Mg-ATPase and Ca2+activated myosin ATPase activity in ventricular myofibrils from non-failing and diseased human hearts-effects of calcium sensitizing agents MCI-154，DPI 201-106，and caffeine〔J〕.Mol Cell Biochem,2003;245(1-2):77-89.