莪术油对小鼠糜烂性食管炎的治疗作用

谷 颖 刘春英 夏 允 夏运梅

遵义医学院1(563003) 大连大学附属中山医院消化内科2

胃食管反流病是指胃内容物反流入食管引起不适症状和(或)并发症的一种疾病，其中内镜下可见食管远端黏膜破损者称为糜烂性食管炎(erosive esophagitis, EE)。EE的临床治疗以抑酸药物为主，亦可采取联合用药，如质子泵抑制剂(PPI)联合促动力药，可加用磷酸铝、蒙脱石等胃肠黏膜保护剂，关于食管黏膜保护剂及其在EE中应用的研究报道甚少。寻求安全、有效的特异性食管黏膜保护剂是临床实践中需要解决的问题之一。本研究通过建立小鼠急性EE模型，并分别予食管灌注莪术油、磷酸铝、蒙脱石三种黏膜保护剂，比较三者对EE的治疗作用。

材料与方法

一、实验动物和主要试剂

健康雄性昆明小鼠100只，8周龄，体质量25～30 g ，购自大连医科大学实验动物中心，许可证号SCXK(辽)2008-0002。0.9% NaCl注射液、5%葡萄糖注射液(青岛华仁药业股份有限公司)，0.35%稀盐酸(山东临沂永安试剂化验室)，磷酸铝凝胶(韩国保宁制药株式会社，注册证号H20130422)，蒙脱石散[博福-益普生(天津)制药有限公司，国药准字H20000690]，莪术油注射液(苏州长征-欣凯制药有限公司，国药准字H20057098)。

二、方法

1. EE模型建立和分组[1-2]：小鼠适应性饲养5 d，随机选取20只作为正常对照组，予食管灌注0.9% NaCl溶液 0.1 mL/10 g，其余80只予食管灌注0.35%稀盐酸0.1 mL/10 g，均为每3 d一次，共3次。造模结束后随机选取正常对照组2只、造模组8只小鼠处死，肉眼观察食管大体标本。 正常对照组食管呈淡红色，弹性好；造模组食管黏膜充血，可见点状、条状充血红肿，食管胃连接处可见白色糜烂(见图1)，提示以低浓度稀盐酸反复灌注食管黏膜制备急性EE模型获得成功。

将剩余72只造模组小鼠随机分为模型组和磷酸铝组、蒙脱石组、莪术油组三组治疗组，每组18只，于相同条件下饲养。造模成功3 d后，正常对照组和模型组小鼠予食管灌注0.9% NaCl溶液0.1 mL/10 g，三组治疗组分别予食管灌注磷酸铝(磷酸铝凝胶20 g+0.9% NaCl溶液30 mL) 0.1 mL/10 g、蒙脱石(蒙脱石散3 g+0.9% NaCl溶液50 mL) 0.1 mL/10 g、莪术油(莪术油注射液1 mL+5%葡萄糖溶液10 mL)0.1 mL/10 g，均为1次/d，连续14 d。治疗结束后处死动物，行后续检查。

A：正常对照组；B：造模组

2. 食管黏膜大体标本观察和组织病理学检查：自咽喉部切取食管，纵行剖开，0.9% NaCl溶液冲洗，肉眼观察食管黏膜大体表现。食管标本4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察食管黏膜组织学表现。大体和组织学分级参考2003年中华医学会消化内镜学分会制订的反流性食管炎诊断及治疗指南[3]。大体分级：正常，0级；充血，点状或条状糜烂，无融合，Ⅰ级；点状或条状糜烂，局限性融合，Ⅱ级；病变广泛，糜烂融合成片，Ⅲ级。组织学分级：鳞状上皮增生，少量炎性细胞浸润，轻度；黏膜层和黏膜下层炎性细胞浸润，黏膜下层毛细血管扩张，黏膜轻度糜烂，中度；黏膜层和黏膜下层大量炎性细胞浸润，黏膜下大片出血，黏膜糜烂明显，未侵及食管肌层，重度。大体分级0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级和组织学分级正常、轻度、中度、重度分别记0、1、2、3分，每组均分为该组大体和组织学评分。

三、统计学分析

结 果

一、一般情况

正常对照组小鼠均存活，小鼠活泼，无厌食现象，排便正常。造模组小鼠造模后出现精神萎靡、动作迟缓、饮食减少、体质量下降等表现。模型组4只小鼠死亡，存活率为77.8%；三组治疗组死亡动物均有所减少，磷酸铝组、蒙脱石组各有2只小鼠死亡，存活率为88.9%，莪术油组1只小鼠死亡，存活率为94.4%，死因分别为严重反流所致的窒息和肠穿孔、出血，其中3只死亡小鼠解剖见肠壁变薄，肠胀气明显。

二、食管黏膜大体和组织病理学表现

肉眼观察正常对照组食管黏膜光滑，弹性好，大体分级均为0级。模型组食管黏膜均可见充血、红肿以及点状或条状糜烂，3只小鼠病变广泛，融合成片；磷酸铝组4只小鼠食管黏膜光滑，12只可见黏膜红肿、点状充血，其中5只病变局限性融合；蒙脱石组5只小鼠食管黏膜基本愈合，11只可见点状或条状充血、糜烂，其中6只病变有融合；莪术油组10只小鼠食管黏膜光滑，弹性好，7只可见点状充血、红肿，其中仅1只病变有融合。

光学显微镜下，正常对照组食管黏膜表面为非角化的复层鳞状上皮(见图2A)；模型组食管黏膜复层鳞状上皮增生明显，细胞核变圆、变大，黏膜糜烂，黏膜和黏膜下充血，大片出血，大量炎性细胞浸润，未侵及食管肌层(见图2B)；磷酸铝组、蒙脱石组食管黏膜复层鳞状上皮增生，固有层向上皮层延伸，黏膜下毛细血管扩张充血，有炎性细胞浸润(见图2C、2D)；莪术油组食管黏膜鳞状上皮局限性轻度增生(见图2E)，黏膜下有少量炎性细胞，偶有毛细血管扩张充血(见图2F)。

表1 各组食管黏膜大体、组织学分级和评分比较

A：正常对照组；B：模型组；C：磷酸铝组；D：蒙脱石组；E、F：莪术油组

5组间食管黏膜大体和组织学评分总体差异有统计学意义(P<0.05)。进一步作两两比较，模型组与正常对照组间、磷酸铝组、蒙脱石组与正常对照组、模型组间、莪术油组与模型组、磷酸铝组、蒙脱石组间差异均有统计学意义(P<0.05)，莪术油组与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

讨 论

莪术油是从姜科植物蓬莪术、广西莪术、温郁金干燥根茎中提取的挥发油，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等多种生物学效应[4]。目前莪术油在临床上广泛应用于宫颈糜烂的治疗，其机制与莪术油抗感染、去腐生肌、促进损伤黏膜修复再生的作用有关，可使柱状上皮脱落，鳞状上皮再生、覆盖病变区上皮缺损处，加速糜烂面愈合[5]。莪术油既然可用于促进宫颈鳞状上皮再生、修复黏膜糜烂，推测对于同为鳞状上皮的食管黏膜，莪术油亦可能发挥保护作用。为此， 本

研究以低浓度稀盐酸反复灌注食管黏膜制备小鼠急性EE模型，观察并比较了莪术油与两种常用胃肠黏膜保护剂磷酸铝、蒙脱石对食管黏膜的保护作用。

研究结果显示，正常对照组小鼠食管黏膜大体和组织病理学表现均无异常，大体和组织学评分为0分；模型组小鼠食管黏膜损伤严重，大体和组织学评分达(2.21±0.43)分；而三组治疗组小鼠的食管黏膜损伤均较模型组显著减轻，部分小鼠黏膜基本愈合，以莪术油组愈合率最高，大体和组织学评分显著低于模型组、磷酸铝组和蒙脱石组，与正常对照组相比差异无统计学意义。上述结果表明莪术油用于治疗急性EE效果良好，优于磷酸铝和蒙脱石。

综上所述，本研究结果显示莪术油对小鼠急性EE模型有明显治疗作用，效果优于常用黏膜保护剂磷酸铝和蒙脱石，在动物实验水平证实莪术油是一种有效的食管黏膜保护剂，为临床研发特异性食管黏膜保护剂提供了实验依据。

1 刘春丽，赖克方，陈如冲，等. 盐酸灌注豚鼠食管反流性疾病模型的建立[J]. 中国病理生理杂志, 2006, 22 (3): 620-621,624.

2 张瑞丽，单保恩，田子强，等. 食管灌注Lugol’s碘溶液对小鼠食管和胃黏膜的损伤作用[J]. 癌变·畸变·突变, 2006, 19 (2): 129-132.

3 中华医学会消化内镜学分会. 反流性食管炎诊断及治疗指南(2003年)[J]. 中华消化内镜杂志, 2004, 21 (4): 221-222.

4 吴海霞，孙志明，王勤. 莪术油的药理学研究及临床应用研究进展概况[J]. 中国医药导刊, 2011, 13 (1): 79-83.

5 刘岩，李玲玲，孙虹，等. 三种妇科栓剂对大鼠宫颈糜烂模型的治疗作用及抗菌活性的比较[J]. 中国比较医学杂志, 2008, 18 (8): 18-20.