制何首乌颗粒的质量标准研究

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1.亳州职业技术学院，安徽 亳州 236800；2.毕节学院，贵州 毕节 551700

制何首乌颗粒的质量标准研究

王庆1薛天乐1*叶敏2

1.亳州职业技术学院，安徽 亳州 236800；2.毕节学院，贵州 毕节 551700

目的对制何首乌颗粒进行质量控制考察。方法采用TLC法对处方中的制何首乌进行定性鉴别, 用HPLC法测定制何首乌中二苯乙烯苷的含量。结果在TLC 图谱中能检出制何首乌，二苯乙烯苷在0.0296g/L-0.148g/L的范围内线性良好(r=0.9942), 平均加样回收率为99.63%，RSD 为1.1%。结论所建立方法简便可行, 重现性好, 可用于制何首乌颗粒的质量控制。

制何首乌颗粒； 薄层色谱法； 二苯乙烯苷； 高效液相色谱法

制何首乌为何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的炮制加工品，具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨，化浊降脂的作用[1]。现代药理研究表明制何首乌及其所含的二苯乙烯苷具有提高免疫力、抗衰老、保肝及防治动脉硬化等作用，临床上主要用于防治高脂血症、高血压病、慢性气管炎、糖尿病等疾病，疗效显著[2]。本实验采用醇提法提取制何首乌,配以适宜辅料制备制何首乌颗粒,并对其进行质量控制考察。

1 仪器与试药

1.1 仪器 WMK-02型电热恒温干燥箱，由天津市泰斯特仪器有限公司生产；HB-8数显恒温水浴锅，由上海梅香仪器有限公司生产；SHZ-C型循环水式多用真空泵，由巩义市予华仪器有限责任公司生产；RE-52A型旋转蒸发仪，由上海雅荣生化设备仪器有限公司生产；FA1004型电子分析天平，由上海分析仪器总厂生产；751G型紫外可见分光光度计，由上海分析仪器总厂生产；Waters2695型高效液相色谱仪，由美国Waters公司生产。

1.2 试药 制何首乌，购自亳州和义堂中药材公司；二苯乙烯苷标准品，由中国食品药品检定研究院提供。

2 方法与结果

2.1 制首乌颗粒剂的制备 取制何首乌药材，粉碎，加7倍重量40%的乙醇，于70℃的条件下，提取2次，每次80分钟，过滤，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.30的稠膏。按照重量份配比，取制何首乌稠膏10份、甘露醇10份、乳糖29.9份、安赛蜜0.1份混合均匀，加入95%的乙醇制软材，软材用16目筛网筛制粒，干燥，10目和65目网筛筛选，分装即得。

2.2 定性鉴别 取制何首乌颗粒剂适量置烧瓶中，加乙醇20ml,加热回流50min,滤过,滤液浓缩至1ml作为供试品溶液；处方除制何首乌外按制何首乌颗粒剂的工艺制备颗粒,按上述供试品溶液制备方法,制备阴性对照液；取何首乌对照药材适量,置烧瓶中，加乙醇20ml,加热回流50min,制成溶液,滤过,滤液浓缩至1ml作为对照药材溶液。分别取上述3种溶液各5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,醋酸乙酯-丙酮-水-甲苯(6.5∶5.5∶1.2∶0.7)混合溶液的上层溶液为展开剂展开,取出,晾干。365nm紫外灯下检识,供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上出现相同颜色的斑点,阴性对照无干扰，结果见图1。

1 缺制何首乌药材的阴性对照；2 制何首乌对照药材；3 制何首乌颗粒

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：HypersilC18(150mm ×4.6mm)；流动相：乙腈-水(25∶75)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：320nm；进样量：10μl。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取二苯乙烯苷对照品5.92mg，置于10ml容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度，得对照品母液。精密吸取二苯乙烯苷对照品母液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，定容于10ml量瓶中，分别得到0.0296g/l、0.0592g/l、0.0888g/l、0.1184g/l、0.1480g/l的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密称定何首乌颗粒剂1.16g，精密加入稀乙醇25ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.3.4 阴性对照品的制备 按制何首乌颗粒剂处方及制备工艺制备不含制何首乌的阴性样品,精密称取阴性对照品1.02克，按“2.3.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3.5 干扰实验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液10μl在“2.3.1”项条件下记录色谱峰的流出曲线,结果见图2、3、4,阴性对照溶液在与二苯乙烯苷保留时间相同位置无色谱峰出现,表明对测定结果无影响。

图2 对照品溶液的高效液相色谱图

图3 供试品溶液的高效液相色谱图

图4 阴性对照溶液的高效液相色谱图

2.3.6 线性关系考察 精密吸0.0296g/L、0.0592g/L、0.0888g/L、0.1184g/L、0.1480g/L的对照品溶液各10μl，按“2.3.1”项下色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标,对照品溶液浓度(X)为横坐标进行线性回归,结果如下。

图5 对照品溶液的线性回归

2.3.7 精密度试验 精密吸取0.0888g/L的对照品溶10μl，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积，结果见表1，RSD=1.1%(n=6),表明精密度良好。

表1 精密度实验

2.3.8 稳定性试验 取0.0592g/L的对照品溶液,分别于0、2、4、6、8、12、24、48 h按上述色谱条件进样10μl,测定峰面积。结果见表2，RSD=0.92%(n=8)，表明供试品溶液在48h内稳定。

2.3.9 重现性试验 精密称取同一批何首乌颗粒剂,按“2.3.3”项下方法平行制备6份供试品溶液,按上述色谱条件进样测算。结果见表3，RSD=1.7%，表明重现性良好。

表2 稳定性实验

表3 重现性实验

2.3.10 加样回收率试验 精取已知含量的样品溶液6份,每份10ml,精密称定,分别精密加入二苯乙烯苷对照品适量,照“2.3.3”项下方法制成供试品溶液,按上述色谱条件,计算加样回收率,结果见表4，RSD%=1.1%(n=6)，表明加样回收率良好。

2.3.11 样品含量测定 按制首乌颗粒的处方及制备工艺制备5批制首乌颗粒，分别按“2.3.3”项下方法制成供试品溶液，进样量10μl，按上述色谱条件,测算二苯乙烯苷的含量，结果见表5。

表4 加样回收率试验

表5 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 笔者曾以二苯乙烯苷的含量为指标对制何首乌进行了提取方法的考察，结果发现其最佳提取工艺为：7倍量40%的乙醇，70℃，提取2次，每次80min[3]。笔者也曾通过实验对制何首乌颗粒剂的辅料及其配比进行筛选，结果表明：何首乌稠膏∶甘露醇∶乳糖∶安赛蜜=10份∶10份∶29.9份∶0.1份为最优的辅料筛选方案。

3.2 采用上述方法对制何首乌颗粒剂进行薄层色谱鉴别, 重现性好, 阴性实验无干扰, 经多批样品鉴别, 均能检出与对照相同的斑点，可以作为制何首乌颗粒的定性鉴别标准。HPLC 法测定制何首乌颗粒中二苯乙烯苷的含量, 无杂质峰干扰,方法准确、重现性好,可用于制何首乌颗粒剂的含量测定。

[1]国家药典委员会. 中国药典[S]. 中国医药科技出版社. 2010年版(一部).

[2]吴晓青. 何首乌化学成分与药理活性的研究进展[J]. 时珍国医国药,2009(01):146-147.

[3]薛天乐，王庆，叶敏.何首乌二苯乙烯苷的提取工艺研究[J].中国民族民间医药，2013，22(213)：39-41.

TheQualityStandardofPreparedfleeceflowerrootgranule

WANG Qing1XUE Tian-le1*YE Min2

1.Bozhou Vocational and Technical College,Anhui Province,Haozhou 236800,China;2.Bijie University,Guizhou Province,Bijie 551700,China

ObjectiveInvestigate Prepared fleeceflower root granule quality.MethodsPrepared fleeceflower root was identified by TLC, and content of 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was determined by HPLC.ResultsPrepared fleeceflower root could be identified by TLC. 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside showed a good linear relationship at a range of 0.0296g/L-0.148g/L (r=0.9942), the average recovery was 99.63%, and RSD was 1.1%.ConclusionThe established method is simple, feasible and reproducible and it can be used as the quality standards for Prepared fleeceflower root granule.

Prepared fleeceflower root Granule; TLC; 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilb-ene-2-O-β-D-glucoside; H PLC

安徽省教育厅自然科学基金项目，编号：KJ2012B112。

王庆(1982-)，女，讲师，安徽亳州人，硕士，研究方向: 天然药物活性成分分离纯化。

薛天乐(1981-)，男，讲师，安徽亳州人，硕士， 研究方向: 中药活性成分提取分离，E-mail: 84181713@ qq.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)08-0027-03

2014.02.10)