镇咳宁颗粒的质量标准研究

贵阳济仁堂药业有限公司，贵州 贵阳 550005

镇咳宁颗粒的质量标准研究

李兴勇

贵阳济仁堂药业有限公司，贵州 贵阳 550005

目的建立镇咳宁颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别镇咳宁颗粒中甘草、盐酸麻黄碱；采用高效液相色谱法对制剂中麻酸麻黄碱进行定量分析，色谱条件为：Hypersil C18(250×4.6 mm，5 μm)柱，甲醇-(0.1%磷酸溶液︰0.1三乙胺溶液(1︰1))9︰91为流动相，流速为1.0 ml/min，柱温40 ℃，检测波长210 nm，进样量为10 μL。结果薄层色谱法能对甘草、盐酸麻黄碱进行专属性定性分析，盐酸麻黄碱进样量在77.0～616.0 ng(r=0.9999)范围内与峰面积积分值线性关系良好；平均加样回收率为100.75%，RSD为0.46%(n=6)。结论所建立的方法能准确地进行定性和定量检测，方法快速简便、准确可靠、重复性好，可有效的控制镇咳宁颗粒的质量。

镇咳宁颗粒；甘草；盐酸麻黄碱；TLC；HPLC

镇咳宁颗粒是由卫生部药品标准《中成药成方制剂》第三册收载的“镇咳宁糖浆”(WS3-B-0665-91)[1]改剂型而成，由甘草流浸膏、桔梗、盐酸麻黄碱、桑白皮组成，具有镇咳祛痰的功效。临床用于伤风咳嗽，支气管炎，哮喘等。而哮喘、咳嗽多于夜间发作，其原因主要由于支气管平滑遇冷或者受到刺激而引起支气管收缩痉挛诱发哮喘、咳嗽。针对这一原因，笔者对方中药味进行了研究。麻黄碱为拟肾上腺素药，能松弛支气管平滑肌、收缩血管，有显著的中枢兴奋作用，临床主要用于治疗习惯性支气管哮喘和预防哮喘的发作，有很好的疗效。但盐酸麻黄碱过量，对高血压、心率失常的患者有较大的危害，需严格控制其用量，故对其进行定量测定的研究控制具有重要意义。本研究在原“镇咳宁糖浆”的基础上，经过多次摸索，增订了方中甘草的薄层色谱鉴别，同时采用高效液相色谱法对方中盐酸麻黄碱进行了定量分析研究，获得了满意效果，为建立完整的质量标准提供了快速、简便、准确的定性定量方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-15C高效液相色谱仪(日本岛津公司)；WML-2010威玛龙色谱数据工作站(南宁市威玛龙色谱科技有限公司)；UV-1750型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；AUW120D型电子天平(日本岛津公司)；KQ-500VDB双频数控超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。

1.2 试药 甘草对照药材(批号：120904-200914)，盐酸麻黄碱对照品(批号:171214-201007，供含量测定用以99.7%计，使用前需经105 ℃干燥3 h)，均由中国食品药品检定研究院提供；镇咳宁颗粒(批号：20121101，20121102，20121103，20121104，20121201，20121202，20121203，20121204，20121205，20121206)，由贵阳济仁堂药业有限公司研制；甲醇(美国迪马公司生产)；乙腈(美国迪马公司生产)为色谱纯，水为二次重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 盐酸麻黄碱的薄层色谱鉴别 取本品6g，加水10ml和氨试液5ml使溶解，溶液用乙醚-三氯甲烷-乙醇(25∶8∶2.5)混合液30ml振摇提取，静置，分取上层液，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加盐酸1ml，混匀)1ml，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶3.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，在105℃加热约5 min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。见图1。

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2.2 甘草的薄层色谱鉴别 取本品8g，加甲醇30ml浸渍2h，并时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材2g，加稀乙醇30ml浸渍4h，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。见图2。

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3 盐酸麻黄碱的含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18(250×4.6 mm，5 μm)柱；柱温：40 ℃；流动相：甲醇-(0.1%磷酸溶液︰0.1三乙胺溶液(1︰1))(9︰91)；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；理论板数：按盐酸麻黄碱峰计应不低于3000。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品15.40 mg，置100 ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得盐酸麻黄碱对照品贮备液(每1 ml含0.1540 mg)精密吸取20ml对照品贮备液，置100ml容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 ml含30.80 μg盐酸麻黄碱)。

3.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物适量，混匀，研细，取约0.5g，精密称定，加入稀乙醇25 ml，称定重量，回流提取30 min，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

3.2.3 阴性对照溶液的制备 取处方中除盐酸麻黄碱外的其他药材，按0.1倍处方剂量及制法和工艺要求制备缺盐酸麻黄碱的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制成缺盐酸麻黄碱阴性对照溶液。

3.3 方法专属性考察 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入HPLC仪，测定，见色谱图3。由图3可见，阴性对照在与对照品相同保留时间(约为9.5 min)的位置上，无相应的色谱峰出现，表明除盐酸麻黄碱外的其他药材和辅料对测定无干扰，且盐酸麻黄碱与相邻杂质峰能够很好的分度，分度度大于1.5。

图3 镇咳宁颗粒HPLC图

3.4 线性关系的考察 精密吸盐酸麻黄碱对照品贮备液(0.1540 mg/ml)7份，分别制成7.70，15.40，23.10，30.80，38.50，46.20，61.60μg/ml的溶液，精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述“3.1”项下的色谱条件进行试验，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，盐酸麻黄碱回归方程为Y = 1 240.859 X-52.156(r=0.999 9)，拟合为过原点的回归方程为Y=1 240.732 X(r=0.9999)。结果表明，盐酸麻黄碱在进样量为77.0～616.0ng范围内具有良好的线性关系。

3.5 精密度试验 精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液(浓度为30.80μg/ml)适量，每次10μl，重复进样测定 6 次，记录峰面积，平均峰面积为380 355，峰面积RSD为0.26%，表明具有良好的精密度。

3.6 稳定性试验 取样品适量，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，室温下分别在0，1，2，4，6，8，10h各取10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，结果峰面积平均值为376 144，峰面积的RSD为0.47%，表明在室温下10h内供试品溶液具有良好的稳定性。

3.7 重复性试验 取样品适量，混匀，研细，精密称取样品6份，按“3.2.2” 项下方法制备供试品溶液进行测定，各取10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，计算盐酸麻黄碱的含量，结果样品中盐酸麻黄碱的平均含量为1.815 mg/g，RSD为0.52%，说明有良好的重复性。

3.8 加样回收率试验 取样品(含量为1.815 mg/g)适量，混匀，研细，取6份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液15ml(浓度为30.80μg/ml)，稀乙醇10ml，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

3.9 样品含量测定 按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中盐酸麻黄碱的含量，10批样品中盐酸麻黄碱测定结果见表2。

表1 镇咳宁颗粒中盐酸麻黄碱加样回收率

表2 镇咳宁颗粒中盐酸麻黄碱含量

4 讨论

参照文献[2]，笔者对样品提取方法进行了研究，分别以甲醇、50%甲醇、0.01%盐酸甲醇、乙醇、稀乙醇为提取溶剂进行试验。结果表明，以稀乙醇作为溶剂时峰形好、柱效高、回收率好，故选用稀乙醇作为提取溶剂。

镇咳宁颗粒薄层色谱鉴别研究表明，本研究的TLC方法可用于镇咳宁颗粒的TLC鉴别；HPLC方法学考察结果表明，本法操作较为简单，准确性、重复性好，可作为镇咳宁颗粒的含量测定方法。

从10批样品的含量测定结果可以看，盐酸麻黄碱的平均含量均在标示量的90.0%～110.0%之间，表明本法测定具有较好的准确性。

[1]卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准中成药成方制剂(第3册)．WS3-B-0665-91[S]．北京：化学工业出版社，1998：203.

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：300，485，489，495，496，504.

李兴勇(1974-)，男，学士，研究方向：中药质量标准的研究。

R284.1

A

1007-8517(2014)08-0021-03

2014.01.24)