上皮性卵巢癌组织中IMP1的表达

李留霞，李冰熠，李秀芳，张兰兰，王凯娟，张建营

1)郑州大学第一附属医院妇产科 郑州 450052 2)郑州大学公共卫生学院 郑州 450001 3)河南省肿瘤流行病学重点实验室 郑州 450052

上皮性卵巢癌组织中IMP1的表达

李留霞1)△，李冰熠1)，李秀芳1)，张兰兰1)，王凯娟2,3)，张建营2,3)

1)郑州大学第一附属医院妇产科 郑州 450052 2)郑州大学公共卫生学院 郑州 450001 3)河南省肿瘤流行病学重点实验室 郑州 450052

△女，1962年11月生，博士，主任医师，教授，研究方向：妇科肿瘤及妇科内分泌，E-mail：llxia698@163.com

上皮性卵巢癌；IMP1

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其发病率在女性生殖道恶性肿瘤中仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，但其病死率居女性生殖道恶性肿瘤首位[1],其发生发展机制至今未明。胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白1(insulin-like growth factorⅡmRNA-binding protein 1，IMP1)是一种胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)mRNA结合蛋白，研究[2]证明IGF-Ⅱ mRNA在卵巢癌组织中高表达，但是关于IGF-Ⅱ的转录翻译调控子之一的IMP1在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌发生发展关系的研究甚少。该研究旨在探讨IMP1在卵巢癌组织中的表达情况，进一步了解卵巢癌的发生发展机制。

1 材料与方法

1．1材料收集2011年9月至2013年3月郑州大学第一附属医院及郑州大学第三附属医院手术切除的标本95例，经病理学证实为上皮性卵巢癌组织47例，患者年龄29～76岁；卵巢上皮性良性肿瘤组织28例，患者年龄15～71岁；正常卵巢上皮组织20例，患者年龄21～65岁。正常卵巢上皮组织来源于因子宫疾病行子宫加双附件切除术的患者。上皮性卵巢癌患者中，浆液性囊腺癌32例,黏液性囊腺癌10例，子宫内膜样癌5例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期29例；低分化27例，中高分化20例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移28例；有腹水27例，无腹水20例；术前均未行放疗和化疗。卵巢上皮性良性肿瘤中，浆液性囊腺瘤17例，黏液性囊腺瘤11例。所有标本离体后迅速切为两份，一份置液氮速冻后转-80 ℃冰箱保存，用于RT-PCR检测；另一份经体积分数10%中性甲醛固定, 石蜡包埋, 连续3 μm厚切片，用于免疫组化染色。

1.3 3种卵巢组织中IMP1mRNA的检测采用Trizol(购自Transgene公司)抽提RNA，应用Promega试剂盒逆转录RNA。引物序列：IMP1，正义，5’-ACTTTCCATGCTGGGACTT-3’,反义，5’-GCTGAT GCCTCTGTTCCCTCT-3’，片段大小334 bp；内参β-actin，正义，5’-GGGAAATCGTGCGTGACATT-3’, 反义，5’-GGACTCGTCATACTCCTGCTTG-3’，片段大小478 bp。扩增条件：94 ℃变性2 min；94 ℃变性30 s, 55 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，共35个循环；72 ℃总延伸6 min。20 g/L琼脂糖凝胶电泳，电压4～10 V/cm。EB染色，在紫外线投射仪下观察电泳条带，用D-140图像记录分析系统进行分析，拍照。IMP1 mRNA的相对表达量以IMP1条带和β-actin条带灰度值的比值表示。

1.4统计学处理采用SPSS 17.0进行统计学处理。不同组织间IMP1蛋白阳性率的比较及IMP1蛋白阳性表达率与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系采用χ2检验；不同组织间IMP1 mNRA相对表达量的比较采用单因素方差分析，两两比较采用Bonferroni法；上皮性卵巢癌石蜡切片中IMP1蛋白表达量与相应新鲜组织中IMP1 mRNA表达量的相关性采用Spearman秩相关进行分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 3种卵巢组织中IMP1蛋白的表达上皮性卵巢癌、卵巢上皮性良性肿瘤及正常卵巢上皮组织中IMP1蛋白阳性表达率分别为85.1%(40/47)、32.1%(9/28)、10.0%(2/20)，差异有统计学意义；且上皮性卵巢癌组织中IMP1蛋白阳性表达率高于卵巢上皮性良性肿瘤及正常卵巢上皮组织。见图1和表1。

图1 3种卵巢组织中IMP1蛋白表达情况(SP，×400)

表1 3种卵巢组织中IMP1蛋白表达情况的比较

*:3种组织间比较，χ2=39.239，P<0.001；#：与上皮性卵巢癌组织比较，P<0.001。

2.2IMP1蛋白表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系上皮性卵巢癌组织中IMP1蛋白表达与FIGO分期和组织学分级有关，而与淋巴结转移及腹水无关，见表2。

表2 IMP1蛋白表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系 例(%)

*:校正χ2检验。

2.3 3种卵巢组织中IMP1mRNA的表达95例卵巢组织标本中均可见约478 bp的扩增条带(β-actin)，同时可见约334 bp的扩增条带(IMP1)。见图2和表3。

图2 3种卵巢组织中IMP1 mRNA的表达情况

1：正常卵巢上皮组织；2：卵巢上皮性良性肿瘤组织；3：上皮性卵巢癌组织。

表3 3种卵巢组织中IMP1 mRNA相对表达量比较

F=990.674，P<0.001；*：与上皮性卵巢癌组织比较，P<0.001。

2.4IMP1蛋白与mRNA表达的关系相关分析结果显示，上皮性卵巢癌组织中IMP1蛋白与mRNA表达呈正相关(rS=0.869,P<0.001)。

3 讨论

IMPs主要在早期胚胎发育阶段和妊娠中期表达，参与结合、转运和稳定IGF-Ⅱ基因的胚胎亚型[4]，被认为是癌胚蛋白，常常在许多肿瘤组织中过度表达。文献[5-8]报道，结肠直肠癌、骨癌、软组织肉瘤、乳癌及非小细胞肺癌组织中均有IMPs表达。前期该课题组[9]用ELISA方法检测正常人和上皮性卵巢癌患者血液中IMP1蛋白含量，发现差异有统计学意义，且在上皮性卵巢癌患者血清中IMP1蛋白阳性率为16.7%。该研究发现上皮性卵巢癌组织IMP1蛋白阳性表达率为85.1%，卵巢上皮性良性肿瘤组织IMP1蛋白阳性表达率为32.1%，正常卵巢上皮组织IMP1蛋白阳性表达率为10.0%，上皮性卵巢癌组织高于后两者。该结果与前期研究结果存在差异可能是由于IMP1蛋白的分泌机制所致。

IMPs属于RNA结合蛋白家族成员,有3个类似蛋白(IMP1、IMP2和IMP3),能够高度特异地结合编码IGF-Ⅱ的mRNA,参与IGF-ⅡmRNA的定位及其稳定性、反转录和翻译的调节[10-11]。该研究发现IMP1蛋白在不同FIGO分期和组织学分级的上皮性卵巢癌组织中的表达差异有统计学意义，而IMP1蛋白表达与有无淋巴结转移及有无腹水无关。这些结果均提示IMP1表达可能与上皮性卵巢癌的发生发展有关，但具体机制有待进一步研究。

基于RT-PCR技术该研究发现，IMP1 mRNA在47例上皮性卵巢癌组织中的相对表达量高于28例卵巢上皮性良性肿瘤和20例正常卵巢上皮组织的相对表达量，而后2种组织中IMP1 mRNA相对表达量差异无统计学意义，与免疫组化结果相一致。相关性分析结果显示，免疫组化染色结果与RT-PCR结果呈正相关，即IMP1的蛋白水平与mRNA水平呈正相关。综上所述，研究卵巢癌组织中IMP1的表达有望为卵巢癌的诊断、转移及预后判定、靶向治疗提供一个新的分子生物学标记物。

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(2013-08-22收稿 责任编辑姜春霞)

Expression of IMP1 in epithelial ovarian cancer tissue

LILiuxia1),LIBingyi1),LIXiufang1),ZHANGLanlan1),WANGKaijuan2,3),ZHANGJianying2,3)

1)DepartmentofGynecologyandObstetrics,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)CollegeofPublicHealth,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001 3)CancerEpidemiologyKeyLaboratoryinHenanProvince,Zhengzhou450052

epithelial ovarian cancer; IMP1

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.03.023

R737.31