EDTA依赖性假性血小板减少症检测方法的探讨

马力?张静?韩志梅?曲东霞

【摘要】 目的 探讨乙二胺四乙酸（EDTA）依赖性假性血小板减少症几种检测方法的可靠性。方法 对10例EDTA依赖性假性血小板减少症病例采用XE-2100血液分析仪， 观察不同条件（不加抗凝剂、EDTA、枸橼酸钠、肝素锂）在不同时间段测定血小板的变化。结果 5 min即刻检测， 各种抗凝剂血小板数值均正常。30 min后EDTA抗凝标本血小板数值明显下降。部分枸橼酸钠、肝素锂标本血小板数值也有不同程度下降。结论 对EDTA依赖性假性血小板减少症可采取仪器旁即刻检测方法， 而枸橼酸钠、肝素锂检测方法不可取。

【关键词】 乙二胺四乙酸；血小板计数；血细胞分析；假性血小板减少症

假性血小板减少是指血小板发生体外聚集而致血小板减少。由于血小板聚集成团， 使血细胞自动计数仪无法分辨血小板团与单个血小板， 致使检测的血小板计数较实际血小板数值低出许多， 导致临床误诊误治。据报道， 假性血小板减少与抗凝剂乙二胺四乙酸（EDTA）有明显相关性[1]。因为国际血液学标准化委员会（ICSH）1993年确定EDTA为血细胞分析的首选抗凝剂并广泛应用， 因此EDTA依赖性假性血小板减少症（ethylenediaminetetraacetic acid-dependent pseudo-thrombocytopenia， EDTA-PTCP）发生率明显增加。本研究旨在探讨不同抗凝剂不同时间段条件下， 纠正EDTA-PTCP血小板检测的最佳方法， 为减少该病误诊误治做出一点贡献。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 患者标本来源于本院2005～2014年门诊与住院患者诊断EDTA依赖性假性血小板减少症的10例患者。其中男6例， 女4例， 发病年龄：20～75岁， 其中4例为门诊常规体检就诊， 3例原发性高血压， 1例冠心病， 1例左输尿管结石， 1例左肾癌术后。10例患者均为常规血细胞分析检查发现血小板明显减少， 但均无临床出血倾向。白细胞、血红蛋白、凝血指标均正常。经即刻采血及外周血涂片检查明确诊断为EDTA-PTCP。

1. 2 仪器与试剂 Sysmex-2100型全自动血液分析仪及配套试剂和质控品。

1. 3 方法 采患者静脉血， 分别置于无任何抗凝剂管、EDTA抗凝管、枸橼酸钠抗凝管、肝素锂抗凝管内， 分别于5、30、60、120 min用Sysmex-2100型分析仪检测血小板数值。

1. 4 血涂片 EDTA抗凝血（30、120 min）、患者新鲜耳血涂片各1张自然晾干， 用瑞-姬氏染色， 显微镜观察血小板聚集情况。

2 结果

2. 1 不同时间， 4种方法测定血小板计数 5 min即刻仪器旁检测：不加抗凝剂组， EDTA组， 枸橼酸钠组， 肝素锂组均显示血小板计数正常。（30～120 min） EDTA组血小板均减少， 并且随时间延长血小板减少程度增加。例4在枸橼酸钠、肝素锂组30、60、120 min均出现血小板减少， 例6在枸橼酸钠组（60、120 min）出现血小板减少。例10在肝素锂组（30、60、120 min）出现血小板减少。见表1。

2. 2 血涂片检查 所有病例新鲜耳血涂片均可见血小板散在或小簇状易见。EDTA 30 min时涂片可见体尾部血小板簇状聚集， 片尾部呈小片状聚集。120 min后涂片血小板在片尾部均可见大片状聚集。

3 讨论

文献报道EDTA-PTCP的发病率约为0.07%～0.21%[1]， 且随着EDTA抗凝剂在血常规检查中的广泛应用， 发病率呈逐年上升趋势。EDTA-PTCP的发生原因可能与以下机制有关：抗体介导的血小板聚集；血小板卫星现象；抗磷脂抗体[2]等。已证实大多数假性血小板减少的患者抗血小板抗体作用靶点是GPIIb/IIIa[3]。正常情况下， 血小板膜抗原表位隐藏在血小板膜GPIIb的亚单位中， 而钙离子螯合剂改变GPIIb/IIIa的分子构象， 引起血小板膜糖蛋白的暴露及分子修饰， 进而被抗血小板抗体识别， 结合， 引起血小板聚集。

据文献报道[4， 5]， 初步怀疑EDTA-PTCP的患者， 许多医院喜欢换用枸橼酸盐抗凝剂或肝素抗凝剂重新检测。EDTA是最常见的钙离子螯合剂， 可以引起EDTA-PTCP。而其他弱的钙离子螯合剂抗凝剂如枸橼酸盐类也可以引起血小板体外聚集成团， 导致假性血小板减少。另外肝素能引起血小板聚集及肿胀， 在计数时， 由于其体积较大， 会被仪器误认为其他细胞而导致血小板减少。本研究20%的病例（每组2例）经枸橼酸盐、肝素抗凝后， 血小板数值均有不同程度的下降。与胡先泳等[6]报道相符。因此， 作者认为对于怀疑EDTA-PTCP患者， 不应更换枸橼酸盐或肝素类抗凝剂再次检测， 而应该用不加任何抗凝剂管的全血做仪器旁即刻检测， 则血小板数值比较准确。

EDTA-PTCP可见于许多疾病[7-9]， 如高血压、高血脂、糖尿病、自身免疫性疾病、肝病、肿瘤、脓毒血症， 随着病情控制， 血小板可逐渐恢复正常， 也可见于正常人。邝妙欢等[8]报道， 肿瘤患者中EDTA-PTCP发生与性别、合并常见病、肿瘤类型、治疗方式可能无关。本研究中10例EDTA-PTCP患者患有心脏病、肿瘤等疾病， 也有正常人， 同时无性别差异， 与上述报道相符。

将EDTA-PTCP的血液制品输给受血者， 后者血小板仍可获得满意提升[10]， 证明EDTA-PTCP的良性病程。因此， EDTA-PTCP本身无临床意义， 关键要尽早诊断， 将其与其他血小板减少进行鉴别， 避免不必要的检查与治疗。文献报道中对多例EDTA-PTCP患者行骨髓穿刺检查， 予血小板输注， 甚至予大剂量糖皮质激素冲击治疗， 增加患者的身心痛苦及经济负担。因此接诊一个血小板明显减少的患者， 应仔细询问病史及查体， 如皮肤有无瘀点、瘀斑， 有无临床出血表现， 临床表现与血小板减少程度是否相符等。如临床无出血表现， 而血小板减少明显者， 需要考虑EDTA-PTCP的诊断。endprint

最后建议临床上对无任何出血倾向而血小板减少明显患者， 采取以下应对措施：①警惕EDTA-PTCP的发生， 避免临床误诊误治。②疑似EDTA-PTCP患者可在仪器旁， 即刻采血直接行血小板计数。不建议更换枸橼酸盐或肝素抗凝剂重复采血。③血常规做涂片染色， 加EDTA抗凝剂者可见片尾大量血小板聚集， 不加抗凝剂者可见血小板散在或小堆簇状存在。

参考文献

[1] Yoneyama A， Nakahara K， EDTA-dependent Pseudothrombocy-topenia-differentiation from true thrombocytopenia. Nippon Rinsho， 2003（61）：569-575.

[2] 威廉姆斯. 威廉姆斯血液学 .陈竺， 译. 第8版.北京：人民卫生出版社， 2011：1756.

[3] Casonato A， Bertomoro A， Pontara E， et al. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia caused by antibodies against the cytoadhesive receptor of platelet GPIIB-IIIA.J Clin pathol， 1994 （47）：625.

[4] 孟晓玲， 夏世军.不同抗凝剂对检测血小板的影响.临床误诊误治， 2007， 20（6）：43.

[5] 张辉.加强对乙二胺四乙酸依赖性血小板减少症的认识及对策.检验医学与临床， 2008， 5（5）：316-317.

[6] 胡先泳， 陈峻. EDTA依赖性假性血小板减少症血小板检测. 血栓与止血学， 2013， 19（5）：227-232.

[7] Bragani G， Bianconcinl G， Brogna R， et al. Pseudothrom-bocytopenia：Clincal comment on 37 cases. Minerva Med， 2001 （92）：13-17.

[8] 邝妙欢， 欧阳文婷， 林建华， 等.肿瘤患者EDTA依赖性假性血小板减少的临床分析.中华医学杂志， 2010， 90（44）：3144-3146.

[9] Nair SK， Shah R， Petko M， et al. pseudothrombocytopenia in cardiac surgical practice. Interact Cardiovasc Thorac Surg， 2007（6）：565-566.

[10] Sweeney JD， Holme S， Heaton WA， et al. pseudothrombocytopenia in plateletpheresis donors. Transfusion ， 1995（35）：46-50.

[收稿日期：2014-05-06]endprint

最后建议临床上对无任何出血倾向而血小板减少明显患者， 采取以下应对措施：①警惕EDTA-PTCP的发生， 避免临床误诊误治。②疑似EDTA-PTCP患者可在仪器旁， 即刻采血直接行血小板计数。不建议更换枸橼酸盐或肝素抗凝剂重复采血。③血常规做涂片染色， 加EDTA抗凝剂者可见片尾大量血小板聚集， 不加抗凝剂者可见血小板散在或小堆簇状存在。

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最后建议临床上对无任何出血倾向而血小板减少明显患者， 采取以下应对措施：①警惕EDTA-PTCP的发生， 避免临床误诊误治。②疑似EDTA-PTCP患者可在仪器旁， 即刻采血直接行血小板计数。不建议更换枸橼酸盐或肝素抗凝剂重复采血。③血常规做涂片染色， 加EDTA抗凝剂者可见片尾大量血小板聚集， 不加抗凝剂者可见血小板散在或小堆簇状存在。

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