旋覆花配方颗粒质量标准研究

★ 徐东婷 闫炳雄 韩玉惠 董金香

(1.长春中医药大学 长春 130117；2.吉林四平巨能药业 四平 136000)

旋覆花为菊科植物旋覆花InulajaponicaThunb.或欧亚旋覆花I.britannicaL.的干燥头状花序,味苦,辛、咸,性微温,归肺、脾、胃、大肠经。具有降气、消痰、行水、止呕等功效,中医临床多用于风寒咳嗽、痰饮蓄结、胸膈痞满、喘咳痰多、呕吐噫气、心下痞硬等症[1]。中药配方颗粒[2]又称免煎中药，主要通过将单味中药进行加工提取其有效成分，制成中药饮片新剂型；临床应用及相关药理实验研究表明，单味中药配方颗粒和传统的水煎剂具有基本相同的疗效和药理作用，且中药配方颗粒具有体积小，易于携带保存，质量稳定等优点[3]。旋覆花配方颗粒是旋覆花饮片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方颗粒剂。据报道[4-5],绿原酸为旋覆花抗菌消炎作用的酚酸类活性成分。本实验采用HPLC法[1-4,6]测定制剂中绿原酸含量,并参考2010年版《中国药典》鉴别项下内容,为旋覆花配方颗粒的质量控制提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1260高效液相色谱仪；色谱柱：Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)；超声仪；电热鼓风干燥箱；数码照相机；硅胶G板。

1.2 试剂与试药 绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号：110753-200413，供含量测定用)；旋覆花对照药材(中国药品生物制品检定所,批号：121125-200402，供鉴别用)；旋覆花饮片(长春中医药大学-吉林敖东药业集团现代中药配方颗粒研究联合实验室提供，批号：201306)，饮片经长春中医药大学鉴定教研室姜大成教授鉴定为真品。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 旋覆花配方颗粒的薄层色谱鉴别

按照《中国药典》2010年版一部旋覆花饮片【鉴别】项下规定，取旋覆花对照药材及饮片粉末2g，置具塞锥形瓶中，加石油醚(60-90℃)30mL，密塞，冷浸1小时，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加石油醚(60-90℃)2mL使溶解，取上清液作为对照品溶液。另取三批旋覆花配方颗粒各2g，同法制成供试品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果见图1所示。图1表明，配方颗粒与对照药材显示相同的斑点。

3 旋覆花配方颗粒检查

3.1 水分 按照《中国药典》2010年版一部附录IX H[7]水分测定项中烘干法测定。取同一批旋覆花配方颗粒，平行3份，测得平均含水量为4.56%(小于6.0%)，符合要求。

图1 旋覆花对照药材与配方颗粒TLC图谱

3.2 溶化性 取旋覆花配方颗粒10g，加热水200mL，搅拌5分钟，观察到颗粒全部溶化，符合要求。

3.3 粒度 按照《中国药典》2010年版一部附录XI B[7]粒度测定第二法进行测定，结果不能通过一号筛和能通过五号筛的颗粒为9.7g(不超过15%)。

4 绿原酸含量测定

4.1 色谱条件[7]Agilent TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；柱温为室温；体积流量1.0mL/min；检测波长327nm；进样量10vμL。阴性对照品、绿原酸对照品和供试品的HPLC图谱见图2所示。

A

B

C

4.2 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成，每1mL含绿原酸0.216mg的对照品溶液。即得绿原酸对照品母液。

精密吸取绿原酸对照品母液适量，配制成8.64，17.28，25.92，34.56，43.20，51.84g/mL的溶液。

4.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟(150W，40kHz)，取出放冷后，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。重复上述操作，即得供试品平行组。

4.4 线性关系考察 分别吸取上述各质量浓度对照品溶液10μ，注入液相色谱仪进行分析，以绿原酸进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归，回归方程：Y=2829X+3.2，r=1，表明绿原酸在0.0864-0.5184g范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

4.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，RSD为0.06%，表明仪器精密度良好。

4.6 重复性试验 取本品同一批次样品6份，按4.3项下方法操作，分别按上述色谱条件方法测定绿原酸，RSD为2.39%，结果表明该方法重复性良好。

4.7 稳定性试验 精密吸取上述供试品溶液10μ，分别在0，4，8，10，12，24h进样，按上述色谱条件测定，RSD为0.49%，色谱峰面积在24h内基本无变化，说明稳定性较好。

4.8 回收率试验 精密称定本品0.5g，平行6份，按4.3项下方法操作制备供试液，然后向供试液中精密加入一定量绿原酸对照品，混匀后测定绿原酸含量，结果平均回收率为102.71%，RSD为2.44%，结果见表1所示。

表1 回收率测定试验结果(n=6)

4.9 样品测定 分别精密称定不同批号的旋覆花配方颗粒约1g,按4.3项下方法制备供试品，按上述色谱条件测出峰面积，采用外标法计算绿原酸的含有量。结果见表2所示。

表2 三批样品中绿原酸含量测定结果

5 讨论

将旋覆花制备成颗粒剂能够保留原药材的性味、有效成分和功能。本实验通过TLC法进行鉴别，然后对颗粒剂各项指标进行检查，最后检测有效成分的含量，建立起一套科学、标准的检测方法。

TLC实验是参照2010年版中国药典的TLC鉴别方法进行的，实验中还进行了更换不同溶剂(石油醚、乙醚、氯仿)和提取方法(冷浸、回流)，进行薄层色谱分析[8]结果表明以石油醚(60-90℃)作溶剂的薄层色谱斑点较乙醚和氯仿好,色谱斑点分离清楚。加热回流法提取完全，而且缩短时间，便于快速分析。并且对薄层色谱条件的耐用性进行了考察，分别在高温、低温、高湿、低湿条件下展开，以明确该薄层色谱条件的耐用性。结果显示，薄层色谱条件耐用性良好。

HPLC实验是参照2010年版中国药典金银花项下方法进行的，本实验考察了不同提取方法(热回流、超声法)不同提取时间(20、30、40min),结果表明，超声处理30min中提取效率最高。

本实验采用水提工艺，以有效成分绿原酸为指标评价旋覆花配方颗粒，结果显示，该方法科学准确，具有良好的可控性，因此可以作为旋覆花配方颗粒的质量可控制标准。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010:305.

[2]吴镝，赵忠慧．中药配方颗粒的应用与研究[J].中国医药导报，2011，(25)：10-11.

[3]诸明娜．免煎中药配方颗粒与传统中药饮片的比较[J].湖北中医杂志，2004，26(11)：55.

[4]耿红梅.高效液相色谱法测定欧亚旋覆花中绿原酸的含量[J].时珍国医国药,2009,20(1):201-202.

[5]耿红梅.欧亚旋覆花化学成分的研究[J].时珍国医国药,2008,19(10):2 432-2 433.

[6]贾法强,尹宁宁,林林.HPLC法测定忍冬藤中绿原酸的含量[J].齐鲁药学,2007,26(1):26-27.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010:52,65,205.

[8]张新民,吴银生.旋覆花的薄层色谱鉴别[J].苏州医学院学报，1999，19(8)：901.