柴芍安神解郁颗粒制备工艺研究*

★ 李智勇 王洛临 施之琪 徐文杰 陈雪婷 陈朋 曾文雪*

(1.广东省中医研究所 广州 510095；2.广州中医药大学 广州 510405；3.江西中医药大学 南昌 330006)

柴芍安神解郁颗粒是广东省第二中医院临床应用十余年、用于治疗中风后抑郁症的经验方剂，主要由醋柴胡、白芍、香附、石菖蒲、郁金、酸枣仁等组成，具有疏肝理气、化痰祛痰、安神定志之功效。本研究对其提取工艺和成型工艺进行研究，以保证制剂质量和临床疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪(美国)，Mettler XS205 D型分析天平(瑞士)，JJ 300型精密电子天平(常熟双杰测试仪器厂)，TC-15套式恒温器(海宁市新华医疗器械厂)，DFG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，KQ5200D型数控超声波清洗器(昆明市超声仪器有限公司)，GK-70型干式造粒机(江苏瑰宝集团有限公司)。

1.2 试药

芍药苷对照品(110736-201136购于中国食品药品检定研究院，供含量测定)，所用药材均购自广州中芝源中药饮片有限公司，经过广东省中药研究所王洛临主任中药师鉴定，均符合中国药典2010年版一部各项下规定。乙腈为色谱纯(Merck)，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油提取工艺的研究

处方中香附、石菖蒲、郁金均含挥发油，具有多种药理作用[1-3],以挥发油体积和收油率为评价指标，采用单因素筛选法浸泡时间、加水量、蒸馏时间等对挥发油提取的影响[4,5]。

2.1.1 浸泡时间对收油率的影响

取香附、石菖蒲、郁金饮片共三份，每份150g，加入药材量8倍的水，分别浸泡0，1，2h后，蒸馏提取8h，结果分别得挥发油0.97，0.99，0.99mL。表明三者之间无差异，可选择浸泡时间为1h。

2.1.2 加水量对收油率的影响

取香附、石菖蒲、郁金饮片共四份，每份150g，分别加入4、6、8、10倍水，浸泡1h，提取挥发油8h，结果分别得挥发油0.88，0.92，0.98，0.99mL。表明加8倍与10倍量水的挥发油得率无明显差异，可选择加水量为8倍。

2.1.3 提取时间对收油率的影响

取香附、石菖蒲、郁金饮片共三份，每份150g，加入8倍水，浸泡1h，加热蒸馏提取8h，记录不同时间的挥发油体积，结果提取8h后，挥发油体积不再增加，在提取5h时，平均挥发油提取量达0.97mL(约为总收油量的97%)，为节约能源，可将提取时间定为5h。

2.1.4 挥发油提取工艺验证

根据确定的挥发油提取工艺进行3批验证试验，即加8倍量水，浸泡1h，蒸馏提取5h，结果挥发油收油率平均达0.66%，RSD为0.87%，说明挥发油提取工艺基本稳定可行。

2.2 水提工艺的优选

2.2.1 正交提取实验设计

根据处方中各药材的有效成分性质，针对提取次数、提取时间，加水倍量等三个主要影响因素，以方中白芍的主要有效成分芍药苷的提取率(权重系数定为0.7)和干膏得率(权重系数定为0.3)为指标综合评分评价，选用L9(34)正交试验，筛选最佳水提工艺条件[6]。因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2.2 样品的制备

按处方称取白芍(处方中白芍药材量为18g)等饮片与相同处方量的香附、石菖蒲、郁金提取挥发油后的药渣共9份，按正交试验设计表所列各因素水平实验条件进行提取，滤过，合并提取挥发油后的水溶液，浓缩至一定体积，备用。

2.2.3 考察指标的选择

2.2.3.1 干膏得率的测定 精密吸取各样品20mL，置己恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，照《中国药典》2010年版一部附录IXG干燥失重测定法测定，计算干膏得率。

2.2.3.2 芍药苷的含量测定[7]色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14：86)为流动相；检测波长为230nm，流速：1mL/min。

对照品溶液的配制 精密称取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50.76μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备 取提取液适量(相当于含白芍0.1g)，精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超声处理(功率240W，频率45kHz)30分钟，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

标准曲线的绘制 分别精密吸取芍药苷对照品溶液2、4、8、10、12μL进样，测定峰面积，以芍药苷的峰面积为纵坐标(Y)，以进样量(ng)为横坐标(X)，回归得直线方程：Y=1.2512X+19.183；r=0.9999。结果显示，芍药苷在进样量101.52-609.12ng范围内呈良好的线性关系。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2.4 实验方案及结果

见表2。

表2 正交试验结果表

综合评分=芍药苷含量/最大芍药苷含量×0.7×100%+得膏率/最大得膏率×0.3×100%

对正交试验所得结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出最优的提取条件。方差分析结果见表3。

表3 方差分析

由直观分析可知，影响提取效果的顺序为：提取次数(A)﹥提取时间(B)﹥加水倍量(C)，最佳工艺为：A3B3C2。方差分析结果表明，因素A对提取结果有显著影响(P<0.05)，其余二个因素对结果均无显著影响，综合考虑生产效率和节能等各方面因素，确定的优选工艺为A2B3C1，即每次加水8倍量提取2次，每次1.5小时。

2.2.5 水提取工艺验证试验

按处方比例，称取药材3份，每份480g，照确定的工艺提取，滤过，合并，浓缩，转移至1000mL量瓶中，加水至刻度，分别测定芍药苷含量和干膏得率。结果3次试验的芍药苷提取率分别为73.19%，75.42%，77.35%，平均提取率为75.32%；干膏率分别为19.85%，20.73%，20.10%，平均干膏得率为20.22%。说明水提工艺基本合理稳定。

2.3 浓缩、干燥工艺研究

2.3.1 浓缩工艺考察

取处方药材960g，依法提取，合并提取液，混匀，平均分为四份，常压浓缩和减压浓缩各2份，分别浓缩至相对密度约1.15(60℃)，分别测定芍药保留率。结果显示，芍药苷保留率分别为91.87%和93.07%，表明二者之间无明显差异，可选择常压工艺进行浓缩。

2.3.2 干燥工艺的考察

真空干燥和喷雾干燥工艺对比结果显示，喷雾干燥工艺所得浸膏中芍药苷转移率96.07%略高于真空干燥工艺92.73%，但无明显差异，可选择喷雾干燥法进行干燥。

2.3.3 喷雾干燥工艺参数优选

选定入塔风温为180℃和出风温度为80℃，以喷干粉外观、粘壁情况等为考察指标，分别考察清膏不同相对密度1.05，1.10，1.15，1.20对喷雾干燥的影响。结果显示，清膏相对密度为1.10-1.20(60℃)时，喷雾干燥均可以顺利进行，粘壁少，所得粉末外观良好，选定喷雾干燥工艺为：清膏的相对密度为1.10-1.20，进风温度180℃，出风温度80℃。

2.4 制剂成型工艺研究

2.4.1 处方中浸膏粉与辅料配比的确定

根据日服生药材剂量为58g，总出膏率平均为20.22%，得浸膏11.73g，按日服两次，每次5.86g浸膏粉，拟定每袋装8g，每袋辅料用量为2.14g，即浸膏粉与辅料配比约为10∶3.65。

2.4.2 辅料种类筛选[8]

中药颗粒剂常用辅料有淀粉、乳糖、麦芽糊精、微晶纤维素等。试验中以颗粒成品率、溶化性、吸湿率为考查指标，对辅料的种类进行选择。

2.4.2.1 溶化性 取颗粒10g加热水至200mL，搅拌5分钟，观察颗粒溶化情况。

2.4.2.2 吸湿率测定 称取样品颗粒约2g，置干燥至恒重称量瓶中，精密称重，置入25℃盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器中，相对湿度为75%，放置48h，精密称量，计算吸湿百分率：

2.4.2.3 样品制备 称取柴芍安神解郁浸膏粉5份，每份100g，分别加入36.5g药用淀粉、乳糖、麦芽糊精、微晶纤维素和不加辅料，以95%乙醇制粒，干燥，整粒，分别测定颗粒成品率、吸湿率并观察溶化性，结果见表4。

表4 辅料筛选结果

结果显示，加入药用淀粉、乳糖、麦芽糊精、微晶纤维素均可良好改善所制颗粒的溶化性、成型性和吸湿性较低，尤以乳糖、麦芽糊精为佳。综合考虑生产成本等因素，选择麦芽糊精为稀释剂。

2.4.3 矫味剂用量考察

由于柴芍安神解郁颗粒的口味苦涩，需加入适当矫味剂，以增加患者用药的顺从性。实验中分别向颗粒中加入不同量(0.3%-1.5%)的甜菊素，考察其口感变化，选择矫味剂的最适用量。结果加入甜菊素至为制成颗粒量的0.5%时，口感良好，并且对其外观无影响。

2.4.4 干压制粒工艺条件的确定[9]

分别称取药粉、麦芽糊精和甜菊糖，按照上述实验比例混匀，分别烘干或加入适量95%乙醇，混匀，测定物料的含水量，再干法制粒，控制压轮压力为0.3-0.35Mpa，侧封压力为0.05-0.06Mpa，装12目筛整粒，称定一次干压制粒制得在12目筛和60目筛之间的颗粒，计算颗粒成型率，并观察颗粒的外观，结果见表5。

表5 不同含水量药粉干压制粒结果

由上述结果可以看出，随着药粉含水量的增加，颗粒的成型率也随之升高，而且当药粉含水量超过了6%时，颗粒外观出现了少量花斑，结合颗粒的一次干压颗粒成型率，故干压制粒药粉含水量应控制在4%-6%之间为宜。

2.4.5 临界相对湿度(CHR)的测定

配制系列盐饱和溶液，分别置于玻璃干燥器中，恒温25℃放置48h，使其内部湿度平衡构成不同相对湿度(RH)的环境，将己干燥恒重称量瓶中放入约3g柴芍安神解郁颗粒，平铺于瓶底，厚约2mm，称重，并干燥至恒重，精密称定，打开称量瓶盖，放入上述不同的RH干燥器中，吸湿至恒重，精密称重计算吸湿率。以吸湿百分率数据为纵坐标，RH数据为横坐标作图，计算CHR。结果显示，柴芍安神解郁颗粒CRH值约为55%，提示颗粒吸湿性较强,对制备环境的湿度控制和包材选择提出了较高的要求。结果如表6。

表6 柴芍安神解郁颗粒的临界相对湿度的测定结果

3 小结与讨论

3.1 实验过程中发现，石菖蒲挥发油的比重比水大，但香附、郁金的挥发油的比重比水小，而石菖蒲、香附、郁金的混合挥发油比重较水小，在提取过程中产生的混合挥发油会缓缓上浮于上层。

根据试验结果，柴芍安神解郁颗粒的提取工艺可确定为香附、石菖蒲、郁金等提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与与其余药材加8倍量水提取2次，每次1.5小时，验证结果显示，该工艺方法简单、稳定，适合工业化生产。

3.2 柴芍安神解郁颗粒采用喷雾干燥后干压制粒的工艺中，对比实验结果显示，选用麦芽糊精为辅料，药粉颗粒的含水率控制在4%-6%，制备的颗粒成型率高、溶化性良好、吸湿率低，可以满足工业化生产的需求。

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