氯霉素炉甘石洗剂质量标准研究

★ 聂秀霞 何婉敏 应雪 陈焕梅 邱玉婷

(广东省中山市第二人民医院 中山 528447)

氯霉素炉甘石洗剂是我院研制的皮肤科用药之一。其由氯霉素、炉甘石、氧化锌等组成，具有抗菌、消炎、止痒、收敛等作用，在无渗出性皮炎、湿疹、痱子、普通型痤疮中广泛应用。该制剂原质量标准参照1985版《中国医院制剂规范》，采用滴定法测定氧化锌的含量，而对氯霉素只简单的做了薄层鉴别。为有效控制此制剂的质量，提高其标准，笔者参照2010版《中国药典》[1]及杨连菊[2,3],张军[4]等人的方法，建立了以HPLC法测定氯霉素及紫外-可见分光光度法测定氧化锌的含量。结果表明，此方法简便、准确，可作为控制此制剂的质量指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(安捷伦1260)，紫外-可见分光光度计(日本岛津UV-1800)，十万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司)等；

1.2 试药

氧化锌对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111619-200301)；锌试剂(国药集团化学试剂有限公司)；氯霉素对照品(批号：130555-200602，中国药品生物制品检定所)；氯霉素二醇物对照品(批号：130436-200704，中国药品生物制品检定所)；对硝基苯甲醛对照品(批号：80562-200902，中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 氧化锌

2.1.1 溶液的配置 对照品溶液的配制精密称取

氧化锌对照品0.05g，置100mL量瓶中，加入10mL稀盐酸使溶解，加水定容至100mL，精密量取10mL，加水稀释至100mL，为对照品贮备液。

锌试剂溶液：取锌试剂0.13g，加氢氧化钠试液2mL使溶解，再加蒸馏水至100mL即得。

2.1.2 显色 精密吸取对照品贮备液适量，置50mL量瓶中，加入硼酸-氯化钾缓冲液(pH=9.0)10mL与锌试剂溶液3mL，用水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置1h，测定吸光度。

2.1.3 检测波长的选择 取显色好的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液，摇匀，分别在400-800nm扫描其吸收光谱，对照品及供试品溶液均在620±1nm处有最大吸收，阴性对照液在此处无吸收。因此选择620nm为检测波长，(见图1)。

图1 氧化锌色谱扫描图

2.1.4 线性 精密量取氧化锌对照品贮备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL及阴性对照溶液分别置50mL量瓶中，照2.1.2项下从加入硼酸-氯化钾操作，在620nm处测定吸光度，以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，进行回归，得回归方程Y=0.2838X+0.0231(r=1),说明线性关系良好。

2.1.5 准确度 取已知含量的制剂(批号20130917)，精密量取5mL，置100mL量瓶中(9份)，用滤纸擦去外壁的附着物，用量取好的稀盐酸(20mL)洗净移液管内壁的附着物，然后加入剩余量的稀盐酸，充分振摇，使沉淀物不再继续溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL，置50mL量瓶中，分别精密加入对照品贮备液1，1.5，2mL，各3份，照2项下方法显色，测定吸光度，含量平均回收率的RSD%为3.0。

2.1.6 精密度 精密量取样品溶液(批号20130917)5mL，照(2.1.8)项下方法测定，平行操作5次，测定吸光度，RSD%为0.28，表明仪器精密度良好。

2.1.7 专属性 取显色好的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液，摇匀，分别在400-800nm扫描其吸收光谱，对照品溶液及供试品溶液均在620±1nm处有最大吸收，阴性对照液在此处几乎无吸收。因此选择620nm为检测波长.

2.1.8 测定法 将样品溶液摇匀，精密量取5mL，置100mL量瓶中，用滤纸擦去外壁的附着物，用量取好的稀盐酸(20mL)洗净移液管内壁的附着物，然后加入剩余量的稀盐酸，充分振摇，使沉淀物不再继续溶解，加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，既得。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各1mL，分别置50mL量瓶中，加入硼酸-氯化钾缓冲液(pH=9.0)10mL与锌试剂溶液3mL，用水稀释至刻度，摇匀，在暗处放置1h，测定其吸光度。将氯霉素炉甘石阴性洗剂摇匀，照2.1.2项下从精密量取1mL开始，平行操作。三批样品含量均合格，具体结果见下表1。

表1 三批氯霉素炉甘石中氧化锌含量结果表

2.2 氯霉素

2.2.1 色谱条件 高效液相色谱仪(安捷伦1260)，紫外检测器，Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)，以0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1 000mL，再加三乙胺5mL，混匀，用磷酸调节PH至2.5)-甲醇(68∶32)为流动相，检测波长为277nm，进样量10μL，流速1.0mL/min，柱温：30℃。

2.2.2 系统适用性 取氯霉素对照品，氯霉素二醇物对照品，对硝基苯甲醛对照品各适量，加甲醇适量(每10mg氯霉素加甲醇1mL)使溶解，用流动相稀释制成每1mL中各含50μg的溶液，取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各相邻峰的分离度均应符合要求(见图2-4)。

图2 氯霉素阴性对照色谱图

图3 氯霉素对照品色谱图

图4 氯霉素炉甘石洗剂样品色谱图

2.2.3 准确度 精密量取同一批号(20130917)已知浓度的供试品溶液10mL，置于50mL容量瓶中，共9份，照(8)项下方法稀释，再分别加入已知浓度的对照品溶液5，10，15mL，每个浓度平行操作3次，加流动相稀释至刻度，摇匀，按标准方法测定，计算回收率，平均回收率为101.39%，RSD为3.01%。

2.2.4 精密度 精密量取同一批号(20130917)已知浓度的供试品溶液10mL，置于50mL容量瓶中，按(2.2.7)项下操作，重复5次，测得氯霉素峰面积的RSD为0.016%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.2.5 线性 精密称取对照品0.02g，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并用70甲醇稀释至刻度，精密吸取对照品溶液1、2、4、6mL及对照贮备液10mL于10mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，照标准方法进样，以对照品浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，回归方程为Y=17556X+41.658，r=0.9997，表明氯霉素浓度在47.46-284.76mg/mL范围内，线性关系良好。

2.2.6 定量限与检测限 将对照品溶液稀释至色谱峰信噪比为10时，氯霉素的检出浓度分别为0.169μg/mL，对照品溶液稀释至色谱峰信噪比为3时，氯霉素的检出浓度为0.059μg/mL。

2.2.7 测定法 精密量取本品混悬液10mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，过滤，取续滤液5mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；根据所做标准曲线，按外标法以峰面积计算氯霉素含量。具体结果见下表2。

表2 3批氯霉素炉甘石洗剂中氯霉素含量结果表

3 讨论

由于氯霉素炉甘石洗剂为混悬剂，炉甘石及氧化锌易沉淀，取样前应摇匀。炉甘石及氧化锌为细粉，取样时易黏附在吸管内壁及外壁，为减少误差，增加准确度，取样时应用滤纸擦去外壁吸附的粉末，并用稀盐酸洗涤内壁，计入含量。

氯霉素炉甘石洗剂滤液中氯霉素含量比混悬液中偏低，且混悬液采用甲醇溶解后，流动相稀释所测的含量比用流动相直接稀释所测的含量高，因此初步预测氯霉素可能被吸附在炉甘石粉末上，取样前摇匀的程度及取样量的多少均对其有一定的影响。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京：化学工业出版社，2010:1 029-1 032.

[2]杨连菊，冯学峰，徐子芳,等.炉甘石药材及饮片中氧化锌紫外-可见测定方法研究[J].中国实验方剂学杂志，2011,17(22)：89-91.

[3]杨连菊，冯学峰，徐子芳,等.紫外-可见分光光度法测定马应龙痔疮膏中氧化锌的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011,17(21)：60-62.

[4]张军，梁爱君，陈新善,等.分光光度法测定复方氧化锌洗剂中氧化锌的含量[J].解放军药学学报，2002,18(4)：248-250.