淫羊藿配方颗粒的提取工艺研究

★ 张雪杰 龚千锋 胡昌江 周一帆

(1.江西中医药大学 南昌 330006; 2.成都中医药大学 成都 611137)

中药配方颗粒是用符合炮制规范的优质中药饮片为原料，经现代制药技术提取浓缩而成的单味颗粒。其性味、功效与原生药一致，供中医临床配方使用，具有质量稳定、疗效可靠、不需煎煮、直接冲服、服用量少、卫生安全、携带和储存方便等优点。近年来，中药配方颗粒作为对传统中药饮片应用形式的突破越来越受到认可。

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevi-cornuMaxim.、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim、或朝鲜淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥叶。性温，味辛，甘。归肾、肝经。具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的作用。用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛等症。[1]现代研究证实，淫羊藿有效成分为总黄酮，其中淫羊藿苷是总黄酮的主要成分。[2-5]目前对淫羊藿的研究报道多在化学成分和药理作用等方面，而对其制成的单味中药配方颗粒的研究尚未报道，因此本实验以淫羊藿苷和总黄酮含量、收膏率为指标，对其配方颗粒的提取工艺进行优选，为淫羊藿配方颗粒生产提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1200S，四元泵，)，KQ-300E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BP-61电子天平(十万分之一，德国Sartorius)，ZDHW调温电热套(北京中兴伟业仪器有限公司)，756PC紫外可见分光光度计(上海洪纪仪器设备有限公司)。

1.2 试药 淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所 批号：110737-200415)；乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。 淫羊藿药材购于成都荷花池药材市场，经胡昌江教授鉴定为小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.的干燥茎、叶。

2 实验方法

2.1 正交设计 淫羊藿苷为黄酮类成分，有良好的水溶性，所以可以用水作为提取溶剂。经预试验，根据影响提取的主要因素，选择加水量、提取时间、提取次数作为考察因素，以淫羊藿苷和总黄酮含量、药材出膏率为考察指标，按L9(34)表进行正交试验。因素水平见表1。

表1 因素水平

2.2 淫羊藿苷含量的考察

2.2.1 样品溶液的制备 按正交试验设计安排实验(见表1)，分别称取淫羊藿饮片9份，每份20 g。按正交试验方案规定的加水量，提取时间，提取次数进行回流提取，煎煮后药液合并过滤并定容至500mL，摇匀。精密吸取10mL浓缩药液至25mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得样品溶液。吸取5mL样品溶液，过0.45μm的微孔滤膜，弃去初滤液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取淫羊藿饮片适量，粉碎，取粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)1小时，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

色谱条件与系统适用性试验：： Diamonsil C18 色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；G1314B型VWD紫外检测器(美国Agilent)，柱温为30℃，检测波长270nm，流动相：乙腈-水(30∶70)，流速1mL/分。柱效：按照淫羊藿苷峰计算理论塔板数不应低于1 500。

线性关系的考察 精密量取淫羊藿苷对照品溶液2、4、6、8、10、14 μL进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程Y=1253.4X+ 9.859 1，r=0.999 7。结果表明，在0.200 8-1.405 6 μg范围内，线性关系良好。

2.3 出膏率的考察

精密吸取9次正交试验所得提取液各10mL，分别置于已经经过干燥恒重的蒸发皿中，蒸发水分至恒重得到干浸膏，计算出膏率。

2.4 总黄酮含量的考察

2.4.1 供试品溶液的制备 精密量取淫羊藿苷转移率测定项下的供试品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4.2 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.4.3 测定方法 以甲醇作为空白溶液，在270nm波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸光度，计算，即得。

线性关系考察 精密量取上述对照品溶液1.2，1.4，1.6，1.8，2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述测定方法测定吸光度。以质量浓度为横坐标，吸光度的值为纵坐标，绘制标准曲线，经计算得回归方程：Y=3.356 6X+0.056 6，r=0.999 1，结果表明，淫羊藿总黄酮在0.012-0.020mg/mL范围内吸光度与质量浓度之间呈良好的线性关系。

2.4.4 样品溶液的制备 精密量取淫羊藿苷转移率测定项下的样品溶液3mL，置100mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得样品溶液。

2.5 实验结果分析

采用加权评分法，按照淫羊藿苷含量、总黄酮含量和出膏率的权重比(4∶3∶3)计算综合评分，并对实验结果进行分析，结果见表2，方差分析见表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析

2.6 最佳工艺的确定 从上述结果分析可以看出，3个因素的影响大小依次为C>A>B，且A3>A2>A1，B1>B3>B2，C3>C2>C1，且因素A和因素C有显著性差异，因素B无显著性差异。从节约能耗和降低成本考虑，在保证提取充分的前提下，综合分析各因素对淫羊藿苷和总黄酮含量、出膏率的影响，确定提取工艺为加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小时。

为了验证所选条件的合理性和可行性，进行了验证实验，结果见4。

表4 验证试验

淫羊藿苷平均含量为6.53mg/g，总黄酮平均含量为41.67 mg/g，平均出膏率为18.82%。结果表明，优选的提取工艺基本可行。

3 结论与讨论

经过研究确定淫羊藿配方颗粒提取的最佳工艺为：A3B2C3，即加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小时。实验证明该淫羊藿提取工艺稳定合理，能有效地提取淫羊藿苷，且能适用于大生产，可作为淫羊藿配方颗粒的提取工艺。

黄酮类化合物是淫羊藿饮片中的重要成分，而淫羊藿苷又是总黄酮的主要成分，对心脑血管系统、血液系统、免疫系统、骨骼系统、生殖和内分泌系统有较好作用，还有抗肿瘤和抗炎等药理作用，[6]且国家对中药制剂的质量等各方面要求也越来越高，因此本试验将淫羊藿苷和总黄酮含量、收膏率三项作为考察指标更加具有可行性。

中药配方颗粒作为饮片的发展，大多以水作为其提取溶剂，淫羊藿中的淫羊藿苷易溶于水，故以水作为溶媒将其制成中药配方颗粒，既保证了传统中药以水煎煮的特点，又为生产节约了成本，值得推广和应用。

淫羊藿品种较多，《中华人民共和国药典》(2010年版)规定的就有4种，经过对几种淫羊藿中淫羊藿苷的含量比较之后，发现淫羊藿植物中淫羊藿苷含量明显高于其他几种，大约为1.37%，且该淫羊藿植物在药材市场较易购买，故本实验选定淫羊藿这一品种进行研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010年版一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：306.

[2]蔺学燕，董传海，李伟华，等.淫羊藿有效成分的药理研究与临床应用[J].时珍国医国药，2005，16(9)：917.

[3]李遇伯，孟繁浩，鹿秀梅，等.淫羊藿化学成分的研究[J].中国中药杂志，2005，30(8)：586-587.

[4]张明月，石进校.淫羊藿属植物研究进展[J].吉首大学学报，2009，30(1)：108-109.

[5]韩广轩，王麦莉，张军东，等.淫羊藿化学成分研究进展[J].药学实践杂志，2002，20(6)：359-360

[6]郭峰，赵纳.淫羊藿药理作用的研究现状及展望[J].中国药业，2007，16(24)：71