归胶颗粒毒理学安全性评价

★ 张小波 游剑 龚建平 曾燕斌

(1.江西美媛春药业股份有限公司 永丰 331500;2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 南昌 330006)

贫血是全球最为普遍的疾病。2008年世界卫生组织全球贫血数据库公布的《1993年至2005年贫血患病率》显示，全世界受贫血影响的人数达到16.2亿，占世界人口的24.8%；贫血患病率在学龄前儿童最高(为47.4%)，成年男子的患病率最低(为12.7%)，成年女性中，孕妇患病率为41.8%，非孕妇为30.2%。而据2002年全国第四次营养调查，我国居民贫血患病率为20.1%，男性为15.8%，女性为23.3%。归胶颗粒是针对贫血人群而组方的补血产品，配方主要由当归、阿胶等组成。为了探讨归胶颗粒作为保健食品开发的可行性，笔者按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)对其进行了毒理学安全性评价，作为该产品食用的安全性依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 受试物 归胶颗粒，自制，人体口服推荐剂量为200 mg/kg.bw。

1.1.2 动物 昆明种小鼠，由江西中医学院实验动物中心提供。许可证号：SCXK(赣)2005-0001。

1.1.3 试验菌种 鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102标准菌株来源于湖南省疾病预防控制中心。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性试验 昆明种小鼠，雌、雄各10只，18-22 g。采用最大耐受量法，试验前动物禁食16 小时。取受试物内容物(相对密度为1.0 g/mL)，按20.0 mL/kg﹒bw一次经口灌胃。灌胃后连续观察7 天，记录中毒表现及死亡情况。

1.2.2 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames试验) 采用鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。五个试验剂量分别为5 000、1 000、200、40、8 μg/皿，同时设自发回变、溶剂对照(蒸馏水)和阳性突变剂对照。样品配制时，取受试物1.25 g溶于25 mL蒸馏水中，取100 μL加入平皿即为最高受试物浓度(5 000 μg/皿)，其他浓度受试液用蒸馏水稀释出。试验采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9)作为体外代谢活化系统。在顶层琼脂中加入0.1 mL试验菌株增菌液、0.1 mL受试液和0.5 mLS-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。37 ℃培养48 小时，计数每皿菌落数。

1.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 昆明种小鼠，雌、雄各25只，25-30 g。按体重随机分为5组，阴性对照组(蒸馏水)、归胶颗粒10 000、5 000和2 500 mg/kg.bw组、阳性对照(环磷酰胺，40 mg/kg.bw)组，每组雌、雄各5只。称取6.25 g、12.50 g、25.00 g受试物加蒸馏水至50 mL，另称100 mg环磷酰胺加蒸馏水至50mL。灌胃体积按20 mL/kg.bw，采用30 小时2次灌胃法(间隔24小时)，第2次灌胃后6小时取胸片制片镜检。

1.2.4 小鼠精子畸形试验 雄性昆明种小鼠25只，25-35 g。按体重随机分成5组，阴性对照组(蒸馏水)、归胶颗粒10 000、5 000和2 500 mg/kg.bw组、阳性对照(环磷酰胺，40 mg/kg.bw)组，每组5只。以20 mL/kg.bw灌胃，连续5 天，每天1次，于末次灌胃后第30 天取两侧副睾制片镜检。

1.2.5 统计学分析 畸形试验和微核试验采用χ2检验。

2 结果

2.1 小鼠急性毒性试验

以20.0 g/kg.bw剂量的归胶颗粒灌胃两种性别的小鼠未见明显中毒症状，观察期内动物各系统无异常发现，也无死亡。归胶颗粒对雌、雄昆明种小鼠的急性经口毒性试验最大耐受剂量(MTD)大于20.0 g/kg.bw(见表1)。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的急性毒性分级标准，属无毒级。

表1 归胶颗粒对小鼠的急性经口毒性

2.2 Ames试验

由表2、表3可见，在本试验的各浓度下，无论是否加入S-9混合液，各皿回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，并且未见剂量-反应关系，而各阳性对照组均显示强烈的诱变作用。根据Ames试验结果判断标准，本次试验测试的归胶颗粒无致突变作用。

表2 归胶颗粒第1次Ames试验结果±s)

表3 归胶颗粒第2次Ames试验结果±s)

2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

由表4可见，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05)，而阳性对照组与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.01)。根据该试验结果，本次试验测试的归胶颗粒在上述剂量下未见致突变作用。见表4。

表4 归胶颗粒小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果±s)

2.4 小鼠精子畸形试验

由表5可见，样品各剂量组小鼠精子畸形发生率未产生明显改变，与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05)，阳性对照组(环磷酰胺组)与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.01)。说明本次检测的归胶颗粒对小鼠精子无致突变作用。

表5 归胶颗粒小鼠精子畸形试验结果±s，n=5)

3 讨论

当归和阿胶均始载于《神农本草经》，是临床常用的中药材，具有较好的补血功效，其中阿胶是药食两用的物品，当归也已入选我国卫生部2002年公布的“可用于保健食品的物品”名单。现代研究表明，当归的主要成分为精油(藁本内酯等)和水溶性成分(阿魏酸等)，此外还含有19种氨基酸、23种微量元素及多糖，其中当归多糖可促进血红蛋白和红细胞的生成[1]。阿胶具有升高红细胞和血红蛋白的作用，可促进造血功能；能升高白细胞、血小板和升高血氧含量；有扩张微血管、扩大血容量、降低全血粘度和降低血管壁通透性的作用[2]。以当归、阿胶等为主要原料，加工制成的归胶颗粒，含有丰富的中药补血活性成分，具有较高的应用价值。

本研究通过小鼠口服急性毒性试验表明，归胶颗粒最大耐受剂量(MTD)大于20 g/kg.bw，属无毒级。三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验)结果均为阴性，表明归胶颗粒对体细胞无致诱变及突变作用。

[1]邓永健，郭志伟，王萌.当归的化学成份及其药理作用研究进展[J].新疆中医药，2006，24(5) :109-113.

[2]杨福安，王京娥.阿胶的研究现状与展望[J].中国中医药信息杂志，2004，11(5) :467-468.