育龄期妇女抗心磷脂抗体和抗β2-糖蛋白1抗体检测及临床应用

许福亮，王云海，张 霞

(山东潍坊医学院附属医院 检验科 山东省十二五高校重点实验室,261031)

抗磷脂抗体综合征(ASP)是常见的疾病，易引起习惯性流产、早产、死胎等症状。临床上，依赖病人表现和磷脂抗体(aPL)来确诊。aPL有多种，其中最重要、最具代表性的aPL是抗心磷脂抗体(aCL)和抗β2-糖蛋白1 (β2-GP1)抗体。

1 材料和方法

1.1研究对象

1.1.1 生育障碍组(患者组)：来源于本院就诊，有习惯性流产病人536例，怀孕后出现胎停育或死胎患者64例，婚后多年未孕患者208例，共808例。年龄22岁-48岁。

1.1.2 怀孕妇女(对照组)：孕期2周-36周，120例，年龄23岁-38岁。

1.1.3 未怀孕或已顺利生产的育龄妇女(正常组)：65例，健康。已生产者：足月、顺利分娩。年龄：24-39岁。

1.2方法

1.2.1 标本采集 空腹抽血2-3 ml，待血液凝固后，3 000 rpm 10 min，分离血清后，将血清-30℃保存备用，2周内检测。

1.2.2标本检测aCL测定(IgA/G/M)将稀释后的待测血清、标准品、阴性和阳性对照各100 μl分别加入相应的微孔内，37℃温育30 min。洗板后上述每孔各加100 μl酶标结合物，同上条件温育、洗涤后，每孔各加100 μl色原/底物液，避光显色15 min。每孔加100 μl终止液，450 nm波长比色。

以标准品浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标画曲线，各标本的浓度可以从曲线上查出。

抗β2-GP1抗体检测(IgA/G/M) 操作同上述，同样绘制曲线后，根据各自的光密度值查得各标本抗β2-GP1抗体浓度。

2 结果

aCL和抗β2-GP1抗体测定结果见表1。

表1 aCL和抗β2-GP1抗体各组测定值

患者组与对照组或正常组比较差异明显(P<0.05)，对照组与正常组比较，两种抗体浓度无差异(P>0.05)。

aCL、抗β2-GP1抗体和两者相加后在不同组的阳性率见表2。

表2 aCL、抗β2-GP1抗体和两者之和在不同组的阳性率

患者组aCL、抗β2-GP1抗体和两者之和的阳性率显著高于对照组或正常组(P<0.01)；对照组和正常组两种抗体阳性率比较无明显差异(P>0.05)

3 讨论

抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid syndrome,APS)是一种抗体介导的非炎症性自身免疫性疾病。临床上以动静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现。血液中抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies,aPL)升高是其主要特征之一。抗磷脂抗体(aPL)是一族主要针对磷脂结合蛋白的异质性抗体,是一组针对血小板和内皮细胞膜上的磷脂结构抗原物质的自身抗体。aCL和抗β2-GP1抗体是其中重要的aPL[1]。

正常情况下，带有负电荷的心磷脂抗原(心肌、子宫居多)位于细胞膜脂质双层的内层，不被免疫系统识别。在某种因素作用下，抗原暴露或进入血循环，刺激机体产生aCL。aCL与内皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，直接造成血管内皮细胞损伤。通过作用于胎盘血管内皮细胞的膜磷脂，使前列环素合成释放减少，干扰血栓降解素及纤维蛋白溶酶系统活性的释放，影响蛋白系统的活化等多种病理机制，导致血流缓慢、血栓形成和滋养层细胞功能改变，形成胎盘梗死，胎儿宫内发育迟缓，胎死宫内，进而发生流产。本室检测结果，患者组aCL测定值22.1±6.2 RU/ml，较对照组14.0±4.3 RU/ml或正常组10.2±4.5RU/ml有明显差别(P<0.05)，其阳性率(12.8%)较后两者(分别是3.3%和3.0%)差异显著(P<0.01)，与资料报道一致但数值稍低[2-5]。

在β2-GP1刺激下产生的抗β2-GP1抗体在aPL和磷脂的结合中发挥着重要角色，一方面是诱导内皮细胞的激活从而形成容易发生血栓的促炎性状态，另一方面同时干扰β2-GP1对VWF依赖的血小板凝集的抑制作用，抗β2-GP1抗体与β2-GP1结合后，β2-GP1失去了原有的抗凝作用易形成血栓。抗β2-GP1抗体在β2-GP1介导下结合到细胞膜/磷脂膜上，导致细胞损伤[6]，血管内皮受损。抗β2-GP1抗体和β2-GP1结合后，可干扰抗凝血系统活化蛋白C的抗凝作用，活化血管内皮细胞及血液单核细胞，表达各种促凝物质，促进血小板粘附和血栓形成并且抑制内皮细胞前列腺素的合成释放[7]。抗β2-GP1抗体和β2-GP1形成复合物后，β2-GP1表面结构改变而出现被aCL识别的表位，从而发生反应；另一方面，aCL包括与β2-GP1结合的和不结合的，而后者与血栓的相关性不大，且容易出现假阳性，因此检测抗β2-GP1抗体较aCL更特异。本室检测结果，患者组抗β2-GP1抗体测定值14.6±4.8 u/ml，较对照组6.2±2.6 u/ml或正常组4.2±2.2 u/ml有明显差异(P<0.05)，其阳性率(7.9%)较后两者(分别是2.5%和3.0%)差异明显(P<0.05),类似相关报道[4,8-10]。

aCL和抗β2-GP1抗体联合阳性与血栓发生的相关性高[11]，同时检测这两种抗体，可提高诊断APS的阳性率，可达16.1%[4]，减少了漏诊,利于抗磷脂抗体综合征的诊断[7]。对于aCL和抗β2-GP1抗体这两种抗体的亚型，IgG相关性大于IgM。抗体浓度较低时，大多由IgM引起，较高时，大多由IgG所致。

生育障碍患者，aCL和抗β2-GP1抗体水平升高，血液处于高凝状态，血流缓慢甚至局部有微血栓形成，导致流产。患者组抗体阳性率高，血浆抗体含量高。对照病例中有2例抗体浓度高，接近正常值的2倍(正常值：aCL<12RU/ml,抗β2-GP1抗体<5u/ml),随访发现，有1例35周分娩，比正常早5周。正常组中，有2例抗体含量在正常值的1.5倍至2.0倍间，未随访到底，这有可能以后出现生育方面的问题。对于已确诊、因磷脂抗体高而不孕的妇女，随治疗的好转，抗体水平逐渐下降，有的已怀孕，未出现不良征兆，有望顺利分娩。

aCL和抗β2-GP1抗体检测的临床意义，不仅在于它是APS的诊断标准之一，更重要的是对导致不孕的原因进行干预、控制。育龄期妇女，早期和动态检测aCL和抗β2-GP1抗体可及时发现危险因素，预防疾病的发生。

参考文献：

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[10]刘静珠，林 丽，胡 静，等.抗β2-糖蛋白1抗体与反复自然流产的关系[J].吉林大学学报(医学版)，2006，32(3)：486.

[11]Pengo V,Ruffatti A,Legnani C,et al.Clinical course of high-risk patients diagnosed with antiphospholipid syndrome[J].Thromb Haemost，2010，8:237.