葡萄糖-6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断和治疗中的临床意义

姜国平,陈 琳,王晓红,吕英春,李慧颖,付 堃,陈 晶,樊智清,韩 梅*

(1.吉林省人民医院 血液风湿科,吉林 长春130021；2.吉林省人民医院 检验科)

类风湿关节炎(RA)是一种以关节受累为主要表现的全身性自身免疫病。RA患者体内存在多种自身抗原及相应抗体,而葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)既是一种在糖酵解和糖异生中起重要作用的酶类,又具有多种免疫学活性,国内外多种文献报道GPI是RA的一种自身抗原,可作为诊断RA 的一种新的指标[1,2]。本研究旨在检测RA患者治疗前后血清中GPI含量变化,进一步探讨GPI与RA疾病活动度的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象

1.1.1 RA组：选择自2008年1月至2011年6月在我院门诊和住院的RA患者50例,其中男性19例,女性31例,年龄19-58岁,平均年龄36岁。以上患者均符合2009年ACR与EULAR制定的RA分类(诊断)标准。

1.1.2 对照组 选择同期我院门诊和住院的其他风湿性疾病47例,其中男15例,女32例,年龄20-72岁,平均年龄47岁,包括SLE10例、PM/DM4例、pSS10例、UCTD2例、MCTD4例、BD3例、AS5例、OA7例、反应性关节炎2例,以上疾病均符合国际相应风湿病诊断(分类)标准。

1.2 检测内容

RA组：①0周、2周、4周、8周:检测血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、GPI、补体C3、补体C4、记录肿胀关节数、压痛关节数、计算DAS28；②0周、8周:检测RF、抗CCP抗体。

非RA组0周、8周:检测RF、抗CCP抗体。

1.3 实验方法

1.3.1 GPI抗原 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病人血清中的GPI。实验步骤：病人血清加入样品液中,检测时加阳性对照、阴性对照和GPI标准品(0、0.16、0.33、1.0、2.0、20.0 μg/ml)各100 μl,37℃1 h,弃样本后PBS洗板3次,再加入酶标记抗GPI抗体,37℃1 h,再次PBS洗板3次,加入OPD显色液100 μl显色10mit后,2 mol/L硫酸50 μl终止显色,酶标仪490 nm读板,参比波长630 nm。GPI的浓度大于0.25 μg/ml认为阳性。

1.3.2 抗CCP抗体的测定 应用ELISA法,抗CCP抗体>25 U/ml被认为阳性。

1.3.3 CRP、C3、C4、RF测定 用速率散射比浊法测定。

1.4 统计学处理

用Spearman’s rho相关分析评价GPI抗原与抗CCP抗体关系,用Pearon相关分析评价GPI与ESR、CRP、C3、C4、RF之间的相关性。

2 结果

2.1 抗CCP抗体、RF、GPI在RA组和非RA组阳性率如表1,其中抗CCP抗体和RF在两组之间存在统计学差异(P<0.05),而GPI在两组间无统计学差异(P>0.05)。

表1 抗CCP抗体、RF、GPI在RA组和非RA组阳性分布表

2.2 GPI抗原浓度在RA组和非RA组比较

0周时血清中GPI浓度RA组为0.38±0.14 μg/ml,非RA组为0.258±0.16 μg/ml,两组之间存在统计学差异(P<0.05)。见图1。

图1 0周时RA组和非RA组GPI浓度比较

2.3 RA组治疗后GPI的测定结果

在RA组分别检测第0、2周、4周、8周血清中的GPI浓度,其结果如下表2和图2。

2.4RA组50例患者第0、2周、4周、8周血清中的GPI浓度、血沉、C-反应蛋白、DAS28分值如下表3,在第2、4、8周时血沉、CRP明显下降,具有统计学差异(P<0.05),GPI抗原浓度和DAS28第4、8周具有统计学意义差异(P<0.05)。具体见下表3。

表2 RA组治疗前后GPI的测定结果

注：2周、4周、8周的GPI分别与0周时对比

图2 RA组治疗前后GPI浓度变化

表3 RA组患者治疗前后相关指标变化

注：各组2、4、8周数值与其对应0周相对比,*表示具有统计学差异P<0.05

3 讨论

类风湿性关节炎是一种滑膜炎症性关节炎,其发病与多种自身抗原以及抗体相关。2001年Schaller等[3]首次报道GPI与RA相关。近年来,关于GPI对于RA临床诊断价值,特别是GPI与抗-CCP抗体相比持有两种不同的观点,这也可能表明GPI不是RA的特异性抗原[4、5]。

目前抗CCP抗体和RF是诊断RA 的常用指标[6,7],在本研究中50例RA中GPI抗原的阳性检出率为68%,抗CCP抗体的阳性检出率为91.28%,RF的阳性检出率82.35%。本研究提示GPI抗原在诊断RA时阳性率低,对早期RA诊断意义不大。

在我们研究的50例RA患者中,GPI平均血清含量为0.38±0.14 μg/ml,高于疾病对照组,并且随着系统DEMARDs药物的治疗,患者血清中GPI含量明显下降[8]。应用相关分析发现血清GPI与RA病情活动指标关节压痛数、关节肿胀数、ESR 和CRP之间存在正相关,可见GPI与RA病情活动相关,而我们发现GPI与补体C3、C4之间无相关性,这与国内报道不一致,需进一步观察[9]。GPI诱导关节炎的可能的发病机制为：①可溶性GPI抗原与抗GPI抗体形成免疫复合物,沉淀在滑膜的滑膜动脉和毛细血管内皮细胞壁,通过FC受体介导替代途径,激活补体,诱导RA关节炎。②GPI抗原与抗GPI抗体结合,通过滑膜血管内皮细胞受体,直接黏附在内皮细胞表面,介导炎症细胞向关节局部的迁移。因而GPI血清中甚至是关节液中大高浓度与关节炎的活动相关,随着关节炎的好转GPI的浓度也随之下降。

综上,GPI抗原在RA诊断时阳性检出率有限,单独作为RA的诊断性指标意义不大,但是RA病情活动时患者血清GPI抗原含量明显增高,并且随着治疗的好转明显下降,与DAS28、血沉、RP下降相一致,因而可作为RA疾病活动度的判定指标。

参考文献：

[1]Scallme M,Stohl W,Benoit V,et al.Pationts with inflammatory arthritic diseases harbor elevated serum and synovial fluid levels of free and immune-complexed glucose-6-phosphate isomerase (G6PI)[J].Biochem Biophys Res Commun,2006,349(2):838

[2]陈 琳,王晓红,姜国平,等．检测抗环瓜氨酸抗体和葡萄糖6-磷酸异构酶对类风湿关节炎诊断意义的比较[J]．中国实验诊断学,2006,19(13)：1293.

[3]SchallerM,Burton DR,Ditzel HJ．Autoantibodies to GPI in rheumatoid arthritis：linkage between an animal model and human disease[J]．Nat Immunol,2001,2(8)：746.

[4]张 炯,邹和建,陈宇明,等．抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原对类风湿关节炎诊断价值的比较[J]．中华风湿病学杂志,2008,12(1)：33.

[5]Herye CA．Wair R,Venables PJ．Glucose-6-phosphate isomerase is not a specific autoantigen in rheumatoid arthritis[J]．Rheumatology(OXford),2003,42(3)：986.

[6]Szekanecz Z,SooS,Szabo Z,et al.Anti-citrullinated protein antibodies in rheumatoid arthritis:as good as it gets[J].Clin Rev Allergy Zmmunol,2008,34(1):26.

[7]Lee AN,Beck CE,Hall M.Rheumatoid factor and anti-ccp autoantibodies in rheumatoid arthritis:a review[J].Clin Lab Sci,2008,21(1):15.

[8]Dai L,Zhu,LJ,Zheng DH,et al.Elevated serum glucose-6-phosphate isomerase correlates with histological disease activity and clinical improvement after initiation of theraphy pations with rheumoid arthttis[J].J Rheumatol,2010,37(12):2452.

[9]丁荣梅,杨新玲,朱礼刚.活动性类风湿性关节炎患者血清葡萄糖-6-磷酸异构酶含量分析[J].中国实验诊断学,2012,16(1)：85.