HPLC法测定肠虫清胶囊中阿苯达唑的含量

游国叶，熊大伟

(信阳职业技术学院 药学院，河南 信阳 464000)

肠虫清胶囊的主药成分为阿苯达唑，阿苯达唑(Albendazole，ABZ)又名丙硫咪唑，化学名为5-丙硫基-1H-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，为一广谱高效低毒的驱虫药．该药由美国Smith Kline公司1977年首次上市，临床上广泛用于治疗各种蠕虫感染性疾病，其作用机理主要在于抑制虫体延胡索酸还原酶，阻止虫体能量的生成，从而达到杀灭虫体的目的。该药对人体及动物寄生的线虫、吸虫、涤虫均有强大的驱杀作用，并可显著抑制虫卵发育，在体内无积蓄作用，其驱虫谱、疗效及毒性等均优于目前已投产的其他抗蠕虫药物，该药现已被列入医保产品，成为临床上用于治疗各种蠕虫感染性疾病的首选药物[1]。在阿苯哒唑原料的现行标准中，其含量测定在美国药典29版、欧洲药典5.0版和中国药典2010年版[2]中均为滴定法，其胶囊剂含量测定在中国药典2010年版规定的方法为分光光度法，利用295nm处的吸收系数计算含量[2]。HPLC法测定阿苯达唑的含量的报道较为少见[3]，我们通过建立HPLC法测定肠虫清胶囊中阿苯达唑的含量，方法快速、准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters2695高效液相色谱仪，Waters2996紫外检测器 (美国Waters公司)；BP211D型半微量电子天平；PHS—2CA数字式酸度计(上海理达仪器厂)。

1.2 试药

肠虫清胶囊 (新乡市同心药业，批号20080110，20080113，20080117，规格0.2g)；阿苯达唑对照品 (中国药品生物制品检验所，批号100373-200301)；纯化水(新乡市平安药业有限公司)；甲醇为色谱纯(江苏国达，200704)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

阿苯达唑为碱性化合物，和硅胶柱的硅醇基有较强的相互作用，会造成强保留，因此应选择硅醇相互作用弱的色谱柱，Luna C18的硅醇相互作用约为0.2[3]，能够获得理想的分析结果。

流动相之一应该选择缓冲液，以获得稳定的保留时间，同时为了解决阿苯达唑的溶解性问题，选取0.1 mol/L醋酸铵缓冲液(用醋酸调节pH至3.1)。当缓冲液和甲醇的比例调整到40∶60时，阿苯达唑的保留时间在稳定在9.8 min左右。流量为1 mL/min，柱温20℃。

取阿苯哒唑对照品用醋酸溶解，流动相稀释成1 mg/mL，在200～400 nm的波长范围内扫描，阿苯哒唑在288 nm处有最大吸收，故紫外检测器的波长为288 nm。

所以色谱条件为：

色谱柱：Luna C18(5μm,(250×4.6)mm)；流动相：甲醇-0.1 mol/L醋酸铵缓冲液(用醋酸调节pH至3.1)(60：40)；检测波长：288 nm；流量：1 mL/min;进样量：20 μL；柱温：20℃。

在上述色谱条件下，阿苯达唑的色谱图见图1，和杂质峰的分离度大于1.5，拖尾因子1.03，理论塔板数按阿苯达唑计算大于3 500。

图1 阿苯达唑的色谱图

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取阿苯达唑对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，准确量取5.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，稀释成0.5 mg/mL对照品液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于阿苯达唑50 mg)，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察

精密称取干燥至恒重的阿苯达唑对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿苯达唑对照品储备液。分别准确量取1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0和10.0 mL阿苯达唑对照品储备液置10 mL量瓶中，加流动相定容，摇均，即成0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg/mL系列溶液，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以峰面积对浓度作线性回归，结果见图2。结果表明，阿苯达唑在0.1～1.0 mg/mL浓度范围内A=2.85×106C+6.5×104，r=0.999 5,线性关系良好。

图2 阿苯达唑的线性关系

2.4 精密度试验

取0.5 mg/mL阿苯达唑对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样6次，测定峰面积，精密度试验RSD为0.40%，精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一批号20080113样品，按2.3项下方法制备6份供试液，按2.1项下色谱条件进样，测定峰面积，重复性试验RSD为0.66%，重复性良好。

2.6 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品(20080113)细粉约50 mg，分别加入高、中、低(20 mg、40 mg、60 mg)不同量干燥至恒重的阿苯达唑对照品，各3份，按含量测定方法进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液在放置时间为0、2、4、6、10 h时进样，测定峰面积，稳定性试验RSD为0.52%，稳定性良好。

2.8 定量限

按信噪比为3(S/N=3)对最低检测限进行测定，结果表明，当进样浓度为0.25μg/mL时，阿苯哒唑峰信号约为基线噪音的3倍，即最低检测浓度为0.25μg/mL。

3 样品含量测定

取3批样品各20粒胶囊，倾出内容物，囊壳用小刷拭净，精密称定，精密称取适量(约相当于阿苯达唑50 mg)，按2.2.2项下方法制备供品溶液。分别取供试液和2.2.1项下对照品液，在2.1项下色谱条件进样，用峰面积外标法计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

注：样品含量计算方法为

4 讨论

阿苯达唑微溶于丙酮、乙酸，不溶于乙醇、水，溶于乙酸[3]，制约了流动相的选择，采用甲醇-醋酸铵缓冲液为流动相，通过调整流动相比例和PH值,既解决了溶解性问题,也获得了较好的系统适用性。

虽然药典规定的分光光度法在295 nm波长处测定吸收值，但在我们实验的色谱条件下，阿苯达唑的最大吸收在288 nm处，这是因为在pH3.1时，阿苯达唑以离子状态存在，共轭结构减少，最大吸收向短波方向移动。

与中国药典规定的分光光度法相比，本法能够排除杂质干扰，准确度高，重复性、稳定性好。

参考文献：

[1] 万启惠．广谱驱蠕虫新药—— 丙硫咪唑[J].遵义医学院学报，1988，11(1)：73-74.

[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M].北京：化学工业出版社,2005:290.

[3] 邵超.HPLC法测定阿苯达唑颗粒的含量[J].黑龙江医药，2011，3(5)：31.