三种大鼠脂肪肝模型的比较研究

叶虹婷 荣胜忠 靳 革

三种大鼠脂肪肝模型的比较研究

叶虹婷 荣胜忠 靳 革

目的 采用大鼠进行不同建模，并比较研究全面，寻找最佳的脂肪肝造模方法。方法 Wistar大鼠随机分四组：阴性对照组饲以普通饲料；模型A、B、C组饲以高脂饲料，A、B组分别每日以50%、40%乙醇灌胃；C组后肢皮下注射四氯化碳。实验7周，以断髓法处死大鼠，观察三种脂肪肝模型的肝脏病理学改变并进行比较分析。结果 A、B、C三组大鼠肝指数无明显差异，A组大鼠肝脏出现弥漫性中度脂肪变性，汇管区可见炎性细胞浸润；B组大鼠肝脏出现轻度脂肪变性，胞浆中可见大小不等的脂肪空泡； C组大鼠肝脏出现轻度脂肪变性，肝小叶可见点灶状肝细胞坏死，淋巴细胞浸润。结论 C组的造模方法简便易行，模型复制率高，为制备动物脂肪肝模型的首选。

脂肪肝；动物模型；大鼠

深入研究脂肪性肝疾病的发生机制、筛选防治脂肪肝的有效药物，首先必须选择一种理想的动物模型，其应与人类脂肪肝病特征相似，模型形成率高、病死率低、造模方法简便易行。本实验使用三种不同方法建立脂肪肝动物模型，旨在寻找最佳的脂肪肝造模方法，为今后的研究提供适宜的动物模型。

1 材料与方法

1.1 动物 选取健康Wistar大鼠40只，雄性25只，雌性15只，体重188～370 g。由牡丹江医学院动物室提供。

1.2 试剂 50%乙醇、40%的乙醇（沈阳新兴试剂厂生产的分析纯乙醇溶液，加蒸馏水稀释而成）；40%的四氯化碳（CC14）溶液（天津化学试剂厂生产的四氯化碳溶液，加菜籽油稀释而成CC14）。

1.3 饲料 90%基础饲料（牡丹江医学院实验中心提供）加10%猪油（自制）。

1.4 方法 将40只Wistar大鼠随机分成四组，其中模型A、B、C组分别为11只，阴性对照组为7只，按体重相近原则每2只一笼饲养。模型A、B、C组饲以高脂饲料，其中A、B组分别每日以50%、40%乙醇灌胃，C组后肢皮下注射CCl4。对照组使用基础饲料，每日按1 ml/100g体重以0.9%氯化钠注射液灌胃；动物建模7周，若在此期间死亡计入死亡率，实验结束前1 d晚上禁食，称重，断髓法处死，取肝脏称重。于肝中叶剪下8 mm×8 mm×4 mm大小的组织块，用80%乙醇固定，送病理室制成病理切片。

1.5 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计学处理，病死率比较采用χ2检验，肝指数比较采用F分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 成模率比较 模型A、B、C组大鼠病死率分别为27.3%、27.3%、18.2%，实验结束时总病死率为20.0%。死亡原因主要有初期注酒速度太快、超量，致吸入性肺炎和急性酒精中毒死亡。A、B、C三组模型组大鼠病死率差异无统计学意义（χ2=0.04，P＞0.05），见表1。

表1 四组大鼠的死亡率(n,%)

2.2 肝重与体重比例 肝指数以肝组织湿重/体重×100%计算，见表2。阴性对照组及模型A、B、C组大鼠肝指数差异无统计学意义（F=0.71，P＞0.05）。

表2 四组大鼠的肝指数(±s)

表2 四组大鼠的肝指数(±s)

组别 动物只数 肝指数(%) F值 P值模型A组模型B组模型C组阴性对照组7687 3.7±0.7 3.4±0.4 3.7±0.4 3.7±0.40.71＞0.06

2.3 手术所见 模型组肝脏表面包膜紧绷，阴性对照组光滑质地柔软。模型组有可触及小颗粒，压迫时可出现凹陷，表面色泽较苍白或带灰黄色，有油腻感。对照组切面未见黄色脂滴，组织结构较紧密，刀切时，硬度正常，刀面无沾染。

2.4 病理学显示 阴性对照组：肝细胞为多角形，胞浆嗜酸性着色，细胞核呈圆形，位于细胞的中央。肝细胞以中央静脉为中心呈放射状整齐排列。模型A组：肝脏弥漫性中度脂肪变性，在肝细胞胞浆中可见大小不等的脂肪空泡，细小空泡位于细胞核周围，较大空泡位于胞浆一侧，肝小叶结构未见明显异常。在汇管区可见炎性细胞浸润，见图1。模型B组：肝脏部分肝小叶轻度脂肪变性，在肝细胞胞浆中可见大小不等的脂肪空泡,细小空泡位于细胞核周围，较大空泡位于胞浆一侧。模型C组：肝脏弥漫性轻度脂肪变性，在肝细胞胞浆中可见大小不等的脂肪空泡，肝小叶结构未见明显异常。此外在肝小叶可见点灶状肝细胞坏死，淋巴细胞浸润，汇管区也可见淋巴细胞浸润，见图2。

图1 模型A组大鼠的肝脏组织学结构（HE染色×40）

图2 模型C组大鼠的肝脏组织学结构（HE染色×40）

3 讨论

脂肪肝从病因学上大体可分为酒精性和非酒精性脂肪肝[1]。要更好的对脂肪肝进行研究，就必须有较理想的动物模型。在脂肪肝的实验研究中，常利用乙醇灌胃、高脂饮食、注射药物或毒物等复制脂肪肝的动物模型。国内多采用赵静波等[2]的方法，给健康成熟雄性Wistar大鼠，用白酒灌胃，每次7 ml/kg体重，每日2次。1～2周后大鼠出现急性酒精性肝损伤表现。造模时间一般不超过10 d。但病死亡率较高。后肢皮下注射CCl4加喂食高脂饮食建立脂肪肝模型原理为CCl4进入体内后，影响代谢及能量的生成，使肝细胞发生变性、坏死，以及迅速出现脂肪变性、肝坏死等形态学改变[3]。三种造模方法都能成功建立脂肪肝模型，但是模型A、B组应用乙醇灌胃，实验动物易死亡；后肢皮下注射CCl4加高脂膳食建立大鼠脂肪肝模型的方法[4]，与人体慢性肝损伤过程在某些方面相似，且造模方法简便易行，模型复制率高，为急性中毒性脂肪肝模型的首选，是一种较好的造模方法。

[1] 孙璇.脂肪肝动物模型述评[J].中西医结合肝病杂志,1998(1): 251-253.

[2] 李东良,王玉枚.大鼠酒精性肝损伤模型的建立及病理学观察[J].实用肝脏病杂志,1998,3(4):207-208.

[3] 周玉娟,刘福林,张永健.脂肪肝的发病机制和治疗研究进展[J].临床荟萃,2005,20(6):350-352.

[4] 钟岚,范建高.非酒精性脂肪肝动物模型[J].国外医学消化分册,1996,31(1):27-27.

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1673-5846(2014)07-0266-02

牡丹江医学院公共卫生学院，黑龙江牡丹江 157011